请引用本文:Toda and Okamoto,(2020)。通过将大分子直接递送到水稻卵细胞和受精卵中的基因表达和基因组编辑系统,Bio-protocol 10 (14): e3681。DOI:10.21769/BioProtoc.3681。
1。重组质粒设计7 2。初始质粒提取7 3。消化和连接7 4。转换8 5。质粒提取,纯化和DNA测序8 6。蛋白质表达8 7。蛋白质纯化9
抽象脂质体是可以封装各种药物的多功能载体。但是,要向大脑传递,必须通过靶向配体或其他修饰进行修饰,以提供血脑屏障(BBB)的渗透性,同时避免通过聚乙烯甘油(PEG)修饰通过网状内皮系统快速清除。BBB渗透肽充当脑靶向配体。在这项研究中,为了实现脂质体有效的大脑递送,我们基于使用体外BBB通透性评估系统的高通量定量评估方法,筛选了先前报道的八个BBB渗透肽的功能,该方法使用Transwell,在原位脑灌注系统等。For apolipoprotein E mimetic tandem dimer peptide (ApoEdp), which showed the best brain-targeting and BBB permeability in the comparative evaluation of eight peptides, its lipid conjugate with serine–glycine (SG) 5 spacer (ApoEdp-SG-lipid) was newly synthesized and ApoEdp-modified PEGylated liposomes were准备。apoEDP修饰的卵子脂质体有效地与人脑毛细血管内皮细胞通过ApoEDP序列有效相关,并在体外BBB模型中渗透了膜。此外,在大脑中积累的apoEDP修饰的卵形脂质体比小鼠中的脂肪体高3.9倍。此外,通过三维成像和组织清除,证明了apoEDP修饰的pe乙型脂质体在小鼠中局部将BBB局部局部到脑实质中的能力。这些结果表明,ApoEDP-SG脂质修饰是一种有效的方法,它可以赋予具有脑靶向能力和BBB渗透性的质脂质体。
目前,CRISPR/Cas9 的使用是植物(包括生物量作物杨树)精确基因组工程的首选方法。在杨树中传递 CRISPR/Cas9 及其成分的最常用方法是通过农杆菌介导的转化,除了所需的基因编辑事件外,还会导致稳定的 T-DNA 整合。在这里,我们探索了通过 DNA 包被的微粒轰击将基因编辑试剂传递到模型树 Populus tremula x P. alba 中,以评估其开发无转基因、基因编辑树的潜力,以及其在特定靶位整合供体 DNA 的潜力。使用优化的转化方法,有利于再生暂时表达所传递供体 DNA 上基因的植物,我们再生了不含 Cas9 和抗生素抗性编码转基因的基因编辑植物。此外,我们报告了供体 DNA 片段在 Cas9 诱导的双链断裂处频繁整合,为靶向基因插入提供了机会。
通过多米尼科·蒙特萨诺(Domenico Montesano)49,80131 Naples,意大利B 891,BB生物学,化学和药物科学和技术系(RUISCEF) -Cnr, Ugo La Malfa 153, Palermo 90146, Italy D University of Granada, Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, 18071 Granada, Spain and Andalusian Institute of Earth Sciences, Csic-Ugr, 18100 Armilla, Granada, Spain Fo Laboratory for Molecular Photonics, Department of Chemistry, University of Miami, 1301 Memorial Drive,Coral Gables 33146-0431,佛罗里达州佛罗里达州G,美国分子医学和医学生物技术部,通过塞尔吉奥·潘西尼(Sergio Pansini)5,80131 naples,意大利h意大利化学科学系,Viale Andrea Doria 6,95125 CATANIA,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,通过多米尼科·蒙特萨诺(Domenico Montesano)49,80131 Naples,意大利B 891,BB生物学,化学和药物科学和技术系(RUISCEF) -Cnr, Ugo La Malfa 153, Palermo 90146, Italy D University of Granada, Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, 18071 Granada, Spain and Andalusian Institute of Earth Sciences, Csic-Ugr, 18100 Armilla, Granada, Spain Fo Laboratory for Molecular Photonics, Department of Chemistry, University of Miami, 1301 Memorial Drive,Coral Gables 33146-0431,佛罗里达州佛罗里达州G,美国分子医学和医学生物技术部,通过塞尔吉奥·潘西尼(Sergio Pansini)5,80131 naples,意大利h意大利化学科学系,Viale Andrea Doria 6,95125 CATANIA,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,通过多米尼科·蒙特萨诺(Domenico Montesano)49,80131 Naples,意大利B 891,BB生物学,化学和药物科学和技术系(RUISCEF) -Cnr, Ugo La Malfa 153, Palermo 90146, Italy D University of Granada, Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, 18071 Granada, Spain and Andalusian Institute of Earth Sciences, Csic-Ugr, 18100 Armilla, Granada, Spain Fo Laboratory for Molecular Photonics, Department of Chemistry, University of Miami, 1301 Memorial Drive,Coral Gables 33146-0431,佛罗里达州佛罗里达州G,美国分子医学和医学生物技术部,通过塞尔吉奥·潘西尼(Sergio Pansini)5,80131 naples,意大利h意大利化学科学系,Viale Andrea Doria 6,95125 CATANIA,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,通过多米尼科·蒙特萨诺(Domenico Montesano)49,80131 Naples,意大利B 891,BB生物学,化学和药物科学和技术系(RUISCEF) -Cnr, Ugo La Malfa 153, Palermo 90146, Italy D University of Granada, Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, 18071 Granada, Spain and Andalusian Institute of Earth Sciences, Csic-Ugr, 18100 Armilla, Granada, Spain Fo Laboratory for Molecular Photonics, Department of Chemistry, University of Miami, 1301 Memorial Drive,Coral Gables 33146-0431,佛罗里达州佛罗里达州G,美国分子医学和医学生物技术部,通过塞尔吉奥·潘西尼(Sergio Pansini)5,80131 naples,意大利h意大利化学科学系,Viale Andrea Doria 6,95125 CATANIA,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,通过多米尼科·蒙特萨诺(Domenico Montesano)49,80131 Naples,意大利B 891,BB生物学,化学和药物科学和技术系(RUISCEF) -Cnr, Ugo La Malfa 153, Palermo 90146, Italy D University of Granada, Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, 18071 Granada, Spain and Andalusian Institute of Earth Sciences, Csic-Ugr, 18100 Armilla, Granada, Spain Fo Laboratory for Molecular Photonics, Department of Chemistry, University of Miami, 1301 Memorial Drive,Coral Gables 33146-0431,佛罗里达州佛罗里达州G,美国分子医学和医学生物技术部,通过塞尔吉奥·潘西尼(Sergio Pansini)5,80131 naples,意大利h意大利化学科学系,Viale Andrea Doria 6,95125 CATANIA,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,意大利,
干细胞移植已成为再生医学的基石,因为它能够分化为各种细胞类型及其在免疫调节,治疗免疫学疾病和血液学恶性肿瘤中的潜在应用(1)。在各种干细胞类型中,多能胚胎干细胞(ESC)和多能干细胞(ASC)的分化潜力进行了广泛的研究。ESC具有较高的多能性,使它们能够在人体中产生任何细胞类型。然而,围绕其使用的伦理问题导致人们更加关注替代来源,例如诱导的多能干细胞(IPSC)和ASC,包括间质干细胞(MSC),神经干细胞(NSC)和血肿干细胞(HSC)。MSC通过调节T,B,天然杀伤(NK)和树突状细胞来显示免疫调节作用,使其成为自身免疫和炎症性疾病的有前途的工具(2,3)。来自人类脐带血的HSC已广泛用于造血和免疫相关疾病的移植疗法中(4)。HSC移植(HSCT)取得成功,取决于归宿,迁移,植入,自我更新和分化。这些复杂的过程受生长因子,细胞因子和利基相互作用的调节。尽管HSCT具有治疗潜力,但诸如移植物抗宿主病(GVHD),移植排斥和可变的患者结局等挑战持续存在。正在探索诸如免疫耐受性诱导和遗传的策略以及治疗修饰,以增强干细胞的存活和整合(5-8)。正在探索诸如免疫耐受性诱导和遗传的策略以及治疗修饰,以增强干细胞的存活和整合(5-8)。最近的进步表明,将计算模型与免疫数据集成为改善干细胞移植的新途径(9)。机器学习模型可以鉴定重新生成医学中涉及自我更新和谱系规范的关键转录因子和基因网络(10,11)。这些方法还促进了健康干细胞和癌症干细胞(CSC)的比较,这有助于开发恶性肿瘤的靶向疗法(12,13)。免疫学研究主题的前沿,“使用计算建模改善干细胞移植交付”典范这种跨学科方法,并在一系列编译的文章中汇集了开创性的研究,从而贡献了独特的
摘要电网中电池储能系统(BES)的集成正在加速以减轻与低碳技术(LCT)快速部署相关的挑战。这项工作调查了BES为电力网络提供重要辅助服务的能力,例如通过与北爱尔兰的分销网络运营商合作进行的两个案例研究,例如剃须和电网功率升级。开发了一种由两种策略组成的强大方法,可以强大地运行BES,以增强分销网络的运行。第一个策略是日期安排,旨在调度分布式的BES,以平滑电网功率并减轻电压和线应力。强大的需求预测算法被用于有效地应用日期安排。第二种策略是将网格功率弄平的实际时间操作,该电网能力可以单独使用或调整从预测误差的日期策略中获得的结果。使用实际测量结果验证了拟议的方法,并应用于英国北爱尔兰的11 kV分销网络。量化了爱尔兰岛可用的不同服务中的参与中的预期收入,并考虑了退化。
摘要:使用治疗蛋白特异性阻断或降解胞质靶标的能力将带来巨大的治疗机会。在过去的几年中,在组织靶向,胞质递送和催化靶向灭活靶标方面已经取得了进展,从而将这一目标置于范围内。在这里,我们开发了一种数学模型,专门用于评估胞质蛋白传递方法,涉及从系统给药到易位到细胞质和目标参与的所有步骤。着眼于固体癌组织,我们利用该模型来研究微血管轴承能力,受体及性,靶向受体的细胞密度以及活性(阻断/降解)对治疗势的影响。我们的分析为蛋白质设计的合理选择提供了指导,以增强活性,并强调对受体密度以及受体内在化率的函数调整受体的重要性。此外,我们还提供了有关酶促货物如何以非常低的催化速率增强治疗活性的分布,程度和持续时间的定量见解。我们的结果表明,通过当前的蛋白质工程方法,蛋白质递送蛋白质以获得治疗作用的目的是可以触及的。