(a)CLE受体8同源物的数量。(b)子类-II LRR-RLK的系统发育9,基于贝叶斯方法11生成10,基于保守的激酶12结构域。在14个节点显示树的后部13个概率。Coleochaete序列15用作外组。土地16植物序列形成一个17个单系进化枝,可以将18分为三个亚组,如右侧所示。插图显示20种具有21个系统发育关系的物种列表。(c)22个基因/蛋白质结构和23个基因组编辑等位基因MPCCIK。24(顶部)MPCIK的蛋白质结构。 25(中间)26 MPCIK/MP7G14210基因座的结构,具有27个设计指南28 RNA(GRNA)的位置。 (底部)基因组编辑等位基因的基因分型。 目标指南序列为29,BOLD序列为蓝色。 已删除的碱在洋红色中用连字符指示。 30外显子和内含子分别用资本和小字母表示。 从基因组DNA序列推导的WT和突变蛋白的 N末端区域32在下面指示32。 星号表示翻译终止。 (d)10天的总体形态 - 从吉玛(Gemmae)生长的33种旧植物。 比例尺代表0.5毫米。 3424(顶部)MPCIK的蛋白质结构。25(中间)26 MPCIK/MP7G14210基因座的结构,具有27个设计指南28 RNA(GRNA)的位置。(底部)基因组编辑等位基因的基因分型。目标指南序列为29,BOLD序列为蓝色。已删除的碱在洋红色中用连字符指示。30外显子和内含子分别用资本和小字母表示。从基因组DNA序列推导的WT和突变蛋白的 N末端区域32在下面指示32。 星号表示翻译终止。 (d)10天的总体形态 - 从吉玛(Gemmae)生长的33种旧植物。 比例尺代表0.5毫米。 34N末端区域32在下面指示32。星号表示翻译终止。(d)10天的总体形态 - 从吉玛(Gemmae)生长的33种旧植物。比例尺代表0.5毫米。34
,我们使用Samson的解决方案在Fuchs-Rosenthal(Fuchs-Rosenthal(Fuchs-Rosenthal)计数室中,在新生儿部的样品中进行了总白细胞计数。萨姆森的解决方案是细胞计数染色,主要成分是冰乙酸和洋红色染料。该组合物允许红细胞(RBC)融合和单核(MN)和包括分化的多形核(PMN)细胞。我们使用细胞增生技术制备了曙红 - 硫素染色的载玻片,并在光学显微镜下检查了它们。MN和PMN细胞的差异进行了亚分析评估。使用体液(BF)模式,同时在血液分析仪SYSMEX XN-1000(Sysmex,Cobe,Japan)上同时分析了本地CSF样品。SYSMEX XN-1000是一种独立的ana-ana-lyzer,它结合了电障碍,激光光散射和染料结合进行测量。该分析仪通常用于在全血模式下从全血中计数元素。但是,SYSMEX XN-1000可以在BF模式下使用,以测量除全血以外的其他体液。这项工作得到了比尔森大学医院和医学院伦理委员会的批准,参考号为62/23。从患者的亲戚那里获得书面知情同意书,以在医学期间出版。
图1。侧翼序列可以差异地调节核酶自切解活性。(a)二胞胎核酶的二级结构和第三纪相互作用(PK1和PK2)。核酶结构根据其共有结构10绘制并表征了晶体结构。13-16裂解位点被指定为L1中的N-1和A1之间的红色箭头。显示了一般酸(A1)和一般碱(G)。(B- C)上游和下游侧翼序列和核酶分别为蓝色,洋红色和黑色。裂解位点用红色箭头标记用于活性核酶或用于灭活的核酶的“ X”。(b)侧翼区域与核酶之间缺乏相互作用,通过允许核酶假设其催化结构(R ACT)来促进催化。上游和下游侧翼序列分别采用自我结构P向上和p向下。(c)可以通过侧翼序列和核酶之间的相互作用来抑制自切解,从而产生替代配对P Zym,迫使核酶采用核酶原(R INTAC)采用灭活状态(R INTACT)。通过添加与抑制区域结合的互补ASO(蓝绿色)可以缓解这种抑制作用,此处是上游侧面。然后,核酶可以重新折叠以假定其催化结构(R ACT)和自裂。
星形胶质细胞是大脑中的关键细胞,负责为大脑毛细血管和血脑屏障提供支持,调节离子和营养物质流入大脑,并与小胶质细胞一起参与大脑的炎症反应。星形胶质细胞这个名字源于这些细胞的形态,因为它们的分支类似于星星。星形胶质细胞的形态和分支会因疾病而发生变化,因此,对分支细胞过程的数量、长度和复杂性、细胞直径和其他特征进行成像和评估可以揭示这些细胞在不同条件下暴露后的功能或功能障碍的信息。我们的实验室从整个大鼠脑中分离星形胶质细胞、小胶质细胞和其他神经血管细胞,以研究它们对缺氧缺血性损伤等刺激的反应。分离后,我们将培养的细胞暴露于损伤条件下,然后评估暴露于损伤如何影响细胞与纳米粒子的相互作用。这让我们初步了解了同样在我们实验室中配制的纳米治疗剂如何与患病环境中的靶细胞相互作用。图中是一组培养的星形胶质细胞(白色),与小胶质细胞(洋红色)共培养,并用共聚焦显微镜成像。
图5。1 -like(浅蓝色)或2个(洋红色)痕迹的1D直方图由混合溶液测量的不同模型排序。基于使用0.4 nm片段作为输入的分类结果显示为实线。作为参考,使用剪切迹线作为输入的分类结果在此重现为阴影区域。(a)应用于0.4 nm片段的CNN模型会产生3066 1类和5216 2类样痕迹(与3406 1类似于3406 1 -like和4876 2-在使用完整迹线时喜欢痕迹)。(b)应用于0.4 nm片段的PC 1 /1DH模型产生6053 1类和2229 2类样痕迹(与4397 1-类似于4397 1 -like和3901 2 -like tlace时,使用完整的痕迹时)。(c)应用于0.4 nm片段的KMeans/2DH模型产生392 1-类似于7890 2-像痕迹(与5260 1 -like和3022 2 -2 -like Traces相比,当使用完整的迹线时)。(d)应用于0.4 nm片段的逻辑回归模型产生的4730 1类和3553 2类样痕迹(与4569 1-类似于4569 1的痕迹和3713 2 -2 -like tlace tlace时使用完整痕迹时)。
图2。y 3+x al 5-x o 12(0≤x≤0.4)的结构演变得出了SXRD数据的分析。(a)Y 3.4 Al 4.6 O 12(R WP = 8.79%,χ= 1.16)的Rietveld细化具有高角度拟合插图的变焦。Blue tick marks indicate garnet reflections (99.77(2) wt.%), green tick marks indicate perovskite reflections (YAlO 3 , 0.33(2) wt.%) (b) The garnet structure of Y 3.4 Al 4.6 O 12 projected along (100), and a fragment projected along (111) showing the three different cation environments (orange atoms = Y 3+ ; dark blue octahedra = Alo 6;浅蓝色四面体= ALO 4)。(c)具有线性拟合覆盖(实线)的精制晶格参数A,并通过y 3+对16个位点的精制占用率,名义占用覆盖(虚线)。(d)在三种不同的阳离子环境中精制的金属氧距离(m-o)x,在y 3 al 5 o 12(m- o)0时标准化为其值。蓝色三角形=直接结晶样品;洋红色倒三角=玻璃结晶样品。错误栏对应于细化中的10x ESD。
我们只是丛林中天空中的一粒小点。下面,但不远的地方,是一片连绵不断的树冠,向四面八方延伸,消失不见:亚马逊森林。今天的云层低矮而灰暗,我们脚下的地形看起来极其荒凉,我们那架吵闹的小型双引擎飞机在五百英尺左右的空中顽强地飞行,这是一个危险的高度,空气像变酸的牛奶一样凝固。我们从马瑙斯市向北飞行。偶尔,飞机会向上倾斜二十或三十英尺。或者它会下沉。当我们试图将注意力集中在地面上时,它像风筝一样颠簸。根据我的经验,在这种情况下飞行大约一个小时,我的胃可以忍受。“如果飞行员迷路了,”汤姆·洛夫乔伊在引擎的男中音呜呜声中喊道,“我们可能会到达委内瑞拉。”然后他朝我露出了花栗鼠般的笑容。从我们悬空的位置看去,森林看起来只不过是平坦和叶绿素的宏伟抽象——神秘、单调、绿色。至少,这是第一眼看到的。但宏伟的抽象背后隐藏着丰富的细节,第二眼和第三眼我就能分辨出一些细节。绿色分解成数百种不同的色调,代表着数百种不同的树种。这里和那里,有一棵树的树冠点缀着它,树冠上盛开着鲜艳的黄色或洋红色。一些地方,蒸汽像棉花一样升起,那里是潮湿的气息。
图 2 :(A) DZT 与 Dr DXPS 晶体结构(PDBID:2O1X)的顶级对接姿势。通过直接去除共结晶的 ThDP 制备 38 ApoDr DXPS,并在 Mg 2+ 存在下进行对接(本文其他对接操作相同)。(B)DZT 对 Dr DXPS 的抑制模式研究以及 DZT 对 Mt DXPS 和 H304A 突变体的剂量反应曲线。颜色代码:参考条件:紫色;变化的 [ThDP]:绿色;变化的 [PYR]:蓝色;变化的 [ D -GAP]:红色。(C)ThDP 和 DZT 的药效团视图。颜色代码:C 骨架:DZT:浅蓝色;ThDP:洋红色;His304(Dr DXPS):灰色;His296(Mt DXPS):棕色。表面:疏水位点:绿色;亲水位点:红色。(D)Dr DXPS (WT)、Dr DXPS (H304A) 和 Mt DXPS 的动力学表征(见图 S1 中的曲线)。(E)化合物 1 与 Dr DXPS 与 His304 相互作用的顶级对接姿势。(F)化合物 2 与 Dr DXPS 与 H304 相互作用的顶级对接姿势。本文中的所有对接研究均使用软件 LeadIT 44 进行;图 2C 使用 MOE 45 生成;图 2A、2E 和 2F 使用 Poseview 生成。46
图2:X射线晶体学通过X射线晶体屏幕。(a)TRF1 TRFH单体的卡通表示,其1286 PANDDA事件被叠加为蓝色球体。每个循环数代表pandda配体结合位点。TIN2 TBM结合位点,站点6,以绿色突出显示。(b)19精制和叠加的TRF1 TRFH结构的卡通表示,其命中片段结合在TIN2 TBM结合位点中。(c)与B中相同的结构,但没有结合的片段命中,显示了与片段结合的四个关键残基的相对位置(R102,E106,Q127,R131)。(d)TRF1 TRFH -TIN2 TBM晶体结构(PDB 3BQO)13的卡通表示,其中四个残基与碎片结合在一起,显示为蓝色棒,而TIN2 TBM显示为洋红色棒。(e)TRF1 TRFH的R131与命中片段的酰胺组之间的H-键的示例(3)。(f)命中片段(6)的示例,其中一个halide组埋在TRF1 TRFH的亮氨酸袋中,用TIN2 TBM肽(PDB 3BQO)13叠加为卡通和L260。(g)TRF1 TRFH的R131与命中片段的芳基(13)之间的阳离子-PI相互作用的示例。(H)Xchem的晶体结构命中片段5与TRF1 TRFH结合,相邻的不对称单元以灰色显示。
图 1. CRISPR-Cas9 RNP 促进 C. higginsianum 中与供体 DNA 的同源重组。(a)CRISPR-Cas9 RNP 介导的 HDR 示意图。首先,将重组 Cas9 蛋白(橙色)和针对目的基因 (GOI) 的合成 gRNA(洋红色)在体外混合以形成 RNP。其次,用 RNP 和供体 DNA 转化 C. higginsianum 原生质体,其中供体 DNA 具有选择标记 NPTII,两侧是两个同源臂。最后,通过结合选择培养基和基于 PCR 的筛选来分离用选择盒替换 GOI 的菌株。(b)URA3 敲除的构建设计。供体 DNA 具有选择标记,即 NPTII 表达盒,两侧是 0.5 kb 的同源臂,以浅灰色框表示。箭头表示扩增 ura3 基因组中特异性存在的“片段 1”和“片段 2”的引物。(c)转化子数量和 URA3 敲除率。左图显示每板转化子数量,右图显示每板 URA3 敲除率(n =5)。“-gRNA”和“+gRNA”分别代表不含和含 gRNA 的结果。星号表示统计差异(p < 0.001,Welch t 检验)。通过 PCR 筛选评估 URA3 的敲除,如 (d) 所示。(d)ura3 突变体的 PCR 筛选。使用 (b) 中所示的引物组,在含有 500 µg/ml G418 的 MA 上使用每个菌落进行 PCR。显示了从 -gRNA 和 +gRNA 转化子中随机选择的七个菌落的结果。 C. higginsianum 肌动蛋白基因 (CH63R_04240) 的 238 bp 片段被指定为肌动蛋白。凝胶左侧的数字表示 DNA 大小标记 (bp) 的位置。