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一种测定桦树和杨树中CRISPR/Cas系统切割效率的方法
摘要 测定Cas9对靶位点的切割效率对于基因组编辑非常重要。然而，这种测定只能通过体外方法进行，因为需要纯化Cas蛋白和合成gRNA。在这里，我们开发了一种体内方法，称为植物瞬时CRISPR/Cas编辑（TCEP）来测定Cas9的切割效率。按常规方法构建农杆菌介导的植物转化CRISPR/Cas载体。利用我们建立的瞬时转化方法，Cas9蛋白和gRNA瞬时表达并形成复合物以切割其靶位，从而导致动态DNA断裂。使用qPCR定量断裂的DNA以测量Cas9的切割效率。我们利用TCEP和体外方法研究了白桦和山杨×波利纳植物中Cas9对不同靶位点的切割效率。 TCEP法测定结果与体外法一致，说明TCEP法测定切割效率可靠。另外，利用TCEP法，我们发现热处理和超声处理均能显著提高CRISPR/Cas效率。因此，TCEP法具有广泛的应用价值，不仅可用于分析CRISPR/Cas效率，还可用于确定Cas9切割中涉及的因素。
脑电图作为言语病理学和痴呆症的生物标志物
手机应用程序： - 干预措施：培训应用程序，例如 www.lippenlesen.ch；ACT！（Apple + Play Store） - 收集真实数据，例如 https://www.trackyourhearing.org/ - 生态瞬时评估 (EMA) VR（沉浸式）
极低频磁场显著增强了甲氨蝶呤的细胞毒性，并可以通过瞬时诱导的质膜损伤减少癌细胞系的迁移
超低频磁场 (ELF-MF) 通过诱导瞬时质膜孔/损伤显著增强细胞对甲氨蝶呤的吸收。与未接受 ELF-MF 处理的对照组相比，通过电磁诱导膜孔增强的甲氨蝶呤“剂量负荷”导致与正常对照组相似的结果，同时体外使用明显较小的治疗剂量。与 ELF-MF 一起使用时，大约 10% 的典型治疗剂量产生了类似的结果。ELF-MF 增加体外 PC12、THP-1 和 HeLa 增殖（对照组的 120%）。粘附细胞分析表明，与对照组相比，向诱导划痕损伤的迁移明显减少（24 小时内 20 毫米）。我们的结果表明 ELF-MF 在肿瘤治疗中发挥着重要作用，这开辟了一些新的和令人兴奋的可能性，包括使用较小治疗剂量的化疗药物和破坏肿瘤转移。© 2022 作者。由 Elsevier Inc. 出版。这是一篇根据 CC BY 许可开放获取的文章（http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/）。
高效农杆菌介导的遗传...
使用含有 pCAMBIA 1301 载体的农杆菌菌株 AglI 感染新鲜芦荟外植体，以验证 GUS 基因的瞬时表达。与农杆菌共培养后，在进行外植体 GUS 组织化学染色的外植体上观察到几个明显的蓝点（图 5）。该载体在 GUS 基因中有一个内含子，确保其仅在转化组织中活跃表达，消除了假阳性的可能性。通过 GUS 组织化学染色评估了不同芦荟外植体在不同物理参数下的再生潜力和转化效率。在组 I 和组 II 中分别发现瞬时表达率为 91.3% 和 28.6%。芦荟茎（芽基部）表现出最大的再生潜力
基因组编辑——Alt-R™ CRISPR-Cas9 系统
图 1. Alt-RTM CRISPR-Cas9 系统核糖核蛋白的表现优于其他瞬时 CRISPR-Cas9 编辑方法。人类、小鼠或大鼠的 Alt-R CRISPR HPRT 对照 crRNA 与 Alt-R CRISPR-Cas9 tracrRNA 复合。将所得复合物与 Cas9 表达质粒、Cas9 mRNA 或 Cas9 RNP（包含与 crRNA 和 tracrRNA 预复合的 Alt-R Sp Cas9 核酸酶 3NLS）一起转染到人类 (HEK-293)、小鼠 (Hepa1- 6) 或大鼠 (RG2) 细胞系中。使用 T7EI 测定法进行的突变检测表明，Alt-R CRISPR-Cas9 RNP 的表现优于其他瞬时 Cas9 表达方法，并且与稳定表达 S. pyogenes Cas9 的参考 HEK-293–Cas9 细胞的表现相当。
静止的神经干细胞暂时变成“神经元”......
静止神经干细胞 (qNSC) 的再激活是一个协调过程，可产生新的神经元和神经胶质细胞。本文，我们表明，在发育过程中，再激活遵循分层顺序，其中位于前部的 qNSC 控制中枢神经系统 (CNS) 中更多后部的 qNSC 的再激活。qNSC 和神经元之间的电通信使这种精确的空间和时间控制成为可能，可覆盖整个 CNS。使用单细胞 RNA 测序，我们发现，值得注意的是，qNSC 在保持干细胞身份的同时，开启了大量神经元基因。这种瞬时混合身份是 qNSC 所特有的，因为在干细胞恢复增殖后，神经元基因会被关闭。我们的研究结果揭示了 qNSC 之间的远程通信，以协调再激活，这是由瞬时“干细胞-神经元”命运实现的。
可植入神经技术的新机会 - Infoscience
神经技术包括与神经组织集成的人工设备，以减轻神经和精神障碍的负担。由于具有易感，可拉伸和可注射的电子设备的发展，该领域的应用范围显着扩大了其应用范围。现在，绿色电子产品的出现为神经技术工具箱增加了新的资产。瞬时神经技术减少了慢性植入物的副作用，并将惰性装置转化为生物活性和生物反应性结构。最终，它具有将技术设备与现代化医学中的现代方法融合在一起的潜力。本综述着重于瞬时神经技术对人类受益的潜力的上升潜力，全面总结了最新成就，并突出了特征需求和挑战。
FAST 功能连接表明 P300 连接与阿尔茨海默病的工作记忆缺陷有关
测量瞬时功能连接是脑电图 (EEG) 研究中的一个重要挑战。在这里，高时间分辨率所提供的关于大脑活动的深刻、有辨别力的信息的丰富潜力，被介质的固有噪声和在短时间窗口内计算出的相关性的虚假性质所掩盖。我们提出了一种克服这些问题的方法，称为滤波平均短期 (FAST) 功能连接。首先，对于给定的一对视觉短期记忆 (VSTM) 任务，对整个研究队列的长期、稳定的功能连接进行平均。得到的平均连接矩阵包含有关任务最强一般连接的信息，用作过滤器来分析各个受试者的瞬时高时间分辨率功能连接。在模拟中，我们表明，这种方法可以准确区分两种条件下嘈杂事件相关电位 (ERP) 的差异，而标准连接和其他类似方法则无法做到这一点。然后，我们将其应用于分析与家族性和散发性阿尔茨海默病 (AD) 相关轻度认知障碍 (MCI) 的两组人群中视觉短期记忆绑定缺陷相关的活动。在 P300 ERP 范围内，绑定任务中发现了可重复的显著差异，而在形状任务中没有显著差异。这允许对瞬时功能连接进行新的敏感测量，可以实施以获得具有临床意义的结果。