基因编辑技术已经彻底改变了蚊子感觉双学科的领域。这些技术已被用来用神经元基因与框架敲击报告基因,并使用TAG特定的蚊子神经元使用二进制表达系统来检测其活性。尽管有这些进展,但仍需要开发新的工具来阐明嗅觉信号从pe层到大脑的传播。在这里,我们提出了一组工具的开发,包括新型驱动线和神经调节活动的传感器,这可以介绍我们对感觉输入触发行为输出的了解。这种情况可以改变我们对蚊子神经生物学的理解,并导致制定蚊子行为操纵策略以减少叮咬和疾病的传播。
概念验证研究表明,用于人类治疗的抗疟药物也可用于蚊子,以阻断疟疾传播。部署新的控制工具最好在管理计划内进行,该计划通过最大限度地降低抗药性进化的风险并减缓其一旦出现就传播的速度来最大限度地延长药物的使用寿命。我们要问:针对蚊子体内的寄生虫会产生什么流行病学和进化后果?我们的综合研究表明,针对蚊子体内的寄生虫 (i) 可以通过轻松扩展现有的流行病学框架来建模;(ii) 提供了一种功能新颖的控制方法,与针对人类寄生虫相比,它对抗药性进化的抵抗力更强;(iii) 可以延长专门用于治疗人类的抗疟药的寿命和临床效益。
雄性蚊子具有生育能力,因此可以交配并产生可存活的后代。这种蚊子经过基因改造后主要产生雄性后代(实验室中高达 95%)。雄性蚊子不会叮咬,因此不会传播疾病。由于这种蚊子不携带基因驱动技术(50% 的后代通过正常遗传携带转基因),在获得批准的野外释放中,这种基因改造只会传递有限的几代,然后就会从种群中消失,大概在两个雨季内。雄性蚊子具有父系遗传性,这意味着携带基因改造的雄性会生出大多数雄性后代,而与未携带基因改造的雄性交配的雌性会拥有 50% 雌性和 50% 雄性的正常性别比例。
按蚊对杀虫剂的抗药性和疟原虫对药物的抗药性的蔓延导致全球疟疾死灰复燃,因此开发能够克服这些障碍的控制工具成为当务之急。我们最近的研究表明,当冈比亚按蚊雌性接触到处理过的表面上的抗疟药时,可以有效阻断恶性疟原虫的传播,而不会对蚊子适应性的主要成分产生负面影响。在这里,我们证明这种方法可以克服蚊子对杀虫剂的抗药性和疟原虫对药物的抗药性的障碍。我们表明,当来自田间、对杀虫剂有抗药性的按蚊接触到强效的细胞色素b抑制剂阿托伐醌时,针对蚊子的抗疟药的传播阻断效果得以保持,表明这种药物可以逃避可能干扰其功能的杀虫剂抗药性机制。此外,这种方法还可以防止来自田间、对青蒿素有抗药性的疟原虫的传播。恶性疟原虫(Kelch13 C580Y 突变体)的抗药性,证明该策略可用于防止诱导对一线抗疟药产生抗性的寄生虫突变的传播。当蚊子将阿托伐醌摄入糖溶液中时,包括在持续感染中,阿托伐醌在限制寄生虫发育方面也非常有效。这些数据支持使用针对蚊子的抗疟药作为补充和扩大当前疟疾控制干预措施有效性的有希望的工具。
出路是什么?当然不是通过自然感染来免疫的,这在丧失和经济毁灭性中几乎无法想象。疾病跟踪和隔离,足以控制其他新兴的冠状动脉疾病,严重的急性急性疾病综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)(MERS)是有用的,但对Covid-19没有足够的帮助,但由于其在症状发育之前发射的能力而对此不足。跟踪和隔离以及戴着口罩和身体距离,是减慢疾病传播的必要量子措施。然而,有效的严重急性呼吸综合症冠状病毒2(SARS-COV-2)对策,即抗病毒药和疫苗,是长期前进的唯一合理途径。抗病毒疗法的开发速度很慢,即使现在,Remdesivir是唯一一种直接作用的抗病毒药物,在有限情况下对SARS-COV-2(SARS-COV-2,AL-BEIT)进行了证实的疗效,这在有限的情况下导致了治疗严重疾病的食品和药物管理(FDA)的紧急使用授权。治疗性抗体治疗也显示出希望,其中一些同样也获得了FDA紧急使用。,但是我们最希望将Covid-19放入后视镜中的最佳希望是广泛可用的,安全且有效的疫苗。幸运的是,辉瑞制造的基于RNA的疫苗的临床试验的初步结果表明,至少在临床试验的背景下,至少某些SARS-COV-2疫苗配方具有高效。
淡色库蚊复合体分布广泛,导致蚊媒疾病在人类中的传播难以预防。使用 CRISPR/Cas9 基因编辑是一种有效的技术,有可能解决日益严重的蚊媒疾病问题。本研究利用 ReMOT 控制技术在淡色库蚊中生产转基因蚊子。通过注射 60 只成年雌蚊建立了显微注射系统——需 14 µ l 注射混合物,使用≤1 µ l 的内体释放试剂(氯喹或皂苷)不会发生沉淀。在采血后 24 小时(卵黄发生高峰期)注射 P2C 增强型绿色荧光蛋白-Cas9(P2C-EGFP-Cas9)核糖核蛋白复合物进入卵巢的效率为 100%。利用此方法进行KMO敲除,我们发现当通过ReMOT Control将P2C-Cas9 RNP复合物注射到淡色库蚊成年血淋巴中时,卵巢中也能发生基因编辑。在氯喹组,筛选出的2,251只G 0 子代中,9只个体表现出白眼和马赛克眼表型。在皂苷组,筛选出的2,462只G 0 子代中,观察到8只突变个体。测序结果显示13 bp的缺失,进一步证实了发生基因编辑的事实。总之,ReMOT Control在淡色库蚊中的成功应用,不仅为该方法提供了基本参数(注射参数和注射时间),而且有利于蚊虫生物学和防治的研究。
摘要微生物 - 微生物相互作用如何决定蚊子中的微生物复杂性。以前,我们发现,Serratia是一种改变载体能力并被视为媒介控制的肠道共生体,在相同条件下饲养的Culex quinquefasciatus中繁殖的埃及埃及埃及埃及。研究Serratia和Ae之间的不相容性。aegypti,我们表征了两种来自CX的serratia marcescens菌株。Quinquefasciatus并检查了他们感染AE的能力。埃及。两种Serratia菌株都感染了AE。aegypti,但是当微生物组的稳态破坏时,塞拉蒂亚的流行率和滴度与其本地宿主中的感染相似。检查多种遗传多样的AE。埃及线发现微生物干扰对马可氏链球菌很普遍,但是,AE的一条线。埃及很容易感染。对抗性和易感线的微生物组分析表明,肠杆菌科细菌与塞拉蒂亚之间存在逆相关性,以及在gnotobirotic系统中的实验共感染概括了干扰表型。此外,我们观察到对宿主行为的影响。暴露于AE的锯齿状。埃及破坏了他们的喂养行为,这种表型也依赖于与天然微生物群的相互作用。我们的工作强调了宿主的复杂性 - 微生物相互作用,并提供了微生物相互作用影响蚊子行为的证据。
未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者(此版本于 2020 年 5 月 15 日发布。;https://doi.org/10.1101/2020.05.13.094995 doi:bioRxiv preprint
在 CRISPR-Cas 系统中,Cas13a 是一种 RNA 引导的 RNA 核酸酶,专门靶向单链 RNA。我们开发了一种 Cas13a 介导的 CRISPR 干扰工具,以靶向 mRNA 来实现蚊子的基因沉默。通过胸内注射将表达 Cas13a 的质粒递送给蚊子,递送后至少 10 天仍可检测到 Cas13a 转录本。使用 T7 RNA 聚合酶在体外合成靶向特异性 crRNA。Cas13a 质粒和靶向 crRNA 可以通过胸内注射一起递送,或者可以先提供 Cas13a 构建体,然后在适当的时候提供靶向 crRNA。在两种蚊子中测试了该机制。在冈比亚按蚊中,卵黄蛋白基因被 Cas13a/Vg-crRNA 沉默,同时伴有产卵量显著下降。在埃及伊蚊中,COPI 基因的 α 和 δ 亚基被 Cas13a/crRNA 沉默,导致死亡和中肠脆弱,重现了之前报道的表型。当提供目标 crRNA 混合物时,可以同时实现基因共沉默。研究中未观察到非目标转录本的可检测的附带切割。除了 dsRNA 或 siRNA 介导的 RNA 干扰外,可编程的 CRISPR 干扰方法提供了一种在蚊子中敲除基因的替代方法。