粉末外观 浅黄色,可能略带绿色,均匀,自由流动的粉末。 凝胶 坚固,与 MV424 的 2.0% 琼脂凝胶相当。 颜色和透明度 浅琥珀色,在培养皿中形成非常微乳白色的凝胶,在试管中形成非常微乳白色的溶液。 反应 4.1% w/v 的 MV424 或 2.1% w/v 的 MV425 水溶液在 25°C 下的反应为 pH 6.2 ± 0.2。 培养反应 在 25-30°C 下孵育 40 -72 小时后观察到的培养特征。生物体 (ATCC) 生长 pH 3.4 时生长 pH 6.2 时黑曲霉 (16404) 良好-茂盛 良好-茂盛 白色念珠菌 (10231) 良好-茂盛 良好-茂盛 酿酒酵母 (9763) 良好-茂盛 良好-茂盛 莱希曼乳杆菌 (4797) 较差 良好-茂盛 大肠杆菌 (25922) 受抑制 良好-茂盛
1,美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学生物学系| 2美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学遗传学系| 3美国密歇根州安阿伯市密歇根大学医学院| 4美国科罗拉多州奥罗拉(Aurora)的科罗拉多州Anschutz大学医学校园生物化学与分子遗传学系| 5蜂窝和分子生物学,加利福尼亚州立大学,诺斯里奇,美国加利福尼亚州诺斯里奇| 6国际人类基因组研究实验室,墨西哥Querétaro的JuriquillaQuerétaro大学NacionalAutónomadeMéxico(UNAM)| 7美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学地球系统科学系| 8 Biocontol和Molecular Ecology,Manaaki wherua - Landcare Research,Lincoln,新西兰| 9新西兰奥克兰大学奥克兰大学生物科学学院1,美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学生物学系| 2美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学遗传学系| 3美国密歇根州安阿伯市密歇根大学医学院| 4美国科罗拉多州奥罗拉(Aurora)的科罗拉多州Anschutz大学医学校园生物化学与分子遗传学系| 5蜂窝和分子生物学,加利福尼亚州立大学,诺斯里奇,美国加利福尼亚州诺斯里奇| 6国际人类基因组研究实验室,墨西哥Querétaro的JuriquillaQuerétaro大学NacionalAutónomadeMéxico(UNAM)| 7美国加利福尼亚州斯坦福大学斯坦福大学地球系统科学系| 8 Biocontol和Molecular Ecology,Manaaki wherua - Landcare Research,Lincoln,新西兰| 9新西兰奥克兰大学奥克兰大学生物科学学院
基因组编辑工具箱对于探索和利用非常规酵母物种作为细胞工厂至关重要,因为它们促进了基因组研究和代谢工程。非常规酵母中间假丝酵母 (Candida intermedia) 是一种在生物技术上很有趣的物种,因为它能够将多种碳源(包括林业和奶制品行业废弃物和侧流中的木糖和乳糖)转化为增值产品。然而,由于缺乏针对该物种的分子工具,迄今为止,进行基因操作的可能性有限。我们在此描述了一种针对中间假丝酵母 (C. intermedia) 的基因组编辑方法的开发,该方法基于电穿孔和基因删除盒,其中包含白色假丝酵母 NAT1 显性选择标记,两侧是与目标基因座同源的 1000 个碱基对序列。针对 ADE2 基因的线性删除盒最初导致的靶向效率 < 1%,这表明中间假丝酵母 (C. intermedia) 主要使用非同源末端连接来整合外来 DNA 片段。通过开发一种基于分裂标记的 C. intermedia 缺失技术,我们成功提高了同源重组率,实现了高达 70% 的靶向效率。对于无标记缺失,我们还将分裂标记盒与重组酶系统结合使用,从而能够通过标记回收构建双缺失突变体。总体而言,分裂标记技术被证明是一种快速可靠的 C. intermedia 基因缺失方法,这为揭示和增强其细胞工厂潜力提供了可能性。
这项研究评估了饮食中的葡萄球菌酿酒酵母和酿酒酵母对疫苗接种的鸟类的免疫力,以疫苗接种了甲壳虫的鸟类和沙门氏菌。总共将105个男性柯布500个肉鸡分为四组:T1(接种疫苗,无补充,n = 30),T2(接种疫苗,S。Boulardii补充剂,n = 30),T3(接种疫苗,S。cerevisiae补充剂,补充剂,n = 30),n = 30)和T4(无疫苗接种,无补充,n = 15)。鸡接受玉米豆饮食,用1x10 7 cfu/g的s。boulardii或S. cerevisiae接受42天。通过间接ELISA和白细胞计数评估免疫反应。在21天后,两个补充组的IGY水平明显高于接种疫苗的对照(p <0.05)。S。boulardii补充增加了淋巴细胞(p = 0.003)和杂脂降低(p = 0.004),而酿酒酵母没有显着影响。在42天的酿酒酵母和boulardii组中,杂质/淋巴细胞比分别降低了23.4%和32.8%,在21天时没有变化。这些结果表明,Boulardii和S.酿酒酵母可以提高肉鸡的免疫力和整体健康状况。
摘要 通过等位基因置换进行基因定点突变是功能基因组分析和代谢工程的重要内容,但传统的通过选择标记对必需基因进行定点突变的方法存在很大挑战,因为第一步必需基因敲除将导致致死的表型。本文利用CRISPR/Cas9系统,发展了一种两端选择标记(Two-ESM)方法对酿酒酵母中的必需基因进行定点突变,成功构建了酿酒酵母必需基因ERG20(编码法呢基二磷酸合酶)的单突变和双突变体,突变效率达100%。此外,与传统方法相比,Two-ESM方法显著提高了突变效率,简化了遗传操作程序。通过动态调控突变基因的表达和整合模块的优化,进一步提高了基因组整合和突变效率。这种 Two-ESM 方法将有助于构建酵母功能基因组分析和代谢通量调控所需的必需基因的基因组突变。
*对应作者的电子邮件:b.yelikbayev@satbayev.university摘要贝克的酵母酵母酿酒酵母,属于Ascomycota酵母类型,并且是厌食症,在生态和进化生物学,生物学生物学,生物学和工业杂种中,尤其是疗养的生态学和进化生物学和工业生物学,尤其是Intivestions in in in trow the Intives in to in to anaerobic。S。酿酒酵母在糖含量较高的底物上生长,并且是面粉和糖果产品中的重要成分。这项研究揭示了贝克酵母菌酿酒酵母的基本和应用生物学,并揭示了用营养富集甜菜糖蜜的技术方法,以提高生物量的产量。如今,如研究所示,富含营养的甜菜糖蜜的技术方法具有不同的溶液。在酿酒酵母生物量生产的技术中,使用了二倍体细胞的群体,因为与单倍体细胞相比,它们在遗传上更稳定,其特征是更快,更活跃的代谢和更大的大小。关键词:酿酒酵母,贝克酵母的生物化学,碳代谢,培养,糖蜜,生物量,生态学。文章类型:评论文章。
私营部门。因此,链接FSC也不能免疫这种放缓(Reardon等,2020)。由于运动的豁免以及导致客户恐慌购买和储存行为的谣言,因此,观察到对货架稳定的食品的需求显着增加,因此,这些产品的储备(Kamble and Mor,2021; Troskie; Troskie,2020年)。印度社会一部分收入的损失也赞成这种态度,因此,食品价格急剧上涨。政府机构和一些非政府组织不断努力弥补这一损失,并定期供应这些主要必要产品。印度政府已将170万印度卢比的人释放给不同州,为贫困和移民工人寻求资金(Ranjith and Varma,2020年)。印度粮食经济占85%,取决于微型,中小型企业(MSMES),由202020年5月12日的印度荣誉总理宣布了2000万印度卢比的200万印度卢比的巨型救济经济包(约10%的印度GDP)。此包装支持相关的农业食品农民,劳动者,家庭手工业和中产阶级人士。农业和粮食安全存在很大的风险,因为消费的食品中有92%是从FSC购买的,并通过私营部门提供给消费者。需要适当的FSC规划和管理,以避免由于19020年的粮食危机而避免粮食危机(Reardon等,2020; Stauffer等,2018; Zurayk,2020; Ivanov和Dolgui,2020; Carberry and Padhee,2020)。
摘要:基因组整合是微生物工业生产中基因表达的首选方法,但传统的基于同源重组的多重整合方法往往存在整合效率低、实验步骤复杂的问题。本文报道了一种基于CRISPR/Cas9的酿酒酵母多重整合(CMI)系统,该系统可在无需预先改造宿主的情况下在单个基因座实现四重整合。以融合蛋白Cas9-Brex27为诱饵,将Rad51重组酶吸引至CRISPR/Cas9系统引入的双链断裂附近。40 bp同源臂可将四重整合效率提高至53.9%,100 bp同源臂可将四重整合效率提高至78%。CMI被用于通过一步转化整合由四个基因组成的异源mogrol生物合成途径,为多重整合提供了一种有效的解决方案。该方法扩展了酿酒酵母的合成生物学工具箱。关键词:CRISPR/Cas9、多重整合、酿酒酵母、Brex27、合成生物学、代谢工程■ 简介
最近,出现了一种新的蛋白质蛋白质相互作用研究的方法。可以使用田野和同事开发的“两杂交系统”(1,2)来寻找新的相互作用蛋白质,或者验证和表征可能会根据遗传或生物化学数据关联的蛋白质之间的相互作用。两种杂交系统是一种分子遗传方法,它利用酵母转录因子GAL4的结构柔韧性。GAL4蛋白包含两个结构域,即DNA结合域和转录激活剂结构域。这两个结构域不必成为同一蛋白的一部分来完成转录激活(3)。当两个结构域分别融合到两个无关但相互作用的蛋白质时,由于蛋白质 - 蛋白质相互作用,可以实现转录激活。通常,使用两种杂交系统对新的相互作用蛋白进行搜索是通过将含有UASC的集成拷贝的酵母菌菌株共转换。1J-LACZ报告基因和两个质粒(2,4-6)。一个质粒编码GAL4的DNA结合结构域与感兴趣的蛋白质的融合,而另一个质粒(库质粒)编码GAL4转录激活结构域的融合以随机生成的编码区域。因此,DNA结合结构域融合将与报告基因上游的UASGAL元件结合。如果由文库融合质粒编码的蛋白质与感兴趣的蛋白质相互作用,则转录激活结构域成为报告基因上游的共定位,从而导致转录激活。有效使用两个杂交系统需要产生大量的酵母转化体。由于酵母的转化仍然比细菌的效率低四个数量级,因此对于详尽的cDNA文库筛网来说,转化可能是限制步骤。在本文中,我们设计了一种简单的方法,可以消除对转化的需求,并允许用户搜索
摘要 全基因组功能性遗传筛选已成功发现基因型-表型关系并设计新表型。虽然广泛应用于哺乳动物细胞系和大肠杆菌,但在非常规微生物中的使用受到限制,部分原因是无法准确设计此类物种的高活性 CRISPR 向导。在这里,我们开发了一种针对所选生物体(在本例中为产油酵母解脂耶氏酵母)的 sgRNA 设计实验计算方法。在不存在非同源末端连接(主要的 DNA 修复机制)的情况下进行负选择筛选,用于生成 SpCas9 和 LbCas12a 的单个向导 RNA (sgRNA) 活性谱。这种全基因组数据作为深度学习算法 DeepGuide 的输入,该算法能够准确预测向导活性。 DeepGuide 使用无监督学习来获取基因组的压缩表示,然后通过监督学习来映射具有指导活性的 sgRNA 序列、基因组背景和表观遗传特征。全基因组和选定基因子集的实验验证证实了 DeepGuide 能够准确预测高活性 sgRNA。DeepGuide 提供了一种生物体特异性的 CRISPR 指导活性预测因子,可广泛应用于真菌物种、原核生物和其他非常规生物。