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马铃薯 ( Solanum tuberosum ) 是一种高度多样化的四倍体作物。优良品种杂合性极强,品种内和品种间短片段多态性 (indel) 和单核苷酸多态性 (SNP) 的发生率很高,在 CRISPR/Cas 基因编辑策略和设计中必须考虑这些因素才能获得成功的基因编辑。在本研究中,对马铃薯品种 Saturna 和 Wotan 中葡聚糖水双激酶 (GWD)1 和抗霜霉病 6 (DMR6-1) 基因分别进行深入测序,结果显示与杂合二倍体 RH 基因组序列相比,四倍体与二倍体相比,存在 indel 和 1.3 – 2.8 的高 SNP 发生率。这使向导 RNA (gRNA) 和诊断性 PCR 设计变得复杂。细胞库(原生质体)水平的高编辑效率对于实现四倍体中的完全等位基因敲除以及减少下游繁琐而精细的植株再生至关重要。在这里,CRISPR/Cas 核糖核蛋白颗粒 (RNP) 通过聚乙二醇 (PEG) 介导的转化瞬时递送到原生质体中。对于 GWD1 和 DMR6-1 中的每一个,设计了 6 – 10 个 gRNA 来靶向包含两个基因的 5 ' 和 3 ' 端的区域。与包括多种生物体的其他研究类似,单个 RNP/gRNA 的编辑效率差异很大,并且一些产生了特定的插入/缺失模式。尽管与靶向 3′ 端相比,靶向 GWD1 5′ 端的 RNP 产生的编辑效率明显更高,但 DMR6-1 5′ 端和 3′ 端的编辑效率似乎有些相似。当仅靶向 GWD1 基因的 3′ 端时,同时用两个 RNP 靶向 5′ 端或 3′ 端(多路复用)对总体编辑产生了明显的正协同效应。与单个 RNP/gRNA 转化中获得的编辑效率相比,位于不同染色体上的两个基因的多路复用对单个 RNP/gRNA 编辑效率没有影响或略有负面影响。这些初步发现可能会引发更大规模的研究,以促进和优化植物的精准育种。
第3章 - 一般操作。。。。。。。。。。。。。。。。。。33 300-对力的抵抗 /使用响应。。。。。。。。。。。。。34 301-使用力审查板。。。。。。。。。。。。。。。。。43 302-手铐和约束。。。。。。。。。。。。。。。。。46 303-控制设备。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。51 304-进行的能量装置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。56 305-涉及军官的枪击事件和死亡。。。。。。。。。。。63 306-枪支。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。72 307-车辆追求。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。82 308-脚追随。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。95 309-官员对电话的反应。。。。。。。。。。。。。。。。。100 310-家庭暴力。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。104 311-搜索和癫痫发作。。。。。。。。。。。。。。。。。。。110 312-虐待儿童。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。113 313-成人虐待。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。120 314-歧视性骚扰。。。。。。。。。。。。。。。。。126 315-失踪人员。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。131 316-公共警报。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。138 317-受害者和证人协助。。。。。。。。。。。。。。。。141 318-仇恨犯罪。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。144 319-行为标准。。。。。。。。。。。。。。。。。。。146 320-信息技术使用。。。。。。。。。。。。。。。。。153
范围:为戴斯空军基地的第 7 远程监视站建造一个新的后勤和战备燃料中队 (LGRF) 行政和实验室设施,包括行政空间、指挥空间、实验室空间、物理控制能力和靠近加油卡车场。该建筑包括一个单层设施,带有钢筋混凝土钻孔墩基础、承重砌体墙、外部绝缘饰面系统、轻型钢屋顶框架上的直立锁边金属屋顶和内部装饰。该设施还包括实验室设备,包括接地导轨、水槽、橱柜、水过滤、通风外壳和专用供暖、空调和排水系统;基地宽燃料系统控制接口;电气;安全通信;根据 AFI 32-1062 连接备用发电机;大众通知系统;以及灭火和报警系统。该项目建造了一个小型金属建筑,两端都有高架分段门,用作设备储存。这座建筑将被封闭,但不需要照明、管道、冷却或绝缘。 * 信息提交更改。