将小鼠分组(n=4),在右后腿肌肉注射HBsAg、HBsAg/Al或HBsAg/HPLNP(w/w=1/600)制剂,剂量为1 µg HBsAg/只小鼠。肌肉注射后,在12、24、48和72小时通过体内成像系统FX Pro(Kodak)采集注射部位的荧光图。在不同时间点获得各组小鼠注射部位的平均荧光强度图。肌肉注射后,在12、24、48和72小时采集肠系膜淋巴结的荧光信号。计算不同组别的注射部位和肠系膜淋巴结的平均荧光强度,以比较各种疫苗制剂在抗原储存效应和淋巴结引流方面的效果。2.9 淋巴结中淋巴细胞的激活
图 1 CT26 细胞中白蛋白摄取的特征。(A)将细胞与 FITC 标记的白蛋白一起孵育。通过流式细胞术测定 FITC 阳性细胞(散点图,R2)和平均 FITC 荧光强度(条形图)(ex/em:488/530 nm,荧光强度标准化为自发荧光对照)。(B)通过流式细胞术测定内吞抑制剂 M b CD、CHP 和 EIPA(1 小时预处理)对 3 小时后 FITC 标记白蛋白摄取的影响。(A)和(B)中的值是三个独立实验的平均值 SD。通过单因素方差分析和 Dunnett 多重比较检验检验统计学显着性(* p < 0.05,** p < 0.01 和 *** p < 0.001)。 (C) 通过共聚焦显微镜验证了 FITC 标记白蛋白 (绿色) 的摄取和三种内吞抑制剂的影响。细胞核 (蓝色) 和膜 (红色) 分别用 DAPI 和 WGA 共染色。图像显示所有三个通道的叠加。 (D) 未经治疗的小鼠的 sc CT26 肿瘤中白蛋白含量的免疫组织化学分析 (用 20 和 63 物镜进行的显微镜检查)。细胞核和白蛋白分别用苏木精 (紫色) 和 3,3 0 -二氨基联苯胺 (棕色) 显影。 (E) 用 16.5 mg kg 1 荧光素标记的马来酰亚胺 (绿色) 治疗 CT26 小鼠。30 分钟和 5 小时后收获肿瘤,然后对细胞核 (DAPI,蓝色) 和血管 (内粘蛋白,红色) 进行免疫荧光染色。使用 40 倍物镜通过荧光显微镜进行评估。图像显示所有三个通道的叠加。使用 Definiens 软件计算每平方毫米的荧光强度(左图中的条形图)。荧光强度值以两个不同肿瘤样本的平均值 SD 表示。
元素I+皮质醇测试使用竞争性免疫测定来产生定量的皮质醇浓度输出。将样品添加到墨盒入口端口时,将其与干燥的荧光团标记的抗皮质醇抗体混合。混合物随后与固定在墨盒传感器表面上的皮质醇反应。皮质醇与荧光团标记的抗皮质醇抗体竞争,以与表面上的皮质醇结合。荧光照明是通过二极管激光亮到专有的平面波导墨盒镜头的二极管激光。荧光成像用于信号转导。产生的荧光与样品的皮质醇浓度成反比。荧光强度使用墨盒特异性校准信息将荧光强度转化为定量皮质醇浓度。
和流式细胞仪用于通过RWA 264.7细胞研究H40-PEG NP和ASP8 [H40-PEG@(RBC-H)] NP的摄取来评估这种能力。如图1 K,与H40-PEG加载的FITC NPS组相比,CLSM检测到的ASP8 [H40-FITC@(RBC-H)] NP的荧光强度显着弱。此外,与H40-PEG负载FITC NP相比,如流式细胞仪所示,ASP8 [H40-FITC@(RBC-H)] NPS组的相对荧光强度降低了约10%(图。1 L),与CLSM分析的结果一致(附加文件1:图S3)。这些发现表明,含有一些特殊的膜蛋白(例如CD47)的RBC-H杂种膜将H40-PEG NP赋予具有免疫逃生能力的H40-PEG NP,以避免巨噬细胞吞噬作用。因此,ASP8 [H40-FITC@(RBC-H)] NP可以避免体内巨噬细胞吞噬作用。
给药逐渐增加,注射部位减少(图3A)。有趣的是,我们发现,当TP@HSA NP在另一个站点的ST36中管理时,它将原先到达同一站点的关节(附加文件1:图S6),这意味着ST36管理可以与ST36同一站点的关节定位。如图3B所示,将穴位注射与非启示注射的注射,穴位注射可以更好地触及关节炎关节,并且肝脏的荧光强度要少得多。首先8H,TP@HSA NP可以更好地靶向关节炎关节,但是TP@HSA NPS-GEL在24h和48h时显示出优势,这意味着凝胶可以控制TP@HSA NP的释放,并帮助它们缓慢靶向关节炎。AIA大鼠爪子中的荧光强度随时间增加,其最大水平在TP NMS中的12小时发生,TP NPS凝胶中的24小时发生,这意味着凝胶可以扩展
包括荧光素在内的呫吨染料是一类在自然科学中有着广泛应用的荧光染料,荧光素衍生物是重要的荧光探针,广泛应用于各种物体的检测和光学成像。荧光素衍生物通常是在荧光素呫吨环和苯部分上引入醛基或通过酯化反应制备而成。目前的研究主要集中在将氨基与荧光素单醛连接起来,因为这些衍生物具有很高的活性,可以与分析物络合,从而增加或降低荧光强度。因此,本文旨在总结荧光素探针的不同合成方法、光学性质、可能的机理和应用,为筛选具有高灵敏度和有效生物检测的荧光素探针提供参考,进一步提高其在分析物传感检测,特别是在生物成像方面的应用。关键词: 荧光素, 呫吨, 荧光强度, 生物成像, 单醛
黄烷染料(包括荧光素)是一类众所周知的荧光染料,在天然科学中具有广泛的应用。荧光素衍生物是广泛用于检测和光学成像的重要荧光探针。荧光素衍生物通常是通过引入醛类基团或荧光素黄油环和苯基部分的酯化反应来制备的。当今的研究集中在将氨基组与荧光素单醛连接起来,因为这些衍生物显示出较高的活性,并且可以与分析物复合以增加或降低荧光强度。因此,本综述旨在总结不同的合成方法,光学特性,可能的机制和荧光素探针的应用。本文提供了筛查具有高灵敏度和有效生物学检测的荧光素探针的参考。它进一步增强了其在传感和检测分析物(尤其是生物成像)中的应用。关键词:荧光素,黄烷,荧光强度,生物成像,单醛
图2。合成,表征和DBCO修饰脂质体的体外靶向效应。(a)DBCO修饰的脂质体合成DSPE-PEG 2000 -DBCO,DOPC和胆固醇的示意图。使用DSPE-PEG 2000合成未修饰的脂质体。(b)DBCO-LIPO的大小和Zeta电位。(c)DOX和R837混合物的HPLC痕迹或dox/r837的提取物的提取物。将检测波长设置为254 nm。(d)在(c)中〜6.5分钟时检测到的DBCO脂质的UV吸收光谱。(E)用AC 4 Mannaz或PBS预处理的4T1细胞的共聚焦图像48小时,然后与DID封闭的DBCO-LIPO孵育30分钟。比例尺:10μm。(f)用AC 4 Mannaz或PBS预处理的4T1细胞的平均CY5荧光强度48小时,然后与DID封闭的DBCO-LIPO(2 mg/ml)孵育30分钟。(g)用AC 4 Mannaz预处理的4T1细胞的平均CY5荧光强度,然后与不同浓度的DID封闭DBCO-LIPO孵育30分钟。所有数值数据均表示为平均值±SD(0.01 < *p≤0.05; **p≤0.01; ***p≤0.001)。