Cybio,Cybi-Well Vario移液器和两个集成的CybiDrop分配器正在JGI生产测序系中实施,以取代两种老化的液压仪器和两个Cavro分配器。Vario一次性尖端25ul头部用于从Axygen PCR源板中等分的低体积放大DNA样品,并将1-4ul Dispense 1-4ul放入两个新的预装前的目的地板中。扫描源板以确认数据库的一致性,并“飞行”扫描目标板,以记录使用Cybi-Drop 3D分配(2-4ul)的前向或反向引物测序化学试剂。吞吐量的速度至少是我们当前的Hydra-Twister和手动加载Cavro仪器的两倍。
设备净化:在BSC进行维修,搬迁或处置之前,用于研究的BSCS必须由NSF认可的专业专业人员对潜在的传染性代理或人为材料进行污染。为了这些目的,要安排BSC净化,请在线工作请求或通过safetly@lsuhsc.edu或504-568-6585与生物安全官员联系。柜子必须完全清除任何设备,移液器,废物,液体和油管。然后,用户必须用适当的消毒剂对表面进行污染,例如10%的漂白剂溶液,然后是70%的乙醇溶液。eh&s将与NSF认可的供应商和实验室协调安排设备衰减。完成后,NSF去污染的通知将在BSC上完成。在使用后使用之前,必须重新认证BSC。参考:
使用 RNA 和 RNP • 建议戴上手套并使用无核酸酶的试管和试剂,以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术,并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 Synthego 和 Nucleofector™ 试剂均应根据制造商的建议储存。 • 合成的 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中,并使用无核酸酶的水稀释至工作浓度。请参阅 Synthego 快速入门指南,了解溶解和储存合成 sgRNA 的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时(可在 4°C 下保存长达一周,或在 -20°C 下保存长达 1 个月)。请注意,在 4°C 下储存的 RNP 长时间后可能会受到微生物生长的污染。
8.1打开时采样麻袋和桶立即。将样品从容器内部的位置远离侧面。使用无菌汤匙和无菌采样瓶。用无菌金属帽或棉塞关闭瓶子。采样载荷或打开容器时,请在采样前小心地卸下上层。最好是样品封闭的容器被清空时。8.2确定Scan-P 39中所述的干物质含量。8.3并行进行两个独立的测试系列:在无菌瓶中重约1 g的样品至最接近的10毫克。加入100 mL缓冲溶液(6.3),然后剧烈摇动约3分钟。用无菌移液器1 ml的样品溶液转移到培养皿中,也将1 mL转移到装有9 ml缓冲液的试管中
d。添加DNA模板e。混合和涡流管或PCR板f。可选:在将酶添加到模板碎片g的情况下孵化10分钟。小心地处理纳米板(切勿接触底部),然后将其放在干净的纳米板托盘上。h。将每个孔的含量转移到纳米板i的相应孔中。确保在移液器期间不会将气泡引入DPCR板的孔中(顶部的气泡不太有问题)。j。使用Qiacity纳米板密封k密封纳米板。垂直和水平使用3-4次使用纳米板辊。卸下透明的箔m。垂直和水平使用3-4次纳米板辊,然后滚动板框架
测试原理1.该测试采用定量的双抗体三明治荧光免疫测定技术。2.使用棉签收集要测试的样品,并将其添加到稀释剂中。混合良好。使用移液器绘制75ul混合样品,并将其添加到测试卡的样品端口中。要测试的样品,并在标记垫克隆抗体上涂有标记的CPV-CCV纸,结合形成反应性复合物。在色谱的作用下,反应络合物沿硝酸纤维素膜向前移动,并由涂有硝酸纤维素膜检测t线的CPV-CCV单克隆抗体捕获。样品中的CPV-CCV抗原越多,在检测线上积聚的复合物越多,并且荧光抗体的信号强度反映了捕获的CPV-CCV的量。CPV-CCV浓度在NG-ML-UG-ML中表达。
第 8 系 医学物理和计量信息技术 教授博士T. Schäffter 电话:(030) 3481-7343 电子邮件:tobias.schaeffter@ptb.de 部门 8.1 生物医学磁共振博士B. Ittermann 电话:(030) 3481-7318 电子邮件:bernd.ittermann@ptb.de 部门 8.2 生物信号 Dr. L. Trahms 电话:(030) 3481-7213 电子邮件:lutz.trahms@ptb.de 部门 8.3 生物医学光学 教授博士R. Macdonald 电话:(030) 3481-7542 电子邮件:rainer.macdonald@ptb.de 部门 8.4 数学建模和数据分析教授M. Bär 电话:(030) 3481-7687 电子邮箱:markus.baer@ptb.de 部门 8.5 计量信息技术 Dr. F. Thiel 电话:(030) 3481-7529 电子邮箱:florian.thiel@ptb.de 摘自 PTB 组织结构图(2017 年 12 月) 标题页:多管移液器填充多孔板
Agilent Novocyte Quanteon 4025 流式细胞仪 Azure biosystems c600 凝胶成像仪 ThermoFisher QuantStudio3 qPCR 系统 2x ThermoFisher SimpliAmp PCR 系统 Molecular Devices Spectramax Plus 384 UV-Vis 微孔板读数仪 多台离心机 Denovix Nanodrop 和细胞计数器 哺乳动物细胞培养室,配备 3 个 Heracell 160i CO 2 培养箱和 1 个三气 CO 2 /N 2 Tuttnauer 3870 ELV 高压灭菌器 4x -80c 超低温冰柜,配备 24 x 7 监控和发电机备用 各种冰箱、-20 冰柜和 4c 熟食箱 借出的个人实验室设备(天平、加热板、玻璃器皿、pH 计、电泳设备、涡旋器、移液器等) 配备蔡司 Axiocam 202 单色相机的 Olympus IX70 荧光显微镜
用途:EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 旨在从低输入细胞/染色质中快速富集与蛋白质(组蛋白或转录因子)复合的特定 DNA,并通过下一代测序使用 Illumina 平台或 qPCR 等其他方法识别或绘制体内蛋白质-DNA 相互作用。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组件允许在最小化非特异性背景水平的情况下捕获目标蛋白质/DNA 复合物。捕获的 DNA 特别适合构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以更少的偏差和更高的分辨率绘制目标蛋白质-DNA 相互作用区域。输入量:对于细胞,通常,每个反应的量可以是 2 x 10 3 到 2 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 1 x 10 5 ,尽管从 EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 获得的修饰组蛋白测序数据只需 500 个细胞即可获得。对于从细胞或组织中分离的染色质,每个反应的量可以是 0.1 µg 至 5 µg 的染色质。为了获得最佳制备效果,染色质输入量应为 2 µg。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织(预制备的染色质)中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选出的特定细胞等。抗体:抗体应为 ChIP 级,以便识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K27me3)来证明抗体适用于 ChIP。内部对照:此试剂盒中提供了阴性和阳性 ChIP 对照。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入 PCR 管中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
用途:EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 旨在从低输入细胞/染色质中快速富集与蛋白质(组蛋白或转录因子)复合的特定 DNA,并通过 Illumina 平台的下一代测序或 qPCR 等其他方法识别或绘制体内蛋白质-DNA 相互作用。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组件允许在最小化非特异性背景水平的情况下捕获目标蛋白质/DNA 复合物。捕获的 DNA 特别适合构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以更少的偏差和更高的分辨率绘制目标蛋白质-DNA 相互作用区域。输入量:对于细胞,通常,每个反应的量可以是 2 x 10 3 到 2 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 1 x 10 5 ,尽管从 EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 获得的修饰组蛋白测序数据只需 500 个细胞即可获得。对于从细胞或组织中分离的染色质,每个反应的量可以是 0.1 µg 至 5 µg 的染色质。为了获得最佳制备效果,染色质输入量应为 2 µg。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织(预制备的染色质)中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选出的特定细胞等。抗体:抗体应为 ChIP 级,以便识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K27me3)来证明抗体适用于 ChIP。内部对照:此试剂盒中提供了阴性和阳性 ChIP 对照。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入 PCR 管中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
