摘要:自由基定向解离 (RDD) 是一种碎裂技术,其中通过选择性 213/266 nm 光解离碳 − 碘键产生的自由基被重新分离并碰撞活化。在之前的 RDD 实验中,碰撞活化是由离子阱碰撞诱导解离 (CID) 实现的。高能碰撞解离 (HCD) 与 CID 的不同之处在于离子的激发方式以及观察到的碎片的数量、类型或丰度。在本文中,我们探讨了 HCD 在 RDD 实验中的活化用途。尽管无论采用何种活化能,RDD-CID 都有利于由自由基定向途径(例如 a/z 离子和侧链损失)产生的碎片,但 RDD-HCD 光谱随活化能的变化而变化很大,较低的能量有利于 RDD,而较高的能量有利于由移动质子(b/y 离子)引导的裂解产生的产物。因此,RDD-HCD 可以根据提供的 HCD 能量提供更可调的碎片。重要的是,随着 HCD 能量的增加,自由基产物的丰度会降低,这证实了 RDD 通常通过较低能量屏障进行,而不是通过移动质子驱动的解离。因此,对于 RDD-HCD,b/y 离子在较高能量下占主导地位可以通过在初始或后续解离事件后不含自由基的碎片的更高存活率来解释。此外,这些结果证实了先前的猜测,即由于多次解离事件,HCD 光谱与 CID 光谱不同。关键词:碎片化、光解离、自由基定向解离、高能碰撞解离、碰撞诱导解离■ 简介
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2023年3月13日发布。 https://doi.org/10.1101/2023.03.13.13.532460 doi:Biorxiv Preprint
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该预印本版的版权持有人于2023年6月22日发布。 https://doi.org/10.1101/2023.03.13.13.532460 doi:Biorxiv Preprint
摘要:使用CRISPR-CAS9核酸酶进行基因组编辑是基于DNA双重断裂(DSB)的修复。在真核细胞中,DSB通过同源指导的修复(HDR),非同源末端连接(NHEJ)或微学介导的终端连接(MMEJ)途径重新加入。其中,人们认为NHEJ途径是主导的,并且发生在整个细胞周期中。已知基于NHEJ的DSB维修是错误的;但是,很少有研究深入研究内源基因。在这里,我们通过掺入外源性DNA寡核苷酸来量化基于NHEJ的DSB修复精度(称为NHEJ精度)。通过对DSB发生后的外源性DNA和内源性靶点之间的连接序列的分析,我们确定NHEJ准确性的平均值在HEK 293T细胞中的最大值约为75%。在深入的分析中,我们发现NHEJ的精度依赖于序列,并且DSB端的近端邻近基序(PAM)的值相对较低,低于PAM远端的DSB。此外,我们观察到插入突变比与NHEJ准确性程度之间存在负相关。我们的发现将扩大对CAS9介导的基因组编辑的理解。
g,靶向必需(红色)和非必需(蓝色)基因(n = 4个GRNA)的单个GRNA的归一化耗竭。钻石表示GRNA的中位数。中间95%的非靶向(NT)GRNA的分布以灰色显示。箱图表明所有靶向必不可少的GRNA(平均DEPMAP计时<-1,n = 1,095个细胞系)(红色)和非必需(Chronos> -0.25)(蓝色)基因(蓝色)基因和HAP1细胞中的基因,并使用两侧Mann -Whitney U Test确定了显着性。
警告和预防措施,以进行体外诊断使用。 供训练有素的实验室人员使用。 该产品含有干燥的天然橡胶。 致病性微生物,包括肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒,可能存在于临床标本中。 “标准预防措施” 1-4和机构指南应遵循处理所有被血液和其他体液污染的物品。 在使用之前,应检查每个小瓶的损害,污染或恶化的证据。 小瓶显示损坏或污染的证据,例如泄漏,云彩,变色(变暗),凸起或凹陷的隔膜不应使用。 受污染的小瓶可能包含正压。 如果使用受污染的小瓶进行直接绘制,则可以将受污染的培养基回流到患者的静脉中。 小瓶污染可能不容易显而易见。 使用直接拉动程序时,请密切监视该过程,以避免将材料回流为患者。 在极少数情况下,玻璃瓶脖子可能会破裂,并且在移除翻转盖或处理过程中可能会断裂。 同样,在极少数情况下,小瓶可能无法充分密封。 在两种情况下,小瓶的内容物可能会泄漏或溢出。 如果已经接种了小瓶,请谨慎处理泄漏或溢出,因为可能存在致病生物/剂。 在丢弃之前,通过高压灭菌对所有接种的小瓶进行消毒。 阳性培养小瓶用于亚培养或染色等。 有关亚培养的更多信息,请参见过程部分。警告和预防措施,以进行体外诊断使用。供训练有素的实验室人员使用。该产品含有干燥的天然橡胶。致病性微生物,包括肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒,可能存在于临床标本中。“标准预防措施” 1-4和机构指南应遵循处理所有被血液和其他体液污染的物品。在使用之前,应检查每个小瓶的损害,污染或恶化的证据。小瓶显示损坏或污染的证据,例如泄漏,云彩,变色(变暗),凸起或凹陷的隔膜不应使用。受污染的小瓶可能包含正压。如果使用受污染的小瓶进行直接绘制,则可以将受污染的培养基回流到患者的静脉中。小瓶污染可能不容易显而易见。使用直接拉动程序时,请密切监视该过程,以避免将材料回流为患者。在极少数情况下,玻璃瓶脖子可能会破裂,并且在移除翻转盖或处理过程中可能会断裂。同样,在极少数情况下,小瓶可能无法充分密封。在两种情况下,小瓶的内容物可能会泄漏或溢出。如果已经接种了小瓶,请谨慎处理泄漏或溢出,因为可能存在致病生物/剂。在丢弃之前,通过高压灭菌对所有接种的小瓶进行消毒。阳性培养小瓶用于亚培养或染色等。有关亚培养的更多信息,请参见过程部分。:在取样之前,有必要释放由于微生物代谢而经常积累的气体。应戴上适当的防护服,包括手套和口罩。为了最大程度地降低样品在培养小瓶中接种时泄漏的潜力,请使用带有永久连接针或BD Luer-Lok™品牌提示的注射器。
抽象的简介和目标。目前,几种微生物疾病是突出的,并且在全球范围内引起关注。这项研究的目的是检查新合成的四元大环络合物对不同性菌株的抗菌潜力。大环脚手架因其独特的特性和靶向各种微生物的能力而引起了一种生物活性超分子化学的关注。因此,本研究的目的是开发一系列具有生物活性的基于金属金属的大环。材料和方法。通过模板方法合成所有大环化合物,并通过摩尔电导,元素研究以及光谱和磁研究验证。通过服用氨苄青霉素作为标准参考药物,评估了所有金属复合物的抗菌活性(MTCC 739)和金黄色葡萄球菌(MTCC 731)细菌菌株的抗菌活性。DNA光电分析电位。结果。结果揭示了通过金属的四氮键捕获而形成了新型大环复合物。铜的复合物具有针对金黄色葡萄球菌的强大潜力,因为铜和镍都显示出良好的DNA光裂解电位。结论。这些发现认可这些大环脚手架的生物医学相关性,这表明在靶向药物输送和潜在的临床应用中进一步进行了进一步的途径。构建的八面体几何形状增强了我们对它们结构方面的理解。关键字。这项研究为该领域做出了实质性的贡献,为晚期抗菌设计和应用的未来研究奠定了基础。抗细菌,DFT,DNA光裂,分子对接,模板方法
福尔马林对自然史标本和组织病理学材料的固定历史上一直被视为成功基因组分析的障碍。然而,专门定制的提取方法的开发是与重度交联的档案构成抗衡的,将数百万先前被忽视的标本重新连接为可行的分子资产。在这里,我们提出了一种易于遵循的方案,用于筛选档案湿标本,用于分子活力和随后的基因组DNA提取,适合测序。该协议始于对标本降解和保存介质条件的非破坏性评估,使博物馆策展人和研究人员都可以选择在短阅读DNA测序期间最有可能产生可接受的比例(20-60%)的内源性DNA的标本。提取方案在缓冲液中使用热碱性裂解(0.1M NaOH,1%SDS,pH 13),同时裂解组织并脱离组织。为了最大程度地提高DNA恢复,苯酚:氯仿提取与小碎片优化的Spri Bead清洁结合。适用于保存完好的档案组织,该方案可以产生每50 mg组织的1-2μgDNA,其平均碎片大小通常在50-150 bp的范围内,该尺寸适合恢复足以恢复足够的基因组DNA,足以重建完整的线粒体基因组并获得高达25X核基因组的覆盖率。我们提供了向参考基因组读取映射的指导,并讨论了依靠小片段进行SNP基因分型和从头基因组组装的局限性。该协议为历史标本的更广泛的遗传和系统发育分析打开了大门,有助于更深入地了解进化趋势和适应性,以响应不断变化的环境。
很快就出现了。In this context, inspired by the growing interest in quadruplex nucleic acid structures and their myriad puta- tive biological functions, the Thomas group made the first report on a “ quadruplex light-switch ” , identifying a dinuclear complex, [{Ru(phen) 2 } 2 (tpphz)] 4+ (tpphz = tetrapyrido[3,2- a :2 ′ ,3 ′ - c:3'',2“ - h:2''',3''' - j]苯胺,将螺纹伸入四鲁 - plex回路中,导致“切换”状态,比其非相互缩放的养殖型结合; 21效应也可以用于在双链体和四链体结构之间差异。22在接下来的几年中,已经报道了有关RU II复合物的大量研究及其与四链体和其他相关结构的相互作用。23 - 27