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nuc-off核酸酶和DNA去除喷雾
图1。在去除RNase和dNase中，MP生物医学Nuc-Off核酸酶和DNA去除喷雾剂和竞争者T溶液的性能比较。A. RNase消除。在室温下孵育5分钟，将4μl的去除试剂和不同量的RNase（以1μl为单位）的混合物孵育；之后，加入1μlRNA，并在室温下进一步孵育15分钟，然后在含有甲醛的琼脂糖凝胶中变性和最终混合物的电泳。B. DNase消除。在室温下孵育4μl的去除试剂和不同量的DNase（以1μl）的混合物5分钟；之后，将1μl10X反应缓冲液和1μgDNA和无核酸酶的水加入总体积10μl，并在室温下进一步孵育15分钟，然后是最终混合物的琼脂糖凝胶电泳。C.去除试剂对DNA稳定性的影响。在室温下孵育15分钟，将4μl的去除试剂和1μl基因组DNA的混合物进行孵育，然后通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。D.去除试剂对RNA稳定性的影响。在室温下孵育4μl的去除试剂和1μlRNA的混合物，然后变性添加含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳。此处显示的图仅供参考，它可能会根据不同的实验条件而有所不同。
2022 年冲浪研讨会 7 月 28 日 - 普渡大学工程学院
顾婷萱，王天琪，邓庆* *PI：生物科学系 中性粒细胞占白细胞的 70%，通过吞噬作用、细胞因子释放、NETosis 等作用，作为人体免疫系统的第一道防线。为了发挥促炎和抗炎功能，中性粒细胞需要在趋化梯度的精细引导下迅速穿过内皮细胞迁移到炎症部位。中性粒细胞定向迁移的缺陷与多种严重的人类传染病和自身免疫性疾病有关。然而，中性粒细胞定向迁移的机制仍然难以捉摸，这一直是中性粒细胞研究的一个重要课题。琼脂糖凝胶下测定法是一种研究中性粒细胞趋化性的常规方法，因为它成本低廉、简单、灵活，并且适用于活细胞成像。然而，目前的琼脂糖凝胶下测定法有几个缺陷需要改进，特别是在浇铸琼脂糖凝胶时，包括孔与孔之间的距离不一致以及戳琼脂糖凝胶孔的缺陷。为了改进测定方法，能够产生一致孔尺寸和孔与孔之间的长度的模具是关键；使用 3D 打印，可以快速制作模具并轻松调整到不同的参数。我们的研究表明，3D 打印是一种方便的方法，可以改进目前琼脂糖迁移测定法下的缺陷，减少人为错误的可能性，并保持不同实验组之间孔尺寸和长度的一致性。
PB40.61 上样缓冲液
该溶液以 6x 格式提供，包含两种用于监测 DNA 迁移的示踪染料。这些染料在 2% TAE 琼脂糖凝胶上以大约 150 bp 和 800 bp 的距离迁移，或在 1% TAE 琼脂糖凝胶上以大约 500 bp 和 4,000 bp 的距离迁移。缓冲液还含有甘油，用于在加载后将 DNA 保留在孔底，并含有 EDTA 以抑制金属依赖性核酸酶的活性。
nuc-off核酸酶和DNA去除喷雾
图1。在去除RNase和dNase中，MP生物医学Nuc-Off核酸酶和DNA去除喷雾剂和竞争者T溶液的性能比较。A. RNase消除。在室温下孵育5分钟，将4μl的去除试剂和不同量的RNase（以1μl为单位）的混合物孵育；之后，加入1μlRNA，并在室温下进一步孵育15分钟，然后在含有甲醛的琼脂糖凝胶中变性和最终混合物的电泳。B. DNase消除。在室温下孵育4μl的去除试剂和不同量的DNase（以1μl）的混合物5分钟；之后，将1μl10X反应缓冲液和1μgDNA和无核酸酶的水加入总体积10μl，并在室温下进一步孵育15分钟，然后是最终混合物的琼脂糖凝胶电泳。C.去除试剂对DNA稳定性的影响。在室温下孵育15分钟，将4μl的去除试剂和1μl基因组DNA的混合物进行孵育，然后通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。D.去除试剂对RNA稳定性的影响。在室温下孵育4μl的去除试剂和1μlRNA的混合物，然后变性添加含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳。此处显示的图仅供参考，它可能会根据不同的实验条件而有所不同。
