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World File Search System培养箱
与Cultrex相比
2。pdec培养物pdec培养物是在蒙恩（Munne）详细介绍的。等，（2021）。Briefly, tumor material was processed into small fragments through incubation overnight (O/N) with gentle shaking (130 rpm) at 37 °C in MammoCult basal medium containing 0.2% of Collagenase A, MammoCult proliferation supplements, 4 μg/ml heparin, 50 μg/ml gentamicin, and penicillin/streptomycin (diluted 1:100).第二天将混合物以1300 rpm离心3分钟，然后将颗粒重悬于1 ml哺乳动物培养基中。碎片最近被分解，重悬于1.0％的growdex或未稀释的毛状膜中，并播种到8孔室载玻片中以进行3D培养。growDex。简短地，将500 µL的乳腺培养基放入Eppendorf管中，然后加入1 ml的growdex。这被充分混合并根据需要使用。总共在8孔室载玻片中添加了每孔的40μl基质，并补充了500μl乳腺生长培养基。将PDEC培养物在标准的细胞培养培养箱（37°C，5％CO₂）中孵育3天。表1中总结了
胱氨酸胰蛋白胨琼脂
包括布鲁氏杆菌、棒状杆菌、巴氏杆菌、肺炎球菌和链球菌等难培养菌，在适当的温度下无需添加增菌剂（1,11,12）即可在较长时间内生长。甚至一些对光敏感的厌氧微生物也可以在没有特殊条件的情况下在该培养基中生长，但在还原气氛中，它们会得到理想的生长。该培养基在新鲜配制时效率最高，但可以长期保存，但注意避免脱水。为此，强烈建议使用螺旋盖或适当密封。在有二氧化碳的培养基中，牛放线菌、漏斗状拟杆菌和细毛菌（8）等厌氧菌在该培养基中生长良好。添加碳水化合物后，它可用于研究不在酚红经典培养基中生长的微生物的糖发酵。通过酚红指示剂的颜色变化可以轻易观察到酸化。在半固体琼脂中，酸性反应很容易检测到，因为形成的酸不会像在肉汤中那样立即扩散到整个培养物中。当不存在可发酵碳水化合物时，大多数培养物都会出现碱性反应。在半固体培养基中很容易检测到运动性 (13)。运动性培养物远离接种线生长。非运动性生物沿着接种线在接种区域生长，而周围区域保持清洁。胰蛋白胨、L-胱氨酸提供支持苛刻微生物生长所需的营养。碳水化合物发酵是通过培养基的可见颜色变化来检测的，这是由于 pH 指示剂染料酚红的掺入。当生物代谢存在的碳水化合物时，会产生有机酸，培养基会变酸。然而，培养基中存在的蛋白胨也会被存在的细菌降解，产生 pH 呈碱性的物质。当碳水化合物发酵产生的酸量大于蛋白胨降解的碱性终产物时，酚红指示剂会从红橙色变为黄色。酚红的颜色变化发生在 pH 值 6.8 左右，接近培养基的原始 pH 值。在研究奈瑟菌属的发酵时，只接种管状培养基的表面。对于兼性生物，例如链球菌和严格厌氧生物，接种方法是用接种针刺入培养基中心，深度约为培养基深度的 1/2。根据所测试的生物，使用松开的盖子进行有氧或厌氧培养。奈瑟菌应使用松开的盖子培养（7）；如果在 CO2 培养箱中培养（3,10），则应在非 CO2 培养箱中使用紧密的盖子培养（3）。为了更快地生长和更快地进行发酵反应，厌氧培养物最好在 CO2 以及氢气或氮气存在下进行培养。
crispr-风险评估.pdf
在动物和细胞培养中的应用 1. 项目描述：将使用针对 [插入物种] 的 CRISPR 来灭活 [插入基因]，以创建 [插入疾病] 的模型。包括 CRISPR 的剂量：病毒载体、质粒、脂质体等。 2. 基因沉默的形式：您是尝试随机还是特定的基因沉默？沉默是一步到位（Crispr/Cas9 和 gRNA 结合在一个载体中）还是两步到位（创建含有 Crispr/Cas9 的细胞系，然后添加 gRNA）或购买含有 CRISPR-Cas9 的预转染细胞系，然后转染 RNA 指导序列？ 3. 遏制要求：通常所有涉及非病毒剂量的活动都采用 BSL-1 和化学卫生规范、遏制设备和设施。对于病毒载体 CRISPR，建议采用包括生物安全柜在内的 BSL-2 规范。离心机安全预防措施，用于培养箱和 BSC 之间运输的二级容器。不要用手触摸眼睛、鼻子和嘴巴，以避免粘膜暴露；护目镜或面罩可能有助于实现这一目标。4. CRISPR 注射给药注意事项：应尽量减少使用锐器。强烈建议在动物给药期间使用安全锐器技术。5. 泄漏：如果非病毒载体，请按照化学卫生计划进行清理。如果病毒载体，请遵循 BSL-2 泄漏说明。6. 生物危害废物：收集在双层红色袋子中并在硬质容器中运输。7. 批准的消毒剂：
直接父母 - 婴儿皮肤研究（ipistoss）：...
在斯堪的纳维亚半岛的抽象引入，有6％的婴儿出生于37周之前。不再在Utero环境中继续前进，而需要在新生儿单位中发生成熟，并支持重要的功能，而与母亲的温暖，营养和其他好处相距甚远。早产儿面临健康和神经发育的挑战，这些挑战也可能影响整个家庭和社会。有证据表明，立即和持续的皮肤接触（SSC）受益于期和中度婴儿及其父母，但在出生后立即开始时，它对它对不稳定的非常早产的婴儿的影响存在知识差距。在这项正在进行的随机对照试验中的方法和分析来自瑞典的Stavanger，挪威和斯德哥尔摩，我们正在研究150名婴儿在28+0至32+6妊娠周中出生的婴儿，随机在SSC出生后与父母或常规培养箱中随机接受护理。主要结果是根据早产评分心肺系统的稳定性心肺稳定性。次要结果是自主神经稳定性，热控制，感染控制，SSC时间，母乳喂养和生长，表观遗传学特征，微生物组轮廓，婴儿行为，压力恢复能力，睡眠完整性，皮层成熟，神经发育，神经发育，母亲依恋，母亲的依恋和调整以及父母的经验和父母的经验和精神健康。道德和传播该研究获得了瑞典道德审查局（2017/1135-31/3，2019–03361）和挪威地区道德委员会（2015/889）的道德批准。该研究是根据良好的临床实践和赫尔辛基宣言进行的。研究结果将增加有关
ISO/FDIS 7218
6 设备和耗材 ................................................................................................................................................................................................ 9 6.1 概述 ................................................................................................................................................................................................ 9 6.2 灭菌和其他加热设备 ................................................................................................................................................................ 10 6.2.1 概述 ...................................................................................................................................................................................... 10 6.2.2 高压灭菌器 ............................................................................................................................................................................. 10 6.2.3 培养基制备器 ............................................................................................................................................................. 11 6.2.4 蒸锅，包括沸水浴 ............................................................................................................................................. 12 6.2.5 灭菌炉 ............................................................................................................................................................................. 12 6.2.6 微波炉 ............................................................................................................................................................................. 13 6.2.7 加热板和加热套 ............................................................................................................................................................. 14 6.2.8气体燃烧器或金属线焚化炉 ...................................................................................................................................................... 14 6.3 控温设备和监控装置 ...................................................................................................................................................... 15 6.3.1 概述 ...................................................................................................................................................................................... 15 6.3.2 培养箱 ...................................................................................................................................................................... 15 6.3.3 恒温控制浴槽 ...................................................................................................................................................... 16 6.3.4 加热块 ............................................................................................................................................................................................................................. 17 6.3.5 冰箱和冷藏室 ...................................................................................................................................... 18 6.3.6 冷冻柜和深度冷冻柜/超低温冷冻柜 ................................................................................................ 19 6.3.7 温度监测设备，包括自动记录仪 ............................................................................................. 19 6.3.8 天平和重量稀释器 ...................................................................................................................................... 20 6.4 定量接种设备 ............................................................................................................................................. 21 6.4.1 移液器和移液器 ............................................................................................................................................. 21 6.4.2 分配器 ............................................................................................................................................................. 22 6.4.3 螺旋滴定仪 ............................................................................................................................................................. 24 6.5 防护柜 ............................................................................................................................................................................................. 24 6.5.1 描述 ............................................................................................................................................................................................. 24 6.5.2 使用 ............................................................................................................................................................................. 25 6.5.3 清洁和消毒 ............................................................................................................................................................. 25 6.5.4 维护和检查 ............................................................................................................................................................. 26........................................... 19 6.3.7 温度监测设备，包括自动记录仪 ...................................................................................................... 19 6.3.8 天平和重量稀释器 ........................................................................................................................................ 20 6.4 定量接种设备 ...................................................................................................................................................... 21 6.4.1 移液器和移液器 ...................................................................................................................................................... 21 6.4.2 分配器 ...................................................................................................................................................................... 22 6.4.3 螺旋滴管 ...................................................................................................................................................................... 23 6.4.4 连续稀释器 ...................................................................................................................................................................... 24 6.5 保护柜 ............................................................................................................................................................................. 24 6.5.1 描述 ............................................................................................................................................................................. 24 6.5.2 使用................................................................................................................................................................................................ 25 6.5.3 清洁和消毒 ................................................................................................................................................................ 25 6.5.4 维护和检查 ................................................................................................................................................................ 26........................................... 19 6.3.7 温度监测设备，包括自动记录仪 ...................................................................................................... 19 6.3.8 天平和重量稀释器 ........................................................................................................................................ 20 6.4 定量接种设备 ...................................................................................................................................................... 21 6.4.1 移液器和移液器 ...................................................................................................................................................... 21 6.4.2 分配器 ...................................................................................................................................................................... 22 6.4.3 螺旋滴管 ...................................................................................................................................................................... 23 6.4.4 连续稀释器 ...................................................................................................................................................................... 24 6.5 保护柜 ............................................................................................................................................................................. 24 6.5.1 描述 ............................................................................................................................................................................. 24 6.5.2 使用................................................................................................................................................................................................ 25 6.5.3 清洁和消毒 ................................................................................................................................................................ 25 6.5.4 维护和检查 ................................................................................................................................................................ 26................................ 21 6.4.2 分配器 ...................................................................................................................................................................................... 22 6.4.3 螺旋滴定器 ................................................................................................................................................................................ 23 6.4.4 连续稀释器 ................................................................................................................................................................................ 24 6.5 保护柜 ...................................................................................................................................................................................... 24 6.5.1 描述 ...................................................................................................................................................................................... 24 6.5.2 使用 ...................................................................................................................................................................................... 25 6.5.3 清洁和消毒 ...................................................................................................................................................................... 25 6.5.4 维护和检查 ...................................................................................................................................................................... 26................................ 21 6.4.2 分配器 ...................................................................................................................................................................................... 22 6.4.3 螺旋滴定器 ................................................................................................................................................................................ 23 6.4.4 连续稀释器 ................................................................................................................................................................................ 24 6.5 保护柜 ...................................................................................................................................................................................... 24 6.5.1 描述 ...................................................................................................................................................................................... 24 6.5.2 使用 ...................................................................................................................................................................................... 25 6.5.3 清洁和消毒 ...................................................................................................................................................................... 25 6.5.4 维护和检查 ...................................................................................................................................................................... 26........................................................................................................................... 25 6.5.4 维护与检查 ................................................................................................................................................ 26........................................................................................................................... 25 6.5.4 维护与检查 ................................................................................................................................................ 26
在轨道上生产病毒：轨道震荡病毒疫苗制造的最新进展
关键词：轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次，然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应（通常高于 80% pO 2 ）的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时，特定细胞生长率通常较低，并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气（气泡）而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题，评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略，从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外，还优化了灌注袋，以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统，可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中，在化学定义的培养基 CD-U3（Biochrom-Merck，德国）中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞（ProBioGen AG，德国）。对于灌注，使用了交替切向流系统（ATF2，Repligen，500 kDa 截止值）。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后，MOI 为 0.001，工作体积从 5 升增加到 9 升，同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度，以了解顶部空间通气的影响。总体而言，可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量，导致 HA 滴度高达 3.7 log 10（HA 单位/100 µL），感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体，而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止，AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞（例如在细胞堆栈中），这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里，我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞，以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此，HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养，细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升，使用 SB10-X OSB 生物反应器，摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染（包括 GFP 报告基因）。最后，转染后 48 小时，收获细胞和上清液进行 AAV 分离，并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高（基于 GFP 报告基因的转染率 >90%）且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好，因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批（5 L）范围内的制造相关 AAV 滴度。总之，在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。
孵化器原理和应用程序
实验室孵化器是一种旨在为微生物增长的控制环境的设备，使科学家可以研究和培养各种类型的细菌，霉菌和酵母。该设备以热电的原理运行，其中热能通过保持一致温度的恒温器转化为电能。不同微生物的理想温度各不相同，嗜嗜性细菌需要37℃，霉菌和酵母需要28°。孵化器的温度控制系统依赖温度传感器，控制器和承包商来确保精确的温度调节。实验室孵化器具有不同的零件，包括内部由铝制成的双壁柜和外部不锈钢，用玻璃羊毛隔热以防止热量损失。存储容量的范围从20升到800升。门具有视觉观察的玻璃，并由石棉垫圈密封，以维持气密的环境，防止热空气逃生和非紧密空气进入。控制面板位于机柜外部，并包含用于控制孵化器的各种参数的开关，包括通过恒温器进行温度设置。一些孵化器配备了HEPA过滤器，湿度和CO2控制系统，提供了一个闭环环境，以最大程度地减少污染风险。根据其大小和目的，实验室孵化器可以分类为冷却或冷藏类型，这些类型可提供精确的温度控制和空气循环风扇，以维持房间内的新鲜度。2。3。4。5。这些先进的特征在生物学和微生物学研究环境中至关重要，在研究微生物中，需要精确的环境条件。孵化器在实验室环境中起着至关重要的作用，通过为各种生物文化的增长和维护提供受控的环境。可以使用不同类型的孵化器，每种孵化器都满足特定需求，例如保持温度在20-25°C之间的低温孵化器，控制水分水平的湿度孵化器以及模仿某些微生物所需的无氧环境的CO2孵化器。摇动孵化器将运动/动摇功能与温度和湿度控制相结合，非常适合分子生物学和遗传学应用。台式/标准孵化器是最常见的类型，提供了从环境到100℃的宽温度范围，使它们成为微生物学，动物学和医疗实验室的多功能工具。使用孵化器时，至关重要的是遵循安全指南，例如避免不必要的门开口，保持适当的温度设置以及定期清洁以防止污染。维持微生物生长环境条件的最佳条件至关重要。孵化器中的热电机理维持各种应用的稳定参数 - 微生物培养物，细胞生长或温度敏感的过程。玻璃羊毛绝缘材料可减少能源使用，同时保持稳定的内部环境。6。7。玻璃羊毛隔热材料可减少热量损失和电力消耗，而架子在内壁上的内向延伸支持。门具有一个绝缘设计，带有一个玻璃面板，可在不打开的情况下观看，并带有一个易于操纵的手柄，控制面板在外墙和房屋的开关和指示器上进行了启动，包括固定式固定量。调整。穿孔的架子允许热空气流通，而在某些型号中可拆卸的架子有助于彻底清洁。AsbestosDoor垫片在机柜和门之间提供近水密封，防止外部空气浸润并保持隔离状态。湿度和气体控制机制调节内部的相对湿度和二氧化碳浓度。控制面板具有各种开关和指标，用于精确管理温度和湿度等参数。Inner投影支持架子，确保适当地放置培养基。用于实验室使用的孵化器：类型，功能和操作程序有各种类型的实验室孵化器可用，每种培养箱都旨在满足特定的需求和需求。用于温度监测--------------------------------------高级型号具有HEPA过滤器，以减少气流的污染，从而创建一个闭环系统，用于内部清洁空气。湿度和气体控制器还使用水库调节二氧化碳水平。实验室中的孵化器类型-------------------------------------------------------------------------- 1.8。9。冷却的孵化器：通过内部冷却系统和精确的温度调节，将温度保持在环境条件以下。摇动孵化器：结合了搅拌和温度控制，以实现最佳细胞发育，尤其对细菌培养和酵母生长有用。便携式孵化器：在偏远位置进行微生物测试，从而降低了运输过程中样本恶化的风险。台式孵化器：从室温到100°C，带有警报和带有时间和温度显示屏的玻璃门。二氧化碳孵化器：创建与人体环境相似的条件，保持37°C的温度，湿度超过90％，并且用于生物细胞培养的中性pH值。BOD孵化器：保持20-25°C之间的温度，非常适合生长酵母，霉菌和生物氧需求测试。光孵化器：模拟种子和植物的自然生长条件，同时进行各种材料的光稳定性测试。厌氧孵化器：创建无氧环境，对于培养挑战性厌氧生物所必需的无氧环境。恒定的温度和湿度孵化器：利用精确的控制系统来创建生物技术测试和工业研究所需的各种环境模拟条件。10。模拟孵化器：最简单的选项，尽管精确且缺少显示板以显示实际的腔室温度。11。数字孵化器：更昂贵但用户友好的设备，具有卓越的精度，并具有显示实时室内温度读数的显示板。2。3。4。5。孵化器的操作程序--------------------------------------------------------------- 1。电源：在进行任何操作之前，请确保与电源插座的安全连接。主电源开关：将其打开以开始计算机的初始化过程。红色功率旋钮：将此控件从0位置旋转到1，以正确激活系统。冷却机制：将冷却拨盘从位置0转到1以进行适当的温度调节。温度校准：通过使用“设置点-1”设置下较低温度将较低温度设置为21°C，同时用螺丝刀调整螺钉和RST螺钉。6。上限设置：按“设置点-2”将23°C建立为上阈值，同时修改设置/rst螺钉。7。温度监测：每天，早晨和晚上两次保持温度的适当记录，以获得最佳结果。实验室孵化器的使用在各个领域都广泛。这些设备为生长的微生物提供了最佳条件，并保持了长时间的生存能力。它们还用于生化研究，晶体发育，组织培养和环境监测。要有效地操作孵化器，必须执行操作前检查以确保从腔室中删除以前的项目，除非需要同时培养需要相同参数的多种生物体。在打开之前，应牢固地关闭门，并适当加热到通过温度计验证的所需温度。需要量身定制孵化周期，以满足最佳微生物生长的特定要求。参数构型可以为特定的二氧化碳浓度和湿度水平设置，如果需要特定的生物体生长。一些孵化器通过用胶带密封板来提供扩展的孵化，或者在最后的门锁和时机之前将其放在塑料容器中。这些仪器用于各种应用，例如微生物培养，培养，增强生长，生化研究，动物学应用，样品保存，食品分析，药物研究和晶体发展。实验室孵化器的优势包括能源效率，参数定制和环境稳定性。但是，它们也有诸如门管理之类的局限性，该局限性需要仔细处理以防止对存储的样品的污染风险，并且参数限制，这意味着只能一次在特定的环境条件下维持不同的文化。设备需要大量的金融投资和熟练的人员，以进行适当的运营和维护程序。预防措施以在扩展操作期间维持无菌环境，包括在孵化器架子下倒无菌水，以防止培养基变干。适当的参数监视对于确保在将培养板放置在机柜内之前确保所有必要的生长参数是必不可少的。这有助于为生物体开发创造最佳条件。培养板应始终将盖子放在底部的盖子上，以防止水冷凝到培养基表面上。定期清洁孵化器的内部对于防止有机体定居在货架上或在设备的拐角处收集至关重要。温度稳定性至关重要，应避免频繁的门开口，因为它可以显着影响机柜内部的细菌生长和发育。由于微生物敏感性，保持稳定的环境条件也很重要。必须在将培养板放入内阁之前建立和稳定。此外，必须采取凝结预防措施，例如倒置在底部的盖子倒置，以防止水凝结到生长培养基上。定期维护孵化器的内部，可以防止有害的生物体定居在表面和角落。在扩展操作过程中放置无菌水的位置也有助于维持媒体水分。导致不规则或不成功的孵化，至关重要的是要注意，卵孵育的理想温度可能会因孵化的卵种而异。例如，某些爬行动物和鸟类可能需要比鸡蛋的温度更高或较低。操作员应彻底研究其孵化的鸡蛋的特定温度要求，以确保将孵化器设置在正确的温度下。孵化器可以在没有电力的情况下起作用的持续时间取决于孵化器类型，鸡蛋阶段和环境温度等因素。但是，扩展的停电会导致卵失去水分，导致异常或失败的孵化。通常，为鸡蛋设计设计的孵化器通常可以承受几个小时而不会造成电力而不会损害鸡蛋的孵化器，前提是环境温度保持适中。在高级发育阶段的鸡蛋可能对温度和湿度波动更敏感，并且更容易受到停电的影响。在这种情况下，必须尽快恢复动力，以保持卵的最佳环境。如果孵化器长时间无电，则可能有必要丢弃鸡蛋并从新鲜的鸡蛋开始。氧气对于孵化器内的卵发育至关重要。卵内的胚胎使用氧作为生长和发育的能量来源。没有足够的氧气，胚胎可能无法正常发育，并且可能经历异常或失败的孵化。孵化器旨在为鸡蛋提供控制环境，包括调节氧气水平。大多数孵化器具有通风系统，可循环新鲜空气并保持设备内部的适当氧气水平。值得注意的是，卵孵育的特定氧气需求可能会因物种而异。某些鸡蛋可能需要比其他鸡蛋更高或更低的氧气水平。操作员应研究其孵化的卵的特定氧气需求，以确保最佳环境。孵化器通常不需要直接供水，因为鸡蛋不直接与水接触。但是，保持孵化器内的湿度对于卵发育至关重要。这可以通过控制二氧化碳水平或使用水锅或托盘来实现。后者是一个容器，可容纳水并调节孵化器内部的湿度。在孵化器中，水锅或托盘有助于保持理想的湿度水平。该水源应在孵化器内部蒸发并增加湿度时保持充足。特定的湿度需求因物种而异，因此操作员必须研究其孵化的每种鸡蛋的需求。