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线性化载体与指定的酶(10单位/µg)在建议的孵化温度下60分钟,每种酶为星云孵育60分钟。在连接和转化后,通过将转化子与消化反应的数量除以从线性化DNA的宗教(通常为100-500个菌落)获得的数量来确定裂解效率,并从100%中减去。“从末端到基本对”是指识别位点末端和片段末端之间的双链基对数的数量;该数字不包括初始切割中的单链悬垂。由于尚未证明这些单链核苷酸是否有助于切割效率,因此在设计PCR引物时应将4个碱基添加到指定的数字中。平均效率被四舍五入到最接近的整数;实验变化通常在10%以内。
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