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纳米抗体引导方法可实现内源蛋白的高效荧光标记
中国科学院生物物理研究所徐平勇研究员领导的研究小组开发了一种可视化和快速筛选小肽敲入的创新方法。这种新方法被称为 ALFA 纳米抗体引导内源标记 (ANGEL)，解决了非荧光小肽敲入的高通量筛选长期存在的问题。结果发表于 8 月 29 日《自然化学生物学》杂志上。
来源:英国物理学家网首页中国科学院生物物理研究所徐平勇研究员领导的研究小组开发了一种可视化和快速筛选小肽敲入的创新方法。这种新方法被称为 ALFA 纳米抗体引导内源标记 (ANGEL)，解决了非荧光小肽敲入的高通量筛选长期存在的问题。结果发表于 8 月 29 日《自然化学生物学》杂志上。
已发布由于纳米抗体尺寸小 (~15 kDa)、高稳定性和强结合亲和力，已成为分子生物学中的强大工具。当与荧光蛋白融合形成染色体时，纳米抗体能够实现多色活细胞标记、超分辨率成像和蛋白质动力学的实时研究。然而，传统的染色体开发既费力又耗时。
小尺寸 荧光蛋白 实时据研究人员介绍，ANGEL 是建立在 ALFA 标签之上的，ALFA 标签是一种合理设计的 13 个氨基酸肽，可形成稳定的 α 螺旋。 ALFA标签比大多数传统的线性表位标签更小，并且表现出优异的化学稳定性。
他们发现 NbALFA（一种针对 ALFA 标签的高亲和力纳米抗体）的稳定性取决于该标签的存在。在没有 ALFA 的情况下，NbALFA 会部分降解。然而，增加细胞内 ALFA 水平可以稳定 NbALFA 并增强其荧光信号。
为了利用这一特性，研究人员构建了表达与荧光蛋白融合的 NbALFA 的稳定细胞系，并将其整合到基因组中，以确保在没有 ALFA 标签的情况下均匀表达。
利用 CRISPR 介导的基因编辑，他们将 ALFA 标签精确插入目标位点，并监测 NbALFA 荧光的变化，以有效识别成功编辑的细胞。
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