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通过多重基因组编辑稳定空肠弯曲菌基因组中遗传不稳定的简单序列重复：一种描述多个相变基因的可靠方法
SYC1004 NCTC11168 Δ recA :: cat 本研究 SYC1006 NCTC11168 cj1426 :: astA Δ flaA :: kan 本研究 SYC1007 NCTC11168 cj1426 ON :: astA Δ flaA :: cat 本研究 SYC1008 NCTC11168 cj1426 OFF :: astA Δ flaA :: kan 本研究 SYC1P000K NCTC11168 Δ flaA :: kan cj1139 OFF cj1144 OFF cj1420 OFF cj1421 OFF cj1422 OFF cj1426 OFF cj1429 OFF cj1437 OFF
来自致病空肠弯曲杆菌的无引导 Cas9......
CRISPR-Cas9 系统在人类致病菌中富集，并通过未知机制与细胞毒性相关。本文表明，空肠弯曲菌感染人类细胞后，会将其 Cas9 (CjeCas9) 核酸酶分泌到细胞质中。接下来，天然核定位信号使 CjeCas9 进入核，在那里它催化金属依赖性非特异性 DNA 切割，导致细胞死亡。与 CjeCas9 相比，化脓性链球菌的天然 Cas9 (SpyCas9) 更适合向导依赖性编辑。然而，在人类细胞中，天然 SpyCas9 仍可能造成一些 DNA 损伤，很可能是因为其 ssDNA 切割活性。这种副作用可以通过用适当的向导 RNA 饱和 SpyCas9 来完全预防，这对 CjeCas9 仅部分有效。我们得出结论，CjeCas9 在攻击人类细胞而不是病毒防御中发挥积极作用。此外，这些独特的催化特性可能使 CjeCas9 不太适合基因组编辑应用。
小非编码 RNA CjNC110 影响空肠弯曲菌的运动性、1 自凝集、AI-2 定位和鸡 2 定植 3
小的非编码RNA参与27种病原微生物的许多重要生理功能。先前的研究已经确定了主要人畜共患病原体空肠弯曲菌中存在非编码RNA 28 ，但迄今为止，很少有非编码RNA在功能上得到表征。CjNC110是空肠弯曲菌中保守的ncRNA，位于30 luxS基因下游，该基因负责产生群体感应分子自诱导物-2 31 (AI-2)。在本研究中，我们利用链特异性高通量RNA测序来识别空肠弯曲菌羊流产克隆中CjNC110的潜在32靶标或相互作用伙伴。这些数据被用于进一步表型评估 CjNC110 在空肠弯曲菌的生长、运动、34 自体凝集、群体感应和鸡定植中的作用。与野生型相比，35 CjNC110 ncRNA 的失活导致自体凝集能力显著下降，同时 36 运动能力增强。37 ∆CjNC110 中细胞外 AI-2 检测降低，然而，细胞内 AI-2 积累显著增加，同时 LuxS 表达增加，这表明 CjNC110 在调节 39 AI-2 运输方面发挥着关键作用。值得注意的是，∆CjNC110 还显示出定植鸡的能力存在显著缺陷。CjNC110 的补充将所有表型变化恢复到野生型 41 水平。我们数据中观察到的表型和转录组变化的总体结果 42 为 C. jejuni 羊流产克隆的病理生物学提供了宝贵的见解，并强烈 43 表明 CjNC110 在调节能量趋向性、鞭毛 44 糖基化、通过群体感应的细胞通讯和鸡定植中起着重要作用。 45 重要的人畜共患病原体。46