。CC-BY 4.0 国际许可(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2025 年 1 月 1 日发布。;https://doi.org/10.1101/2024.12.31.630865 doi:bioRxiv 预印本
实验在验尸后24小时内完成,这些健康细胞在单细胞转录组学实验中产生高质量的数据。这些血管细胞可以进行培养,转移和扩展,以进行许多体外测定,包括矩阵血管管形成,微流体腔室和代谢测量。在这些培养条件下,初级血管细胞至少三周保持细胞类型标记的表达。最后,我们描述了如何使用原代血管细胞将其移植到皮质器官中,该细胞捕获了产前人脑发育中神经血管相互作用的关键特征。就时间,组织加工和染色而言,大约需要3个小时,然后再花费3个小时的FACS。原发性FACS纯化的血管细胞中的移植程序需要额外2小时。不同的转录组和表观基因组协议所需的时间可能会根据特定应用而有所不同,我们提供了减轻批处理效果和优化数据质量的策略。总的来说,这种以Vasculo为中心的方法提供了一个综合平台来询问神经血管相互作用和人脑血管发育。
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2023年5月8日发布。 https://doi.org/10.1101/2023.05.07.539594 doi:biorxiv Preprint
病毒载体研究指南:黄病毒载体 黄病毒(黄病毒科)是有包膜的正义单链 RNA 病毒,通常通过昆虫媒介在脊椎动物宿主之间传播。一些病毒也被发现在子宫内或通过母乳从母亲到后代进行垂直传播,尤其是寨卡病毒的性传播令人担忧。黄病毒基因组由一个长的开放阅读框组成,该阅读框编码结构蛋白和非结构蛋白。进入细胞质后,病毒 RNA 可以作为 mRNA 并翻译成一个长的多聚蛋白,该多聚蛋白被细胞和病毒蛋白酶切割成单个蛋白质。因此,基于黄病毒的病毒载体需要将异源基因插入病毒编码区框架内,并由蛋白酶切割位点连接。通过用目标异源基因替换结构蛋白基因来生成复制缺陷型载体。作为替代方案,可以在内部核糖体进入位点序列的帮助下将基因插入非编码区。黄病毒和黄病毒载体在脊椎动物和无脊椎动物细胞中复制到中等滴度(在某些情况下大于 1x10 8 颗粒形成单位/毫升)。脊椎动物细胞的感染通常是溶解性的,尽管需要几天到一周的时间才能识别出细胞病变效应。昆虫细胞的感染是持续性的。黄病毒复制发生在细胞质中,因此黄病毒载体适合在靶细胞中瞬时表达感兴趣的基因。潜在的健康危害人类感染黄病毒通常是亚临床的,但也可能表现为轻度至重度的流感样症状。严重病例可能导致脑炎、肝炎和出血热,具体取决于病毒和先前的免疫力。其他病毒与先天畸形有关,包括受感染母亲所生儿童的小头畸形。传播方式 野生型黄病毒通常通过昆虫媒介在脊椎动物宿主之间传播,包括蚊子和蜱虫,具体取决于病毒。除了寨卡病毒外,尚未记录到直接的人际传播,寨卡病毒与性传播有关。人类可以作为某些黄病毒(如登革热病毒、寨卡病毒和黄热病病毒)的扩增宿主,并可在蚊子叮咬后感染蚊子。