传统上,采用多瘤病毒DNA复制分析的选择性低分子量DNA提取HIRT提取方法,一种多步骤,劳动密集型和耗时的程序。DNA复制结果在复制样品之间通常不一致。为了提高多瘤病毒DNA复制测定法的效率和可重复性,我们使用Qiagen自旋柱技术和HIRT提取技术比较了DNA质量和产量。在转染后第2、4和第6天收集了用SV40 DNA转染的CV-1细胞,并使用Qiagen自旋柱和HIRT提取方法提取DNA。使用32个P线性的全长SV40 DNA探针进行了南部杂交。病毒DNA复制进行定量,并比较了两个程序获得的结果。Southern印迹分析显示,使用Qiagen自旋柱技术恢复了一致和增强的SV40 DNA恢复,并且在6天期间的病毒DNA复制在一式三份样品中可重现。此外,Qiagen自旋柱技术减少了从24小时获得多瘤病毒复制测定的高质量DNA所需的时间。采用这种提取程序将改善多瘤病毒DNA复制活性的确定,同时减少研究者对有毒有机化合物的暴露和处置。©2004 Elsevier B.V.保留所有权利。
摘要:BK 多瘤病毒 (BKPyV) 衣壳突变在肾移植 (KTx) 接受者体内积累,病毒持续复制。这些突变与中和逃逸有关,似乎是由于宿主细胞 APOBEC3A/B 酶使胞嘧啶脱氨而产生的。为了研究患者体内发生的致突变过程,我们扩增了 VP1 基因的分型区,对扩增子进行了 5000-10,000 × 深度测序,并确定了罕见突变,这些突变与 COSMIC 突变特征相吻合。在携带 BKPyV 基因组的质粒的扩增子中确定了背景突变,并与来自法国和越南的 23 名 KTx 接受者的 148 个样本中观察到的突变进行了比较。在尿液、血清和肾脏活检样本中持续观察到三种突变特征,其中两种,SBS2 和 SBS13,与 APOBEC3A/B 活性相对应。此外,在患者样本和体外感染 BKPyV 的细胞中均检测到了第三个病因不明的特征 SBS89。定量上,尿液样本中的 APOBEC3A/B 突变率与尿液病毒载量密切相关,并且似乎因人而异。这些结果证实,APOBEC3A/B 是患者 BKPyV 基因组突变的主要来源,但并非唯一来源。
多瘤病毒BK DNA BKV DNA QN多瘤病毒BK DNA BKV病毒属于多瘤病毒家族,并已暴露于世界各地的大多数人(超过70%的人口)。在呼吸道或口腔道路上感染。对BK病毒的原发性感染通常在儿童期发生,此后该病毒在各种组织(主要是泌尿生殖道)中仍然潜在。免疫能力的人通常有无症状的原发性感染。病毒可能在免疫健康患者(主要用肾脏和骨髓移植的移植器官,HIV阳性)中重新激活,导致多膜病毒肾病(PVAN),尿道狭窄和晚期出血性膀胱炎。要研究的材料,将其采用,发送和保存BKV DNA QN:
TX I. 的BK病毒筛查和治疗指南。TX I.目的 - 概述肾脏移植后BK病毒血症的评估和管理。II。 设置 - 住院和门诊III。 定义BK多瘤病毒是肾移植后与多瘤病毒相关的肾病(BKVAN或PYVAN)的主要原因,并在干细胞移植(HCT)中与PYV相关的出血性膀胱炎(HCT)。 pyvan和pyvhct)在非kidney SOT中很少见。 另外,已经描述了孤立的脑炎,肺炎,结肠炎,造血综合征和尿路上皮癌的孤立病例。 BKV疾病几乎完全发生在免疫功能低下的宿主中,但需要特定于患者和临床环境的其他因素才能展现其致病性影响。 肾移植功能障碍和失败是BK病毒血症的最大风险。 早期识别和干预降低了移植失败的风险。 风险因素包括供体因素,例如最近的病毒暴露,女性性别,HLA不匹配;接受者因素,例如年轻年龄,男性,高度敏感的状态;其他因素,例如输尿管支架,ATN,急性排斥治疗,类固醇,淋巴细胞耗尽剂,由于Pyvan引起的移植物损失后重新移植。 iv。 策略1。 筛查和诊断:尿液BK PCR:不建议将尿液BK PCR作为筛查测试;不是针对疾病b。 等离子体BK PCR:推荐的筛选方法。 存在存在分析可定性性,应使用同一实验室进行串行监视。 诊断滴度>在3周内进行2次测量中的1,000份/ml。II。设置 - 住院和门诊III。定义BK多瘤病毒是肾移植后与多瘤病毒相关的肾病(BKVAN或PYVAN)的主要原因,并在干细胞移植(HCT)中与PYV相关的出血性膀胱炎(HCT)。pyvan和pyvhct)在非kidney SOT中很少见。另外,已经描述了孤立的脑炎,肺炎,结肠炎,造血综合征和尿路上皮癌的孤立病例。BKV疾病几乎完全发生在免疫功能低下的宿主中,但需要特定于患者和临床环境的其他因素才能展现其致病性影响。肾移植功能障碍和失败是BK病毒血症的最大风险。早期识别和干预降低了移植失败的风险。风险因素包括供体因素,例如最近的病毒暴露,女性性别,HLA不匹配;接受者因素,例如年轻年龄,男性,高度敏感的状态;其他因素,例如输尿管支架,ATN,急性排斥治疗,类固醇,淋巴细胞耗尽剂,由于Pyvan引起的移植物损失后重新移植。iv。策略1。筛查和诊断:尿液BK PCR:不建议将尿液BK PCR作为筛查测试;不是针对疾病b。等离子体BK PCR:推荐的筛选方法。存在分析可定性性,应使用同一实验室进行串行监视。诊断滴度>在3周内进行2次测量中的1,000份/ml。c。屏幕每月x 9个月,然后季度x 2年x 2年;然后每年x 5年tx d。每当进行移植功能障碍,进行活检或拒绝治疗后筛选e。尿液细胞学:“诱饵细胞”的存在是BK复制的标志物,不一定表明肾病f。肾脏活检:BKN DX的金标准;组织学, +免疫组织化学测试。如果有肾功能障碍的证据,请获得;或者,如果PT的减少拒绝风险增加,例如高度敏化,则具有DSA或重新移植的PT。如果没有排斥的风险因素并且肾脏FX处于基线为基准,则不需要活检。g。得分:BKN H的班夫得分。如果在没有肾功能障碍的情况下检测到的BK病毒载荷高于阈值,请在3周内重复确认;如果增加,则减少进行,如下所述。
不应发展抵抗。此外,由于不同的病毒使用重叠的细胞途径和因素来支持其复制(4)和抗病毒防御系统通常以这些常见途径为目标,因此HTA可以表现出广泛的光谱活性(5)。因此,HTA具有治疗病毒疾病的类别,而病毒剂跨越了多个病毒家族。重要的是,广谱HTA具有在大流行时提供快速治疗溶液的潜力,从而减少了新型病毒鉴定和药理干预之间的时间(6,7)。超出了这种定期需求,HTA可以治疗患有不同家族病毒感染风险的患者,例如在免疫抑制治疗期间患有疱疹病毒,帕托病毒,多瘤病毒,肝瘤病毒,肝癌,肝癌和可可菌感染风险升高的患者(8、9)。
不应发展抵抗。此外,由于不同病毒使用重叠的细胞途径和因素来支持其复制(4)和抗病毒防御系统通常以这些常见途径为目标,因此HTA可以表现出广泛的光谱活性(5)。因此,HTA具有治疗病毒疾病的类别,而病毒剂跨越了多个病毒家族。重要的是,广谱HTA具有在大流行病开始时提供快速治疗溶液的潜力,从而减少了新型病毒鉴定和药理干预之间的时间(6,7)。超出了这种定期需求,HTA可以治疗患有不同家族病毒感染风险的患者,例如在免疫抑制治疗期间患有疱疹病毒,帕托病毒,多瘤病毒,肝瘤病毒,肝癌,肝癌和可可菌感染风险升高的患者(8、9)。
致癌病毒是可导致肿瘤的病毒。目前有七种病毒被确认为人类致癌病毒:爱泼斯坦-巴尔病毒 (EBV)、卡波西肉瘤相关疱疹病毒 (KSHV,也称为 HHV8)、人乳头瘤病毒 (HPV)、乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)、人类 T 淋巴细胞病毒-1 (HTLV-1) 和默克尔细胞多瘤病毒 (MCPyV)。感染这些致癌病毒导致的临床表型范围从无症状感染到侵袭性癌症。患有先天性免疫缺陷 (IEI) 的患者容易患上由窄谱或广谱病原体引起的传染病,在某些情况下包括致癌病毒。对 IEI 患者的研究加深了我们对控制 EBV、HHV8 和 HPV 感染的非冗余机制的理解。导致易患致癌 HBV、HCV、HTLV-1 和 MCPyV 表现的人类遗传因素仍不清楚。我们在此简要回顾目前已知的 IEI 导致易患严重感染致癌病毒的情况。
1. 法国图尔大学 UMR INRAE ISP 1282“多瘤病毒感染生物学”团队,31 Avenue Monge,37200 图尔,3; clara.esnault31@gmail.com (欧盟); serge.guyetant@univ-tours.fr (新加坡); patricia.berthon@inrae.fr (PB); antoine.touze@univ-tours.fr (奥地利); thibaultkervarrec@yahoo.fr (TK) 2 维尔茨堡大学医院皮肤病学、性病学和变态反应学系,Josef-Schneider-Straße 2, 97080 Würzburg,德国; Schrama_d@ukw.de(DS); houben_r@ukw.de (RH) 3 图尔大学病理学系,CHU de Tours,Avenue de la République,37170 Chambray-les-Tours,法国 4 McSAF,1 rue Claude Thion,37200 Tours,法国; audrey.desgranges@mcsaf.fr (广告); camille.martin@mcsaf.fr (CM); marieclaude.viaudmassuard@mcsaf.fr (M.-CV-M.) 5 分子和治疗创新团队 (IMT)、细胞创新和靶向小组 (GICC) EA7501,图尔大学,31 Avenue Monge,37200 Tours,法国 6 图尔大学皮肤病学系,CHU de Tours,Avenue de la R épublique,37170 Chambray-les-Tours,法国 * 通讯地址:samimi.mahtab@yahoo.fr
化学和生物学的水污染物的复杂性需要有效且可行的治疗方法。在此,使用氮化碳催化剂的光催化臭氧处理有效地用于消除靶向化学污染物的混合物,以及在实际的次级含水量中的大肠杆菌细菌和人类多瘤病毒JC(JC病毒)。在使用尿素和三聚氰胺作为前体制备的催化剂中比较了去角质处理。物理治疗没有明显增强基于尿素的催化剂,而三聚氰胺基(36MCN)材料的结构的改善和MELEM异质结的形成增加了其催化特性。在两组污染物中,光催化的臭氧化系统都优于光解臭,尤其是在臭氧消耗方面。最好的催化剂36mcn,导致消除化学,细菌和病毒污染物所需的臭氧剂量下降57.5%,33.0%和29.0%。羟基自由基还显示为污染物消除的钥匙。臭氧的较高的自由基生产和分解是可能的迹象表明,石墨氮化碳光催化臭氧化的性能更好,这是有效的第三级废水替代方案。
BKV 检测是一种体外定量实时 PCR 检测,在 Roche cobas® 6800 系统上进行。该检测已获得 FDA 批准,可检测和定量感染患者在 cobas® PCR 培养基中稳定的 EDTA 血浆和尿液中的 BKV DNA。对于 EDTA 血浆样本,该检测可报告范围为 21.5 IU/mL 至 1.0E+08 IU/mL,对于尿液样本,该检测可报告范围为 200 IU/mL 至 1.0E+08 IU/mL。请注意,没有转换因子可将当前以拷贝/mL 报告的检测结果转换为 IU/mL。较高的 BKV DNA 水平与肾移植接受者和造血干细胞移植 (HSCT) 接受者患多瘤病毒肾病和出血性膀胱炎的风险增加有关。cobas® BKV 的结果旨在用于帮助管理移植患者的 BKV。检测结果应与临床症状和相关实验室检查结果结合使用。检测结果不能作为患者管理决策的唯一依据。检测将在每周二和周五进行。可接受的样本:5 毫升全血,收集在 BD Vacutainer ® PPT™ 血浆制备管中或以 EDTA 为抗凝剂的无菌管中(淡紫色上管)。对于尿液收集,请参阅下面使用 Cobas PCR 培养基的程序。可靠的结果取决于正确的样本收集、储存和处理程序。