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利用 CRISPR 干扰技术高效、快速地灭活核梭杆菌的基因
摘要 通过在具核梭杆菌中创建框内缺失突变来使基因失活非常耗时，并且大多数具核梭杆菌菌株在遗传上是难以处理的。为了解决这些问题，我们引入了一种基于核糖开关的可诱导 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 系统。该系统采用核酸酶失活的化脓性链球菌 Cas9 蛋白 (dCas9)，通过持续表达的单向导 RNA (sgRNA) 特异性地引导至目的基因。从机制上讲，这种 dCas9-sgRNA 复合物成为 RNA 聚合酶难以逾越的障碍，从而抑制了目标基因的转录。利用这个系统，我们首先研究了两个非必需基因 ftsX 和 radD，它们对于具核梭杆菌的胞质分裂和共聚集至关重要。添加诱导剂茶碱后，ftsX 抑制导致类似于染色体 ftsX 缺失的丝状细胞形成，而靶向 radD 则显著降低 RadD 蛋白水平，消除 RadD 介导的共聚集。随后将该系统扩展到探测必需基因 bamA 和 ftsZ，这两个基因对于外膜生物合成和细胞分裂至关重要。令人印象深刻的是，bamA 抑制破坏了膜完整性和细菌分离，阻碍了生长，而 ftsZ 靶向会在肉汤中产生细长的细胞，并且琼脂生长受到损害。对 F. nucleatum 临床菌株 CTI-2 和 Fusobacterium periodonticum 的进一步研究表明，靶向 tnaA 时吲哚合成减少。此外，沉默 F. periodonticum 中的 clpB 会降低 ClpB，从而增加热敏感性。总之，我们的 CRISPRi 系统简化了各种梭杆菌菌株的基因失活。
诱导型 CRISPR/Cas9 可在集胞藻 PCC 6803 中进行多重和快速分离的单靶基因组编辑
诱导型 CRISPR/Cas9 可在 Synechocystis sp. PCC 6803 中进行多路复用和快速分离的单目标基因组编辑 Ivana Cengic a、Inés C. Cañadas b、Nigel P. Minton b、Elton P. Hudson a * a 瑞典皇家理工学院化学、生物技术和健康工程科学学院、生命科学实验室，斯德哥尔摩，瑞典 b BBSRC/EPSRC 合成生物学研究中心 (SBRC)、诺丁汉大学生命科学学院，诺丁汉，NG7 2RD，英国 * 通讯作者：huds@kth.se 摘要 建立各种合成生物学工具对于开发用于生物技术的蓝藻至关重要，尤其是那些允许以时间高效的方式进行精确和无标记基因组编辑的工具。这里我们描述了一个核糖开关诱导的 CRISPR/Cas9 系统，该系统包含在一个单一的复制载体上，用于模型蓝藻 Synechocystis sp. PCC 6803。茶碱反应性核糖开关可以严格控制 Cas9 表达，从而能够将 CRISPR/Cas9 载体可靠地转化为 Synechocystis 。CRISPR/Cas9 的诱导介导了各种类型的基因组编辑，特别是不同大小的删除和插入。编辑效率因目标和预期编辑而异；较小的编辑总体上表现更好，例如，将 FLAG 标签插入 rbcL 时达到 100%。重要的是，本文描述的单载体 CRISPR/Cas9 系统还被证明可以在 Synechocystis 中同时介导多达三个目标的多重编辑。所有单靶和几个双靶突变体在第一轮诱导后也完全分离，增加了该系统的实用性。此外，由镍单独诱导并包含在 CRISPR/Cas9 载体本身上的载体固化系统将固化效率提高了大约 4 倍，使最终的突变体真正成为无标记的。关键词：CRISPR、Cas9、蓝藻、可诱导、核糖开关、多重引言
闭角型青光眼的生物特征发现 光学... - CBO
Zypred® 加替沙星 0.3%，醋酸泼尼松龙 1%。适应症：ZYPRED® 适用于治疗眼部感染以及治疗和预防接受眼科手术的患者的眼部感染和炎症。禁忌症 - ZYPRED® 禁用于对加替沙星、其他喹诺酮类药物或该产品的任何其他成分有过敏史的患者，以及急性化脓性眼部感染、急性浅表单纯疱疹（树突状角膜炎）、牛痘、水痘和许多其他角膜和结膜病毒性疾病、眼结核和眼部真菌性疾病。警告和注意事项 - ZYPRED® 适合眼部局部使用。据报道，长期使用局部眼用皮质类固醇后会形成后囊下白内障。有单纯疱疹性角膜炎病史的患者应谨慎治疗。对于导致角膜变薄的疾病，使用局部类固醇可能会导致穿孔。对于化脓性眼部感染，局部使用类固醇可能会掩盖或加重现有感染。在存在单纯疱疹的情况下使用类固醇药物需要谨慎，并且必须经常用裂隙灯显微镜检查。由于长期使用外用类固醇有真菌感染的报道，因此当已经使用或正在使用类固醇时，任何角膜溃疡都应怀疑真菌入侵。使用局部皮质类固醇可能会导致某些患者眼压升高，从而导致视神经损伤和视野衰竭。建议经常监测眼压。与其他抗感染药一样，长期使用加替沙星可能会导致包括真菌在内的非敏感微生物的重复感染。如果发生重复感染，必须停止使用并采取替代治疗。只要临床判断表明，患者就应该接受图像放大设备的检查，例如裂隙灯、生物显微镜，如果合适的话，还可以进行荧光素染色。应告知患者，即使单次给药也会发生过敏反应，一旦出现皮疹或过敏反应迹象，应立即停止治疗并联系医生。怀孕和哺乳期：怀孕风险类别：C（FDA - 美国）。使用前摇匀瓶子。注册在对大鼠或兔子进行的研究中，口服给予加替沙星，剂量高达 50 mg/kg/天（约为眼科最大推荐剂量的 1,000 倍），未观察到致畸作用。尚未对孕妇进行过泼尼松龙的对照研究。然而实验研究表明，皮质类固醇一般对小鼠有致畸作用，反复局部眼部应用皮质类固醇治疗的动物腭裂发生率增加。由于尚未对妊娠期妇女进行对照研究，因此仅当对母亲的潜在益处大于对胎儿的潜在风险时，才应在妊娠期使用 ZYPRED®（加替沙星和泼尼松龙）。未经医生或牙医建议，怀孕期间不应使用此药。加替沙星会排泄至大鼠的乳汁中，但尚不清楚该物质是否会排泄至人乳汁中。目前尚不清楚局部眼部应用皮质类固醇是否会导致全身吸收足够量的皮质类固醇在人乳中被检测到。因此，建议在哺乳期妇女使用 ZYPRED® 时要谨慎。老年患者 老年患者与其他年龄段的患者之间在疗效和安全性上没有差异，因此对于老年人的使用没有特别的建议。儿科患者 ZYPRED® 对儿科患者的安全性和有效性尚未确定。肾功能或肝功能不全的患者：ZYPRED® 尚未对肾功能或肝功能不全的患者进行研究，因此对这些患者应谨慎使用。糖尿病患者：进行了一项开放、比较、前瞻性、纵向研究，评估了0.3%加替沙星+1.0%醋酸泼尼松龙固定组合在糖尿病患者中的疗效和安全性。在研究结束时，使用加替沙星 + 泼尼松龙的固定组合可使细菌生长减少 27.3%，而使用环丙沙星 + 泼尼松龙则可使细菌生长减少 22.7%。目前尚未发现局部眼用泼尼松龙与其他物质之间存在相互作用。剂量及使用方法 - 悬浮液已准备好使用。该药物用于局部眼部使用。请勿将瓶尖接触眼睛、手指或任何其他表面，以免污染瓶子和眼药水。答案。药物相互作用 - 没有对 ZYPRED® 进行具体的药物相互作用研究，但是，全身给药一些喹诺酮类药物会增加茶碱的血浆浓度，干扰咖啡因代谢并增加口服抗凝剂华法林及其衍生物的作用。 ，并且与同时接受环孢菌素全身治疗的患者血清肌酐短暂升高有关。治疗眼部感染的常用剂量是在受影响的眼睛上滴 1 滴，每天四次，最多 7 天。眼科手术后预防和治疗感染和炎症的常用剂量是在受影响的眼睛上涂抹 1 滴，每天 4 次，最多 15 天，但是，由于感染情况不同。 ，治疗时间可能会根据医疗判断进行修改。不良反应 - ZYPRED®（加替沙星和泼尼松龙）最常见的眼部不良反应按发生频率排列为： 非常常见的反应 (>10%)：烧灼感、眼刺激、瘙痒和眼痛。常见反应（>1% 和 <10%）：视力模糊/模糊、眼睛不适、流泪、异物感、干眼、结膜刺激、角膜炎和乳头性结膜炎。约 1% 至 4% 的研究人群中发生的其他报告反应包括：结膜水肿、结膜出血、干眼、眼部分泌物、眼部刺激、眼部疼痛、眼睑水肿、头痛、眼部发红、视力下降和变化在味道上。由于产品成分中存在泼尼松龙，可能会出现眼睑强烈烧灼感、剧烈瘙痒、肿胀或发红。在使用 ZYPRED® 进行的临床研究中，没有研究对象因出现不良反应而放弃治疗。本产品是一种新药，尽管研究表明疗效和安全性可接受，但即使指示和使用正确，也可能会发生不可预测或未知的不良事件。在这种情况下，请通过健康监测通知系统 -NOTIVISA（可在 http://www.anvisa.gov.br/hotsite/notivisa/index.htm 上获取）或向州健康监测或市政府通报不良事件。 ” 10.如果意外或故意摄入，建议饮用大量液体以稀释。如果中毒，如果您需要进一步指导，请致电 0800 722 6001。ANVISA/MS - 1.0147.0175 农场。：医生Flávia Regina Pegorer CRF-SP n° 18.150。药物过量：使用 ZYPRED®（加替沙星和泼尼松龙）不太可能发生药物过量，因为 6 毫升瓶 ZYPRED® 眼用混悬液中加替沙星和泼尼松龙的含量分别显着低于推荐的每日口服剂量。给予加替沙星和泼尼松龙。Allergan Produtos Farmacêuticos LTDA .Av。瓜鲁柳斯, 3272 - CEP 07030-000 瓜鲁柳斯 - SP。CNPJ 43.426.626/0009-24 巴西工业 - ® 注册商标。根据医疗处方销售。