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World File Search System敲入
序号 招标公告 委托支出与负担法官员注释 1 竞争性招标...
在确定中标人时，中标价格为投标文件中所载金额（单价）加上10%（减税率项目为8%）。因此，无论投标人是消费税和地方消费税的应税企业还是免税企业，投标人均须在投标文件中载明相当于预计合同金额的110/100（减税率项目为108/100）的金额。但不包括投标书所记载的写明金额与消费税法所规定的消费税计税基础不符的情况。 投标文件所记载的金额的110/100（减税率项目为108/100）对应的金额，如果含有未满1日元的小数，则小数部分将被四舍五入，将小数部分四舍五入后的金额作为实际获得金额。但是，对于单价合同，不进行四舍五入，且视为报价为招标文件所载金额（单价）的 110/100（对于减税率项目，则为 108/100）的金额。
利用同源性独立的 CRISPR/Cas9 精准基因组编辑快速高效生成敲入人类类器官
预印本（未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此版本的版权所有者于 2020 年 1 月 15 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.01.15.907766 doi：bioRxiv 预印本
招标公告（机械设备制造）
中标人应为在根据预算和会计法令第 79 条制定的估计价格限额范围内提交最低有效投标的投标人。但若认为中标人的投标价格有可能导致中标人不按照合同内容履行合同，或者与其订立合同有扰乱公平交易秩序之虞，且极不适当时，得在估价限度内以最低投标人为中标人。 （6）确认委派的监理工程师
公告第26号 招标公告（建筑工程）
“获得参加比赛的资格。” )，并在“管道工程”、“水道设施工程”或“机械设备安装工程”中取得等级，并希望参加近畿中部防卫局的投标（对于根据《企业重组法》（2002 年法律第 154 号）提出启动重组程序申请的公司或根据《民事再生法》（1999 年法律第 225 号）提出启动再生程序申请的公司，该公司必须在决定启动程序后重新获得等级）。 （3）根据《公司重组法》被提起重组程序启动申请的人，或根据《民事再生法》被提起重组程序启动申请的人
招标公告编号 M024 - 宇治市
指检查总部、地方防卫局以及联合参谋本部、陆上自卫队参谋长、海上自卫队参谋长或航空自卫队参谋长主管的陆上自卫队、海上自卫队、航空自卫队机关及防卫技术后勤局。同下。 )（包括原防卫设施管理署及原防卫设施管理分署）依据防卫设施管理署实施的建设工程承包人建设业绩评估指南（建设业绩评估第220号（CCP））所制定的建设业绩评估通知（以下简称“建设业绩评估通知”），13.12.19）及
使用 i-GONAD 生成 Flag/DYKDDDDK 表位标签敲入小鼠，可检测内源性 CaMKII 和蛋白质
摘要：特异性抗体对于蛋白质复合物的细胞和组织表达、生化和功能分析必不可少。然而，制备特异性抗体通常费时费力。将内源性蛋白质的表位标记在适当的位置可以克服这个问题。在这里，我们使用 AlphaFold2 蛋白质结构预测研究了表位标签位置，并结合 CRISPR-Cas9 基因组编辑和电穿孔 (i-GONAD) 开发了 Flag/DYKDDDDK 标签敲入 CaMKII α 和 CaMKII β 小鼠。使用 i-GONAD，可以将长达 200 bp 的小片段插入目标基因的基因组中，从而实现高效便捷的小表位标记。使用市售的抗 Flag 抗体进行实验，可以通过蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫组织化学轻松检测内源性 CaMKII α 和 β 蛋白。我们的数据表明，通过 i-GONAD 生成 Flag/DYKDDDDK 标签敲入小鼠是一种有用且方便的选择，特别是在没有特定抗体的情况下。
HiHo-AID2：提高纯合敲入效率可实现人类生长素诱导的降解细胞的强劲生成
背景 生长素诱导降解 (AID) 技术可通过化学遗传学控制蛋白水解 [ 1 ]。为了应用 AID，需要通过基因工程将不稳定肽或“降解决定子”标记到目标蛋白上。生长素受体（如 Os TIR1）在相同细胞中外源表达，作为 Skp1-Cullin1-TIR1 (SCF TIR1 ) 泛素连接酶复合物的底物识别亚基发挥作用。生长素（如吲哚-3-乙酸，IAA）作为化学胶水连接 SCF TIR1 泛素连接酶和降解决定子标记蛋白，导致降解决定子标记蛋白快速多泛素化和蛋白酶体降解 [ 1 , 2 ]。 AID 能够快速高效地降解靶蛋白，避免长期沉默或 CRISPR 敲除过程中出现的副作用，并为理解动态生物过程中不同靶蛋白的功能提供了重要的机制见解 [ 3 – 7 ]。然而，一些障碍限制了我们充分发挥 AID 潜力的能力。