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CRISPR/Cas9 介导双等位基因 F0 海葵鱼 (Amphiprion ocellaris) 突变体的产生
基因组操作是一种有用的方法，可用于阐明发育、生理和行为方面的分子途径。然而，由于缺乏适用于珊瑚鱼的基因编辑工具，因此它们许多独特特征的遗传基础仍有待研究。一种适合应用这种技术的标志性珊瑚鱼群是海葵鱼 (Amphiprioninae)，因为它们与海葵共生、雌雄同体、复杂的社会等级、皮肤图案发展和视觉，并且相对容易在水族箱中饲养，因此被广泛研究。在这项研究中，我们开发了一种基因编辑方案，用于将 CRISPR/Cas9 系统应用于眼斑海葵鱼 (Amphiprion ocellaris)。受精卵的显微注射用于证明我们的 CRISPR/Cas9 方法在两个不同靶位点的成功应用：与视觉有关的视紫红质样 2B 视蛋白编码基因 (RH2B) 和与黑色素生成的酪氨酸酶生成基因 (tyr)。对眼斑海马胚胎中测序的靶基因区域进行分析表明，注射胚胎的吸收率高达 73.3%。进一步分析亚克隆的突变基因序列并结合扩增子散弹枪测序表明，我们的方法在 F0 眼斑海马胚胎中产生双等位基因突变的效率为 75% 到 100%。此外，我们清楚地显示了 tyr 突变胚胎的功能丧失，其表现出典型的低黑色素表型。该方案旨在作为进一步探索 CRISPR/Cas9 在眼斑海马中潜在应用的有用起点。眼斑鱼，作为研究小丑鱼和其他珊瑚鱼基因功能的平台。
靶向阿尔茨海默氏症治疗药的异常tau磷酸化
阿尔茨海默氏病（AD）是一种广泛的神经退行性疾病，其特征是进行性记忆和认知能力下降，带来了强大的公共卫生挑战。此重新探讨了AD发病机理中两个关键玩具之间的复杂相互作用：β-淀粉样蛋白（Aβ）和tau蛋白。虽然淀粉样蛋白级联理论长期以来一直在广告研究中占主导地位，但最近的发展引发了有关其中心性的辩论。Aβ斑块和tau nfts是AD中的标志性病理。adu-canumab和lecanemab，靶向Aβ的单克隆抗体，尽管存在争议，但已得到批准，这引起了人们对以Aβ为中心的中间疗法的治疗功效的问题。另一方面，tau特别是其高磷酸化，破坏了微管稳定性，并导致神经元功能障碍。tau的各种翻译后修改将其聚集驱动到NFT中。针对tau的新兴治疗方法，例如GSK-3β和CDK5抑制剂，在临床前和临床研究中都表现出了希望。恢复蛋白激酶和磷酸酶之间的等位基库，尤其是蛋白质磷酸酶-2a（PP2A），是AD治疗的有前途的途径，因为TAU主要受其磷酸化状态的调节。tau特异性磷酸酶的激活为减轻tau病理的潜力提供了潜力。AD药物开发的不断发展的景观强调以tau为中心的疗法和淀粉样蛋白级联假设的重新评估。此外，探索神经炎症的作用及其与Tau病理学的相互作用提出了有希望的研究方向。
crispr/cas9
食物过敏是全球一个主要的健康问题。现代繁殖技术，例如通过CRISPR/CAS9进行基因组编辑，有可能通过靶向植物中的过敏原来减轻这种情况。这项研究介绍了主要的过敏原胸罩J i，这是2S白蛋白类的种子储存蛋白，在异形棕色芥末（Brassica Juncea）中。印度基因银行加入（CR2664）和德国品种Terratop的副卵形植物使用具有多个单一指南RNA的二进制载体的农业杆菌进行了转化，以引起大型删除或两种Bra J I or词的大型删除或Frameshift突变。总共获得了49 T 0线，最多3.8％的转化效率。在胸罩J ib等位基因中，四行的删除为566，最高790 bp。在18条Terratop t 0线中，有9条带有靶向区域的indels。从16个分析的CR2664 t 0行，14行持有的indels和3个具有四个Bra J I等位基因突变。CRISPR/CAS9引起的大多数突变是t 1后代遗传的。在一些编辑的线中，种子的形成和生存能力降低，种子显示出胚胎的早熟发育，导致滴虫已经破裂。使用新开发的BRA J I特异性抗体进行免疫印迹，显示了所选系的种子提取物中要降低或不存在的胸罩J I蛋白的量。从芥末中去除偏远的决定因素是迈向开发更安全的食品作物的重要第一步。
如何使用基因组编辑工具生成等位基因系列
基因组编辑工具极大地促进了通过靶向诱变对目标基因进行功能分析。现在有许多可用的基因组编辑工具，包括不同的位点特异性核酸酶和允许在给定位点引入单核苷酸多态性 (SNP) 的编辑器数据库。这些工具可用于在给定基因座产生高等位基因多样性，以促进基因功能研究，包括检查特定蛋白质结构域或单个氨基酸的作用。我们比较了我们的 LbCPF1、SpCAS9 和碱基编辑器 (BECAS9) 构建体对 OsCAO1 基因产生的效果、效率和突变类型。SpCAS9 和 LbCPF1 在产生突变方面具有相似的效率，但在诱导的突变类型上有所不同，对于 SpCAS9 和 LbCPF1，大多数变化分别是单核苷酸插入和短缺失。杂合子的比例也不同，在我们的 LbCPF1 中占大多数，而使用 SpCAS9，我们获得了大量双等位基因突变体。最后，我们证明了使用 BECAS9 可以特异性地引入终止密码子，可接受的效率约为 20%。基于这些结果，可以根据希望引入的突变类型在这三种替代方案中进行合理的选择，这三种系统是互补的。SpCAS9 仍然是在初级转化体中产生 KO 突变的最佳选择，而如果所需的基因突变干扰再生或生存能力，则将优先使用我们的 LbCPF1 构造，因为它主要产生杂合子。其他研究已将 LbCPF1 描述为在产生纯合和双等位基因突变方面与 SpCAS9 一样有效。未来仍有待澄清，不同的 LbCFP1 构造是否具有不同的效率并确定这些差异的来源。最后，如果希望专门引入终止密码子，BECAS9 是一种可行且有效的替代方案，尽管它在创建 KO 突变方面的效率低于 SpCAS9 和 LbCPF1。
基于 CRISPR/Cas9 的 PMR4 基因敲除降低了两种番茄品种对晚疫病的易感性
摘要：番茄晚疫病（LB）的病原菌是致病疫霉菌，是一种毁灭性的疾病，严重影响植物的生产力。植物中易感基因（S）的存在促进了病原菌的增殖；因此，抑制这些基因可能有助于提供广谱和持久的耐受性/抗性。先前对拟南芥和番茄的研究表明，PMR4 易感基因的敲除突变体对白粉病具有耐受性。此外，马铃薯中 PMR4 的敲低已被证明可以赋予对 LB 的耐受性。为了在本研究中验证番茄中的相同效果，将含有四个单向导 RNA（sgRNA：sgRNA1、sgRNA6、sgRNA7 和 sgRNA8）的 CRISPR-Cas9 载体（靶向尽可能多的 SlPMR4 区域）通过农杆菌介导的转化引入两种广泛种植的意大利番茄品种：“San Marzano”（SM）和“Oxheart”（OX）。选择了 35 株植物（26 株 SM 和 9 株 OX）并进行筛选，以确定 CRISPR/Cas9 诱导的突变。不同的 sgRNA 导致的突变频率范围从 22.1% 到 100%，或者精确插入（sgRNA6）或缺失（sgRNA7、sgRNA1 和 sgRNA8）。值得注意的是，sgRNA7 在七种 SM 基因型中诱导了纯合状态下的 − 7 bp 缺失，而 sgRNA8 导致产生十五种具有双等位基因突变（ − 7 bp 和 − 2 bp）的 SM 基因型。选定的编辑品系接种了 P. infestans，其中四种在 PMR4 基因座完全敲除的品系与对照植物相比表现出减轻的病害症状（易感性从 55% 降低到 80%）。使用 Illumina 全基因组测序对四种 SM 品系进行测序以进行更深入的表征，而未显示出候选脱靶区域发生任何突变的证据。我们的结果首次表明，pmr4 番茄突变体对致病疫霉菌的易感性降低，证实了 KO PMR4 在提供针对病原体的广谱保护中的作用。
pozelimab（Veopoz）MNG-065 - 医疗政策
背景/概述 Veopoz 是一种补体抑制剂，用于治疗患有 CD55 缺陷型蛋白丢失性肠病 (PLE)（也称为 CHAPLE 病）的成人和 1 岁及以上的儿童患者。作为 FDA 批准的首个 CHAPLE 病疗法，Veopoz 是一种针对补体因子 C5（一种参与补体系统激活的蛋白质）的单克隆抗体。由于接受补体抑制剂治疗的患者中曾发生过危及生命和致命的脑膜炎球菌感染，因此患者必须在首次服用 Veopoz 前至少 2 周根据最新的免疫实践咨询委员会 (ACIP) 建议接种或更新脑膜炎球菌感染疫苗。如果不能在治疗开始前至少两周接种疫苗，包装说明书建议患者应接受预防性抗生素治疗。Veopoz 需要根据体重进行静脉负荷剂量，然后在第 8 天根据体重进行皮下剂量，然后每周进行皮下维持剂量。如果至少 3 周剂量后临床反应不足，可每周增加一次维持剂量。最大维持剂量为每周一次皮下 800 毫克。CHAPLE 病（CD55 缺陷型蛋白丢失性肠病 (PLE)）补体过度活化、血管病性血栓形成和蛋白丢失性肠病 (CHAPLE) 病是一种罕见但危及生命的免疫疾病，由 CD55 基因的双等位基因功能丧失突变引起。CD55 通过加速 C3 转化酶（补体级联的关键调节剂）的降解并阻止 C5 裂解为 C5a 和 C5b 来抑制早期补体活化，从而阻止膜攻击复合物（C5b-C9，一种介导细胞裂解的结构）的形成。CD55 突变导致补体系统过度活化，从而损害上消化道的血管和淋巴管并导致循环蛋白质的损失。患者可能会出现腹痛、腹泻、呕吐、吸收不良、水肿、生长迟缓、肠淋巴管扩张、感染，甚至可能危及生命。
AAV9 介导的 SGPL1 基因转移在 S1P 裂解酶小鼠模型中的功效
简介鞘氨醇-1-磷酸裂解酶 1 ( SGPL1 ) 的双等位基因功能丧失突变导致鞘氨醇-1-磷酸裂解酶功能不全综合征 (SPLIS)，这是一种与非溶酶体鞘脂储存相关的罕见代谢紊乱 (1, 2)。该综合征于 2017 年首次被描述 (3, 4)。迄今为止已报告约 50 例 (5–10)。大多数患者表现出类固醇抵抗性肾病综合征 (SRNS)，并迅速发展为终末期肾病。肾病最常与局灶节段性肾小球硬化病理有关，包括侵袭性塌陷型。原发性肾上腺功能不全是第二大常见特征。中枢神经系统和周围神经系统缺陷可能包括发育迟缓或退化，伴有磁共振成像的特征性发现，约一半的病例与其他疾病特征同时发生或独立发生（1, 11）。T 细胞淋巴细胞减少症似乎是一种普遍特征，尽管某种程度的 T 细胞功能通常会持续存在。观察到的严重程度范围很广，一些受影响的个体在子宫内死亡，另一些在婴儿期死亡，而还有一些人在生命的头十年后期出现症状，并在支持性护理下活到成年。尚未建立治疗 SPLIS 的特定疗法。SGPL1 编码鞘氨醇磷酸裂解酶 (SPL)，该酶负责鞘脂代谢的最后一步（12）。SPL 催化磷酸化鞘氨醇碱基的不可逆降解，产生两种产物：长链醛和乙醇胺磷酸盐。生物活性鞘脂鞘氨醇-1-磷酸酯 (S1P) 是主要的 SPL 底物。S1P 是 G 蛋白偶联 S1P 受体 (S1PR) 的配体，参与控制肌动蛋白细胞骨架组织、细胞迁移和细胞存活 (13)。S1P 信号传导调节淋巴细胞运输、血管生成、炎症和其他生理过程 (14)。体内 SPL 失活会导致组织 S1P 水平显著升高，并导致上游鞘脂中间体积聚，例如
使用农杆菌介导的转化技术的CRISPR编辑的桦木植物无DNA整合
摘要39 CRISPR/CAS9系统已成为基因组编辑中的强大工具；但是，40代CRISPR编辑的无DNA植物仍然具有挑战性。在这项研究中，使用了使用农业介导的转化43（CPDAT方法），使用41个Betula Plathylla（Birch）构建一种生成CRISPR PRECTER 42植物的方法。该技术利用瞬时遗传转化将TNNA编码GRNA和Cas9引入桦木细胞，T-DNA将表达45个合成的GRNA和CAS9蛋白，这将形成一个复合物以裂解靶标46 DNA位点。基因组可能由于DNA修复而被突变，并且这些突变将被保留47个，并积累不取决于是否将T-DNA整合到48个基因组中。瞬时转化后，将桦树植物切成植物，至49个诱导不定的芽而没有抗生素选择压力。每个不定的芽50可以视为突变51检测的独立潜在的CRISPR编辑线。CRISPR编辑的桦木植物没有外国DNA整合，还可以通过筛选CRISPR编辑的线条而没有T-DNA整合。在65 53个随机选择的独立线中，突变率为80.00％，包括40.00％54的线，两个等位基因突变。此外，在有65条研究的线（7.69％）中，有5条线是CRISPR-编辑的桦木植物，而没有DNA整合。总而言之，这56种创新方法提出了一种生成CRISPR编辑的桦木57种植物的新型策略，从而显着提高了产生常见的58种CRISPR-CRISPR-编辑植物的效率。81这些发现提供了开发植物59基因组编辑技术的巨大潜力。60 61简介62 CRISPR/CAS9是一种适用于植物育种的强大而有效的基因编辑技术，63可以精确有效地修饰基因组（Fidan等，2023）。CRISPR/CAS 64系统最初被发现可以识别并裂解入侵的病毒或噬菌体的65个DNA，可作为细菌中的免疫系统（Ahmad，2023; Kim等，2016; 66 Komor等，2016; Koonin等，2017; Zetsche等，2015; 66 Komor et al。，2015;CRISPR-CAS系统67已根据其CRISPR-CAS位点的布置和相关的CAS 69蛋白（Koonin等，2017; Makarova; Makarova and Koonin，2015）分类为两个主要类（II，II，III，68 IV，V和VI）和各种类型（I，II，III，68 IV，V和VI）。两个主要类是70类1和2，根据其利用的CRISPR 71 RNA（CRRNA）摄影蛋白的复合物（McDonald等，2019）。1类系统（包括72型I，III和IV）由由几种CAS 73蛋白结合的成熟CRRNA组成，形成了巨大的蛋白质复合物。该复合物通过在原始探针75的互补链DNA（靶位点）和GRNA间隔者的5'-End序列之间进行配对，作为目标74 DNA位点的指南，并且具有核酸酶76的活性，以裂解靶向序列（Garneau，2010; Tiwari等，2010; Tiwari et and and and an。2类系统包括II型，V和VI，分别具有78个CAS蛋白，例如Cas9，Cas12或Cas13，并且还具有靶向和切割DNA的79功能（Jinek等，2012）。在2类系统中，80 Cas9-Crispr系统已被广泛应用。