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World File Search System无标记
使用摄影测量法和运动结构对地面雷达干涉测量的变形图进行配准和可视化
干涉数据与来自地面摄影测量和运动结构 3D 点云。在确定内在和外在方向参数后，将地面雷达干涉测量获得的数据投影到点云上，然后投影到初始照片上。在照片上可视化边坡变形测量值可提供易于理解和分发的信息产品，尤其是对于难以接近的目标区域，例如陡峭的岩壁或岩石坠落区。比较了四种方法的参考步骤和最终可视化的适用性和误差传播：(a) 使用测量相机和立体图像摄影测量的经典方法；(b) 使用测量相机获取的图像，使用运动结构自动处理；(c) 使用数码紧凑型相机获取的图像，使用运动结构处理；(d) 无标记方法，使用数码紧凑型相机获取的图像，使用运动结构，无需人工地面控制点。完全无标记方法可用于高分辨率雷达干涉测量的可视化，有助于生成可供解释的可视化产品。
3D等离子分子纳米复合材料的电化学合成，用于原位标记的无分子检测
基于表面增强的拉曼s骨（SERS）分子检测的可靠性。因此，在热点处的3D散装溶液中，无限分子的精确放置仍然是获得超敏感和可再现的无标记 - 无分子检测的目标。已经提出了一些用于定位靶标分子的方法，包括使用生物感受器[4-6]增强分子相互作用并进行电动作用。[7-9]受体分子为靶分子提供了特定的结合位点。但是，由于受体和靶分子之间的结合事件高度依赖于靶分子在散装溶液中的分子扩散，因此使用这种被动扩散过程很难实现实时检测。对于基于溶液的检测系统，电动驱动被认为是一种有前途的方法，可以通过电溶剂在热点区域浓缩带电的小痣。[7-9]但是，由于纳米级热点与大型大型杂菌质量之间的大小不匹配，因此这些常规的SERS平台不能很好地适应对呼吸道病毒的无标记和快速检测。尽管可以通过电泳吸引≈100nm的病毒粒子颗粒，但由于其结构上的复杂性和较大的尺寸，它们可能不适合纳米级热点。
高通量 PROTAC 化合物筛选工作流程，用于在 Orbitrap Astral 质谱仪上进行靶向蛋白质降解，并进行准确的无标记定量
靶向蛋白质降解 (TPD) 是药物发现中一种新兴的变革性策略，它利用细胞蛋白质降解过程来选择性消除有害蛋白质。通过实现与泛素化蛋白酶体系统的诱导接近，小分子促进致病蛋白质的降解，为以前所未有的精度和功效针对多种疾病靶向以前无法用药的蛋白质打开了大门 (图 1)。直接设计能够选择性促进诱导接近的化合物在实践中具有挑战性，因此具有可靠定量准确性的化合物筛选是 TPD 领域药物发现的关键阶段。需要对大量化合物进行准确定量筛选，这使得基于高通量质谱的工作流程成为确保准确鉴定先导化合物的不二选择。
期刊预校样
摘要：微机电系统 (MEMS) 的最新进展为生物和化学分析物的无标记检测 (LFD) 带来了前所未有的前景。此外，这些 LFD 技术提供了设计高分辨率和高通量传感平台的潜力，并有望进一步小型化。然而，将生物分子固定在无机表面上而不影响其传感能力对于设计这些 LFD 技术至关重要。目前，自组装单层 (SAM) 的共价功能化为提高检测灵敏度、可重复性、表面稳定性和结合位点与传感器表面的接近度提供了有希望的途径。在此，我们研究了使用化学气相沉积 3-（缩水甘油氧基丙基）-三甲氧基硅烷 (GOPTS) 作为多功能 SAM 对 SiO 2 微悬臂阵列 (MCA) 进行共价功能化，以实现具有皮克灵敏度的碳水化合物-凝集素相互作用。此外，我们证明了使用传统压电微阵列打印机技术将聚糖固定到 MCA 是可行的。鉴于糖组的复杂性，以高通量方式发现样本的能力使我们的 MCA 成为分析碳水化合物-蛋白质相互作用的稳健、无标记和可扩展的方法。这些发现表明，GOPTS SAM 为 MEMS 提供了合适的生物功能化途径，并提供了可以扩展到各种 LFD 技术以实现真正高通量和高分辨率平台的原理证明。
用于耳念珠菌基因组编辑的无标记 CRISPR 介导系统揭示了 Cas5 在卡泊芬净反应中的保守作用
摘要 耳念珠菌是一种近期在世界范围内出现的耐多药人类真菌病原体。它可导致人类危及生命的播散性感染，死亡率高达 50%。其耐多药性和致病特性背后的分子机制尚不清楚。目前用于耳念珠菌基因组编辑的方法很少，所有这些方法都依赖于限制可进行的修改数量的选择标记。在这里，我们介绍了一种无标记的 CRISPR/Cas9 介导的耳念珠菌基因组编辑系统。利用该系统，我们成功删除了感兴趣的基因，然后在所有五个耳念珠菌进化枝的分离株中的天然位置重建它们。该系统还使我们能够引入精确的基因组编辑来创建翻译融合和单点突变。使用 Cas5 作为此系统的测试案例，我们发现 Cas5 在白色念珠菌和耳念珠菌之间的卡泊芬净反应中起着保守作用。总体而言，开发一种可在耳念珠菌中精确且简便地进行基因组编辑的系统，该系统可以以高通量的方式进行编辑，这是提高我们对这种重要的人类真菌病原体的了解的重要一步。
使用基于深度学习的无标记跟踪在深脑刺激植入帕金森氏病的过程中自动提取上limb运动学活性：概念验证研究
最佳的深脑刺激（DBS）治疗治疗运动障碍通常依赖于术中运动测试来确定目标测定。但是，在当前的实践中，运动测试依赖于主观解释和电机信息的相关性。计算机视觉的最新进展可以提高评估准确性。我们描述了我们对基于深度学习的计算机视野的应用，以进行无标记的跟踪，以测量接受DBS手术的患者的运动行为，以治疗帕金森氏病。视频记录是在术中术中获得的（n = 5患者），作为精确植入DBS电极的护理标准的一部分。运动学数据。手动和自动化（精度为80.00％）的方法都用于从阈值衍生的运动学幻觉中提取运动学发作。通过对抛物线贴合拟合进行建模上肢挠度来压缩主动运动时期。半监督分类模型，支持向量机（SVM），对抛物线拟合拟合定义的参数进行了训练，可靠地预测运动类型。在所有情况下，跟踪均经过良好的校准（即，重新投影像素误差0.016-0.041;准确性> 95％）。SVM预测的分类表现出很高的精度（85.70％），包括两个常见的上肢运动，臂链拉力（92.30％）和手工夹（76.20％），并使用每位患者的剩余过程验证了精度。常规电机测试程序这些结果表明，对于评估DBS手术的最佳大脑目标至关重要的运动行为的成功捕获和分类。
推出用于活细胞分析的 Incucyte® AI 细胞健康分析软件模块
无标记细胞活力分析。用浓度不断增加的抗 CD20 抗体利妥昔单抗和生物仿制药 Truxima ® 处理 Ramos B 细胞淋巴瘤细胞系，并使用 Incucyte ® AI 细胞健康分析量化细胞死亡。生物仿制药 mAb 利妥昔单抗和 Truxima ® 诱导 Ramos 细胞死亡的功效相似。未经处理的细胞是健康的，被归类为活细胞（绿色分割），而经过处理的细胞则显示部分细胞死亡（红色分类）。
棉花分生植体的直接种系转化，没有选择
没有可选标记的转基因植物的再生可以促进性状堆叠产品的开发和商业化。已经开发了各种策略来消除可选标记以生产无标记的转基因植物。最广泛使用的无标记方法可能是基于农杆菌的2 T-DNA策略，其中利率基因（GOI）和可选标记基因从独立的T-DNA中传递（Darbani等，2007）。可选标记基因在随后的几代中脱离了GOI。然而，由于T-DNA共转化的不确定和GOI和可选标记基因T-DNA之间的高率，该2 T-DNA系统的效率远小于传统的1 T-DNA系统。相比之下，没有选择转换使用带有GOI的单个T-DNA，因此消除了删除可选标记插入物的需要，并有可能提供可行的替代标记系统。在这项研究中，我们报告了通过无需使用选择性剂的种子分生植物的农杆菌接种种植的转基因棉植物的成功再生。通过GUS组织化学测定，鉴定出推定的转基因植物的再生。通过GUS表达通过花粉粒，未成熟胚胎和T1植物的分离来确定转基因向后代的种系传播。通过南部分析进一步确认了结果。在此无选择系统中，无标记转换频率与当前的分生组织转换系统相似（0.2％ - 0.7％）。讨论了进一步改进该系统的策略及其在改善棉花转化管道和开发无基因基因组编辑技术方面的意义。
使用 CRISPR 基因编辑技术开发的第二代利什曼病疫苗，该疫苗含有无标记减毒利什曼原虫株
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是 由 此预印本的版权持有者（此版本于 2020 年 5 月 5 日发布。 ; https://doi.org/10.1101/2020.05.04.077115 doi: bioRxiv preprint
CRISPR/Cas 与核糖核蛋白复合物和瞬时选择端粒载体可在灰葡萄孢菌中实现高效的无标记和多重基因组编辑
CRISPR/Cas 已成为多种生物体中遗传操作的最先进的技术，能够以前所未有的效率进行有针对性的遗传改变。本文中，我们报告了在重要的坏死性植物病原体灰霉病中首次建立强大的 CRISPR/Cas 编辑，该方法基于将优化的 Cas9-sgRNA 核糖核蛋白复合物 (RNP) 引入原生质体。通过开发一种将 RNP 递送与含端粒的瞬时稳定载体共转化相结合的新策略，进一步提高了编辑产量，从而允许临时选择和方便地筛选无标记编辑事件。我们证明，与现有的基于 CRISPR/Cas 的丝状真菌方法（包括模型植物病原体稻瘟病菌）相比，这种方法提供了更高的编辑率。编辑菌株的基因组测序显示很少有额外的突变，也没有 RNP 介导的脱靶证据。端粒载体介导编辑的高性能通过随机诱变 sdhB 基因的 272 个密码子得到证实，该基因是琥珀酸脱氢酶抑制剂 (SDHI) 杀菌剂抗性的主要决定因素，方法是将 272 个密码子批量替换为编码所有 20 种氨基酸的密码子。在没有选择的情况下，所有交换的频率都相似，但 SDHI 选择允许识别新的氨基酸替换，这些替换赋予了对不同 SDHI 杀菌剂的不同抗性水平。基于 RNP 的共转化效率提高且易于操作，有望加速 B . cinerea 和其他真菌的分子研究。