自 2019 年 12 月中国武汉市首次报告一组“不明原因肺炎”病例以来,仅用 18 个月的时间就取得了巨大进展——从 2020 年 1 月鉴定和测序致病病毒 SARS-CoV-2 的基因组,到开发使用 PCR 检测(2020 年 1 月)3、中和抗体检测(2020 年 5 月批准)4 和横向流动检测(2020 年 11 月确认足够准确)5 对该病毒进行有效的检测。此外,自发现以来,对 COVID-19 临床表现的认识已经从发烧、呼吸困难和胸部 X 光片上的双肺侵袭性病变 1 发展到影响心脏、肾脏和胃肠道等多个器官系统的更全身性疾病 6。降低死亡率的治疗方法已在试验中并纳入临床实践,例如对住院患者使用地塞米松 7 。人们已发现并追踪 SARS-CoV-2 的新变种 8 。最后,也是最重要的一点,人们已研制出多种针对 COVID-19 的有效疫苗 9-11 。
2,021,规定了补充健康范围内的程序和健康事件清单,以规范用于测量与活动性结核病病例接触的儿童中潜伏性结核病检测干扰素γ释放的程序测试的强制性覆盖范围;在护理疑似有结核病(TB)体征和症状的艾滋病毒感染者(PLHIV)期间,使用横向流动试验检测尿液中的脂阿拉伯甘露聚糖(LF-LAM)进行筛查和诊断的程序;用于治疗结核病 (TB) 的一线药物(利福平、异烟肼和乙硫异烟胺)耐药性的线探针杂交试验(LPA 1st line)的程序;采用线性探针杂交试验(LPA 2nd line)来检测治疗结核病的二线药物(氟喹诺酮类和氨基糖苷类/环肽类)的耐药性;以及用于避孕的激素皮下植入手术,以防止育龄成年人意外怀孕,符合第 4 条的规定。 10,法律编号 9,656/1998。
摘要:随着分子检测从诊断实验室转移到现场检测变得越来越普遍,对基于核酸的诊断工具的需求突然增加,这些工具具有选择性、灵敏度、对地形变化的灵活性,并且具有成本效益,可以协助即时诊断系统进行大规模筛查,并在疫情爆发和大流行时在偏远地区使用。基于 CRISPR 的生物传感器是一种很有前途的核酸检测新方法,该方法使用 Cas 效应蛋白(Cas9、Cas12 和 Cas13)作为极其专业的识别组件,可与各种读出方法(如荧光、比色法、电位法、横向流动测定等)结合使用,进行现场分析。在本综述中,我们介绍了将 CRISPR Cas 系统与传统生物传感读出方法和扩增技术(如聚合酶链式反应 (PCR)、环介导等温扩增 (LAMP) 和重组酶聚合酶扩增 (RPA))相结合的一些技术方面,并继续阐述所开发的生物传感器在检测一些主要病毒和细菌疾病方面的前景。在本文的范围内,我们还讨论了最近的 COVID 大流行以及自其问世以来经过开发的众多 CRISPR 生物传感器。最后,我们讨论了 CRISPR Cas 系统在即时检测中的一些挑战和未来前景。
引言内源性胰腺β细胞质量和功能的增加将解决胰岛素缺乏症患者造成的危害。营养暴露,例如高血糖(1),高脂肪饮食(2、3)和其他营养过多的范式(4)通过有丝分裂的输入促进β细胞增殖,从而在下流信号上融合以横向流动,从而横向传播细胞周期的G1/s(3,5,5,6)。另一方面,通过β细胞死亡(7)和去分化(8,9)可能会损失胰岛素分泌能力;一些数据表明,人类2型糖尿病(T2D)中β细胞质量的减少可能已经高估了(10)。尽管如此,β细胞再生场中的关键障碍是增加了替补的策略也可能导致去分化(8、9、11)。胰岛素受体底物– 2(IRS-2)的全身缺失导致T2D样综合征由于β细胞功能降低和肿块而表现出明显的胰岛素耐药性(12,13)。通过抑制键β细胞因子PDX1(9,14),在该模型中远端胰岛素信号通路成员叉子盒蛋白O1(FOXO1)的因素推导。irs2 - / - β细胞也因细胞周期蛋白D2的诱导降低而对葡萄糖的增殖反应受损,并且恢复细胞周期蛋白D2丰度挽救了增殖到正常水平(15)。Cyclin D2,是产后β细胞膨胀的驱动因素和胰岛素抵抗的β细胞补偿(1,16-20),与Cyclin依赖性
同样,如果两个检测结果独立,则出现两个假阴性结果的可能性会降至 9%。含义很明显:即使是不准确的检测也能告诉我们一些信息。或者,引用世界卫生组织的话:“检测,再检测,再检测”。如果有一个实时更新的数据库,记录世界各地实验室的即时检测,这一策略的使用将变得更加容易。该数据库可由世界卫生组织等国际组织建立,其中将列出实验室和检测名称、检测检测到的抗体(例如 IgG、IgN 或两者 7 )、检测方法(例如横向流动免疫测定)及其准确性和可重复性、周转时间、检测试剂盒成本和样品处理成本。有了这些信息,政府和国际组织就可以为科学家提供建议,告诉他们哪种廉价检测组合最适合特定国家。第三,考虑一种快速廉价的测试,假阳性率为 30%,为简单起见,假阴性结果为零。首先,可以用这种测试测试许多人,然后用高精度测试测试阳性的子集。这节省了稀缺但准确的测试试剂盒的使用,同时允许比使用少数准确测试试剂盒进行更广泛的测试。简而言之:“测试、分类、重新测试”。最后,如果获得的样本可以“支持”多次测试,那么聪明的策略可以使昂贵的 RT-PCR 测试更便宜。一些德国医院正在使用从十个医院收集的样本进行“区块测试”。
经验较低的人可能无法将假单胞菌与其他密切相关的假单胞菌属分化。或Burkholderia spp。此外,培养方法至少需要3-7天才能确定可能为时已晚的细菌,并且共同感染或污染可能是一个很大的障碍,因为B. pseudomallei的生长非常慢。5–7因此,对于患者,尤其是在败血症病例中,早期识别和治疗是必需的。血清学技术已经开发出用于诊断黑凝集病(例如间接血凝(IHA),免疫荧光测定法(IFA)和酶连接的免疫吸收测定法(ELISA)的血清学技术。这些具有敏感性和特异性的方法尚未开发用于早期诊断。8–10已经开发了一种分子技术聚合酶链反应(PCR),但由于其直接检测血液中的假单胞菌的敏感性较低,因此并非常规实践。11横向流动式插电(LFD)是一种检测方法,可以在5-10分钟内通过裸眼来读取作为护理点测试(POCT),不需要特殊的训练。2014年,Raymond L.等。报道了使用B. pseudomallei Capsular多糖(CPS)作为临床患者样品检测的抗原的原型LFD分析的原型。这些技术的特异性高达97.2%(35/36),检测极限与ELISA在0.2 ng/ml时相当。12,当使用临床样品时,它给出了低灵敏度。开发了几种用于检测假子芽孢杆菌的PCR分析,需要3-6小时。对于常规诊断而言,结果并不令人印象深刻。11 div>
esearchers from France's Institute of Electronics, Microelectronics and Nanotechnology (IEMN) and Siltronic AG in Germany claim the first demonstration of high-current operation (above 10A) for vertical gallium nitride (GaN)-based devices on silicon substrates [Youssef Hamdaoui et al, IEEE Transactions on Electron Devices, vol.72(2025),否。1(1月),P338]。 团队评论说:“二极管提供了一个未经原理的高州河流电流,直径超过11.5a。 这既归因于反向N-FACE欧姆接触的优化,也归因于实施厚的铜电镀,将硅底物代替为散热器。”这些设备使用了完全垂直的,而不是垂直的结构 “伪垂直”是指所有触点在芯片或晶圆的前面进行的设备。 虽然设备主体中的电流流在此类排列中大约垂直,但电流在N-Contact层中横向流动。 结果是流动效应倾向于降低伪垂直设备的能力处理能力。 完全垂直的结构有望更高的击穿电压,并降低了抗压电压。 在硅底物上生产,而不是碳化硅或散装/独立式gan,也应使GAN设备在低成本应用中更具竞争力。 通过金属有机化学蒸气沉积(MOCVD)制备了两个六英寸的gan/si晶状体(图1)。 一个晶圆具有4.5µm轻轻的N掺杂(N - )漂移层。 另一个晶圆具有一个7.4µ流的漂移区域。1(1月),P338]。团队评论说:“二极管提供了一个未经原理的高州河流电流,直径超过11.5a。这既归因于反向N-FACE欧姆接触的优化,也归因于实施厚的铜电镀,将硅底物代替为散热器。”这些设备使用了完全垂直的,而不是垂直的结构“伪垂直”是指所有触点在芯片或晶圆的前面进行的设备。虽然设备主体中的电流流在此类排列中大约垂直,但电流在N-Contact层中横向流动。结果是流动效应倾向于降低伪垂直设备的能力处理能力。完全垂直的结构有望更高的击穿电压,并降低了抗压电压。在硅底物上生产,而不是碳化硅或散装/独立式gan,也应使GAN设备在低成本应用中更具竞争力。通过金属有机化学蒸气沉积(MOCVD)制备了两个六英寸的gan/si晶状体(图1)。一个晶圆具有4.5µm轻轻的N掺杂(N - )漂移层。另一个晶圆具有一个7.4µ流的漂移区域。根据电化学电容 - 电压(ECV)测量值,漂移层中的硅掺杂浓度为3x10 16 /cm 3,净离子化电子密度为9x10 15 /cm。较厚的漂移层应承受更高的电压,但要以更高的抗性为代价。在弱梁暗场模式下使用透射电子显微镜(TEM)的检查确定螺纹位错密度〜5x10 8 /cm 2。霍尔效应测量值的漂移层迁移率为756cm 2 /v-s。P-I-N二极管是制造的,从用作边缘终止的深斜角台面开始。通过血浆反应离子蚀刻(RIE)和电感耦合等离子体(ICP)蚀刻进行深度蚀刻。边缘终止的目的是将电场散布在交界处,并减少泄漏。
摘要:大肠癌是全球癌症死亡的第三大最常见的恶性肿瘤,也是第二个主要原因。多项研究已将患者血清中癌细胞的抗原水平与疾病预后不良联系在一起。因此,检测低水平的癌症抗原的能力在较早的疾病诊断,评估和复发监测中应用。现有的癌症抗原检测方法通常需要多种试剂,训练有素的操作员或复杂的程序。一种减轻这些问题的方法是横向流量测定,这是一个基于纸张的平台,允许在复杂混合物中检测和量化目标分析物。测试很快,是护理点,拥有较长的保质期,并且可以在环境条件下存储,使其非常适合在各种设置中使用。虽然侧向流程通常使用球形金纳米颗粒来产生经典的红色信号,但最近的文献表明,球形的替代形态可以提高检测的极限。在这项工作中,我们报告了替代金纳米颗粒形态的应用,金纳米形状(长度约为35 nm)和金纳米酮(直径约为90 nm),用于癌甲型抗原的横向流量测定法。在比较测定中,与市售的球形金纳米颗粒相比,对于相同的抗体载荷和总金含量而言,金纳米酮的检测极限约为2倍,而每种测试中金纳米酮的数量〜3.2×x降低。在全面优化的测试中,使用金纳米酮获得了14.4 pg/mL的限制,比以前报道的基于金纳米粒子基于金纳米粒子的癌细胞抗原抗原横向流动测定法相比有24倍改善。关键字:黄金,纳米颗粒,侧流测定,癌症,生物标志物,等级纳米颗粒,定量,癌症抗原
2019 年 12 月,一种新型冠状病毒被确定为导致中国武汉爆发疾病(COVID-19)的原因。这种病毒被称为严重急性呼吸综合征冠状病毒 2(SARS-CoV-2),可引起上呼吸道感染,大多数感染者会出现咳嗽、发烧和呼吸困难等常见轻微症状,但也可能引发炎症并发症(如肺炎、多器官功能障碍综合征),需要重症监护,不幸的是,还会导致患者死亡。2020 年 3 月,世界卫生组织 (WHO) 宣布 COVID-19 疫情为大流行,迄今为止(2020 年 10 月),全球已感染超过 4450 万人,死亡人数超过 100 万 [1,2]。鉴于 COVID-19 疫情的急剧蔓延带来的卫生和社会紧急状况,需要快速、准确和灵敏的诊断技术来及时提供准确的病毒检测,以便及早识别感染,改善患者管理,并阻止和控制疾病传播。事实上,可靠且早期诊断 COVID-19 已成为正确管理大流行的主要挑战之一。目前的诊断技术主要依赖于聚合酶链反应 (PCR) 测试 [3、4]。PCR 检测包括通过酶介导的目标基因扩增来检测和识别病毒的特定基因组物质 (RNA)。大多数获批的 COVID-19 PCR 试剂盒都针对特定序列,如 RdRp、E、N 或 ORF1ab 基因,这些序列对应于病毒基因组中高度保守的区域。PCR 测试提供了所需的灵敏度和特异性以及临床稳健性,但是结果生成时间相对较长(2 到 6 小时)并且需要将样本运送到专门的实验室,这会过度延迟诊断结果并妨碍大规模人群筛查 [5]。已经提出了新的 PCR 相关方法,例如环介导等温扩增或滚环扩增,以及寻求即时 (POC) 基因组检测的新兴 CRISPR 技术,尽管它们在临床中的快速实施仍然很复杂 [6-8]。基于横向流动检测 (LFA) 的快速抗原诊断测试是一种很好的替代方案,可提供快速检测(约 15 分钟)。这些免疫层析试纸通过夹心检测检测病毒抗原,主要是 N 蛋白。然而,它们通常灵敏度低、可靠性低,尤其是在病毒载量较低的情况下 [9,10]。此外,血清学检测也被用作补充诊断技术,与传统技术(化学发光或酶免疫吸附测定)一起使用,或用于 LFA
直接从痰液中直接从痰液中检测到结核病检测的流线型护理点测试。 5,6,Padmapriya Banada 2,#,Yingda L. Xie 2,#,Cameron Myhrvold 1,7,8,9,#,#,†1普林斯顿大学分子生物学系,普林斯顿新泽西州,新泽西州普林斯顿大学,08544,美国08544,美国,美国2公共卫生研究所,新吉尔特吉尔特尔医学院,新吉尔斯医学院,新泽西州,新泽西州,新泽西州。 Epidemiology of Microbial Diseases, Yale School of Public Health, New Haven, Connecticut, United States of America 4 Pulmonary, Critical Care, and Sleep Medicine Section, Yale School of Medicine, New Haven, Connecticut, United States of America 5 Centro Internacional de Entrenamiento e Investigaciones Médicas (CIDEIM), Cali, Colombia 6 Universidad Icesi, Cali, Colombia 7 Department of Chemical and Biological工程,普林斯顿大学,新泽西州普林斯顿大学,美国08544,美国8 Omenn-Darling Bio Giogineering Institute,普林斯顿大学,新泽西州普林斯顿大学,新泽西州,08544,美国9美国,普林斯顿大学,普林斯顿大学,普林斯顿大学,新泽西州,新泽西作者同样贡献#这些作者同样贡献†相应的作者:cmyhrvol@princeton.edu摘要结核分枝杆菌(MTB)是对全球健康的主要威胁,每年造成超过100万人死亡。我们试图开发一种基于CRISPR的等温测定法,再加上兼容,直接的样品处理技术,用于护理点。为了阻止病例的潮流并最大程度地提高了早期干预措施的机会,迫切需要在资源不足的地区负担得起,简单的结核病诊断手段。在这里,我们将重组酶聚合酶扩增(RPA)与CAS13A和CAS12A相结合,以创建两个并行的单锅测定,它们检测MTB的两个保守元素(IS6110和IS1081)和一个内部对照人类DNA。这些测定显示与横向流相兼容,并且很容易冻干。我们的最终测定在痰液中的各种细菌载荷(10 5至10 2 CFU/mL)上表现出敏感性。对于M. Bcg的M. Bovis bcg的M. BCG,测定法检测限为69.0(51.0 - 86.9)CFU/ML的MTB菌株H37RV为MTB菌株H37RV和80.5(59.4 - 101.6)CFU/ML。我们的测定法没有针对广泛的细菌/真菌分离株的交叉反应性。对13个盲痰样品的临床测试显示,与培养物相比,100%(6/6)的灵敏度和100%(7/7)的特异性。我们的测定法在临床样品中表现出与微生物黄金标准,结核病培养以及对核酸最先进的GenExpert MTB/RIF Ultra的敏感性。这项技术以快速且强大的格式简化了从样品提取到测定读数的诊断,这使其成为结合放大和检测的第一个测试,同时与横向流动和冻干兼容。