• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(货号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,货号 635013)用于对额外的板进行分类
5.采集前摇匀尿样 6.揭开防护贴,露出 采集孔 8.采集后应立即温和上 下颠倒样本保存管10次 9.将采集杯拧紧废弃, 取样本保存管检验 7.分别取2支样本保存管, 将管帽朝下插入采集孔并 下压,穿刺针刺穿丁基胶 囊,使尿液充分吸入管内 (每支10 ml)
摘要 本报告涉及坐标测量机 (CMM) 系统误差行为的建模和估计。我们描述了这些参数误差的两类模型,基于轴与轴行为构建的运动学模型和可以模拟任何可重复误差行为的更通用的经验模型。然后,我们开发了一个全面的数学模型,用于根据标准工件(例如球孔板)的测量来确定 CMM 的参数误差,并描述了从此类数据确定相对无偏和有效参数误差估计的算法。这些算法已在软件中实现,经过设计,可以满足任何参数误差模型、球板几何形状和测量策略的需求。该软件还计算拟合参数和相关量的标准不确定度。我们在数值模拟中使用该软件来分析测量策略在统计精度 Gf.parametric 6r.r.er.estimates 方面的有效性。AUmerical-expeRlBent& 表明,采用精心设计的策略,仅使用有关球板的最少量的校准信息就可以提供参数误差的准确估计,但其他设计或估计器可能会给出较差和/或有偏差的估计。
摘要 本报告涉及坐标测量机 (CMM) 系统误差行为的建模和估计。我们描述了这些参数误差的两类模型,基于轴与轴行为构建的运动学模型和可以模拟任何可重复误差行为的更通用的经验模型。然后,我们开发了一个全面的数学模型,用于根据标准工件(例如球孔板)的测量来确定 CMM 的参数误差,并描述了从此类数据确定相对无偏和有效参数误差估计的算法。这些算法已在软件中实现,经过设计,可以满足任何参数误差模型、球板几何形状和测量策略的需求。该软件还计算拟合参数和相关量的标准不确定度。我们在数值模拟中使用该软件来分析测量策略在统计精度 Gf.parametric 6r.r.er.estimates 方面的有效性。AUmerical-expeRlBent& 表明,采用精心设计的策略,仅使用有关球板的最少量的校准信息就可以提供参数误差的准确估计,但其他设计或估计器可能会给出较差和/或有偏差的估计。
每种药物的耐药细胞系(红色标记)将接受化学探针库处理,以识别化疗增敏剂。在 384 孔板中,类器官细胞将单独接受化合物库处理,或与亚致死剂量的治疗药物联合使用。我们将识别仅在联合使用时才显示毒性的化学探针(图 1C)。在准备筛选时,确认了 384 孔板中的接种一致性(图 1D)。为了进行质量控制(Z 因子和 Z-Prime 因子),每个筛选板将包含阳性和阴性对照。单一药物和联合使用后的活力数据
悬浮细胞:在制备复合物之前,板3-5 x10 5细胞在没有抗生素的0.8 mL无血清培养基中。2。对于每个转染样品,请在无菌微中心管中准备络合物,如下所示:解决方案A:对于6孔板,在125μl无血清的无血清,无抗生素的培养基中,稀释的合成miRNA,每个孔的浓度为42-840 nm。有关其他菜格式,请参阅表1。每个孔中的最终miRNA浓度通常为5–100 nm。
15. 将 Matrigel 包被的培养板和 hiPSC 培养基预热至 20-25 C。16. 从预包被的培养板中吸出 Matrigel 并加入 hiPSC 培养基(6 孔板每孔 2 ml)。17. 将 9 ml hiPSC 培养基加入到 15 ml 离心管中。18. 将低温小瓶直接转移到 37 C 水浴中并观察解冻过程。当管中大部分内容物解冻并仅剩下一小块冰时,迅速取出并用 70% 乙醇彻底清洗。19. 小心地将细胞逐滴转移到准备好的带有培养基的 15 ml 离心管中。以 200 3 g 的速度离心 5 分钟。20. 小心吸出上清液。将沉淀物悬浮在 hiPSC 培养基(例如 1 ml)中,并接种到准备好的 Matrigel 包被的培养板上。前 24 小时加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M)。21. 如果 24 小时后细胞附着良好,则用 hiPSC 培养基更换培养基。如果附着力较低,再加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M),培养 24 小时。从第二天开始,每天更换培养基,每孔(6 孔)加入 2 ml hiPSC 培养基。继续“hiPSC 传代和维护”,步骤 1-8。
a 乌迪内大学医学系(DMED),乌迪内 33100,意大利 b 阿维亚诺肿瘤学参考中心 (CRO),IRCCS,阿维亚诺 33081,意大利 c 乌迪内大学医学系医学肿瘤学诊所,IRCC OSPEDALE POLICLINICO SAN MARTINO,GENOVA,ITALY D 16132,ISTITUTO NAZIONALE TUMORI,IRCCS,FONDAZIONE G. PASCALE,NAPOLI 80131,ITALY ENAPERITY e II II II II II II II II II II II II II IIRE,NAPIRE,NAPILE,NAPERITY,NAPERITY,NAPIRE,NAPILE,NAPILE,NAPILE,NAPILE,NAPIRE,NAPIRE,NAPILE,NAPILE,napluty圣拉菲尔大学,米拉诺,20132年,意大利G妇产科单位,IRCCS San Raffaele科学研究所,米兰,20132年,意大利H肿瘤学部门 - 纳帕尔大学临床医学和外科系,纳帕利大学纳帕利II “ IRCCS,ROMA 00168,意大利J padova大学肿瘤学和胃肠病学系35122,意大利K肿瘤学2,威尼托肿瘤学研究所IOV-IRCCS,PADOVA,35128 ,Genova大学医学院,Genova 16132,意大利o泌尿外科和妇科系,Istituto Nazionale肿瘤IRCCS“ Fondazione G. Pascale”,Napoli 80131,意大利possology oppedaliero-Univeria Qunia qorena q. napoli 80131,意大利p摩德纳(Modena)和雷吉奥·艾米利亚(Reggio Emilia),意大利摩德纳41124 R romagnolo irccs iStituto romagnolo per lo Studio dei肿瘤 (IRST) “Dino Amadori”,意大利梅尔多拉 47014 s 实验和临床药理学部门,阿维亚诺肿瘤学参考中心 (CRO) IRCCS,阿维亚诺 33081,意大利 t 分子医学和医学生物技术系,那不勒斯费德里科二世大学,那不勒斯 80131,意大利 u 临床病理学部门,圣乔瓦尼·阿多洛拉塔医院,罗马 00184,意大利 v 米开朗基罗基金会,米兰 20121,意大利 w 分子肿瘤学部门,阿维亚诺肿瘤学参考中心 (CRO) IRCCS,阿维亚诺 33081,意大利