。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可下可用(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2022 年 10 月 16 日发布。;https://doi.org/10.1101/2022.10.16.512417 doi:bioRxiv 预印本
聚合酶链式反应 (PCR) 是一种功能强大且灵敏的 DNA 扩增技术 (1)。Taq DNA 聚合酶是一种广泛用于 PCR 的酶 (2)。以下指南旨在确保使用 NEB 的 Taq DNA 进行 PCR 成功
序列 MSVDGTKTFF NPYIGARKRS LEARNGLSFS TGQNYDEKNN RRDRNSITYV TTIDEFKYIA PKCLDDKDVK QKGTHIGKLK RSPVLYKNGE EYVFLNFEDC EDVWPRRCSI WNNRSFLPAD FDPRFSRFHV YDMIETVEFA SAAIDRDKNR FLELLRPMGT IVTMMGITEC GKRVAVHVYG IKPYFYMRKV DTDTICGSRC PRELAEKLAN VVRSSVNEVA NAKRFCTPVT RTVSADCFEV DVVQRKDIYY YGTGHDEFYR VKSQSGKFIT LLCDNFYPSI IKYEGNIDAI TRMVLDNNGF STFGWYSFKV GNNGEKVQVR APCHHCTSCD IEINCTVDNL IGYPEDDAWP示例: DTNLSNLRPQ DDYLEINVQG KLLRFVKPHI RESLLAILLK DWLAMRKAIR AKIPESCDEI AVLLDKQQAA IKVVCNSVYG FCGVSNGLLP CIDVAATVTT IGRNMLLTVR DYIHKQWGTR DALLREFPNL SNFMRPEDYS VSVIYGDTDS VFIKFKGVDI HGLVTTGDDM AKRVSSDLFP KPIKLECEKT FNKLLLITKK KYMGTIHGGR MLMKGVDIVR KNNCRFINTY AKKLSDLLFL DDTVAKAAAT VAEKPPSFWA TSPLPEGLNS FGGVLAEAYT RMMINNITEV EDFAMSAELS RPPDAYTNKR IPHLTVYYKL AMRSEQLPVV KDRISYVIAA ATPEVVRDSA RVAEFRGELD LCHQNSNTSC PGDSVMTNKE TYVRHSPRNK LLISDMAEDP KYLLANNIPL NTDYYLSHLL GTLCVTFKAL FGNDVKITET VLRRFIPETF TEDCSYTERV SSEMFTTIRS GIGLQVNEEE ETRRKLNIAF RILTATPHRY
复原 我们建议在打开前先短暂离心此小瓶,使内容物沉至底部。请使用去离子无菌水复原蛋白质至浓度为 0.1-1.0 mg/mL。我们建议添加 5-50% 甘油(最终浓度)并分装以在 -20°C/-80°C 下长期储存。我们默认的甘油最终浓度为 50%。客户可以将其作为参考。
序列 MSWDDAIEGV DRDTPGGRMP RAWNVAARLR AANDDISHAH VADGVPTYAE LHCLSDFSFL RGASSAEQLF ARAQHCGYSA LAITDECSLA GIVRGLEASR VTGVRLIVGS EFTLIDGTRF VLLVENAHGY PQVCGLVTTA RRAASKGAYR LGRADVEAQF RDVAPGVFAL WLPGVQPQAE QGAWLQQVFG ERAFLAVELH REQDDGARLQ VLQALAQQLG MTAVASGDVH MAQRRERIVQ DTLTAIRHTL PLAECGAHLF RNGERHLRTR RALGNIYPDA LLQAAVALAQ RCTFDISKIS YTYPRELVPE GHTPTSYLRQ LTEAGIRKRW PGGITAKVRE DIEKELALIA LKKYEAFFLT过程RVRERMQGKG YASTFIDQIF EQIKGFGSYG FPQSHAASFA KLVYASCWLK RHEPAAFACG LLNAQPMGFY SASQIVQDAR RGSPERERVE VLPVDVVHSD WDNTLVGGRP WRSAADPGEQ PAIRLGMRQV AGLSDVVAQR IVAARTQRAF ADIGDLCLRA ALDEKACLAL AEAGALQGMV GNRNAARWAM AGVEARRPLL PGSPEERPVA FEAPHAGEEI LADYRSVGLS LRQHPMALLR PQMRQRRILG LRDLQGRPHG SGVHVAGLVT QRQRPATAKG TIFVTLEDEH GMINVIVWSH LALRRRRALL ESRLLAVRGR WERVDGVEHL IAGDLHDLSD LLGDMQLPSR DFH
序列 MAKCDKSLEA IDLDRAYTAP RKAKWAENKR INGLDTETSD GDIFCISVCW EGEKPMVQHN DREKLTSKQV WQVLTDHKAR SSLNMWYNLD FDANVVLNHV CSEEQLAELV VSGTTLANSD RTYRQYMDTD KELRKGEYLI TYIQSKFLEI KDHNSHIYTH YDASQFFYTS LENAVTEWLG ESKANDGLEA GLFGSQTPNQ LRETVAESDC VTWTNLSLTY NVSKGDKWTI HNAKSYISKN WSDILKYAQI DAELVRDLWQ EAVNVGEELD IPMGRPFSTG YLAESYLDNR LREKPGLGPM PMAKMAWESY AGGRFEVLKR GNVGRVAGPD INSAYPAVLA ELPDPKTLRW公式:KRAKHASISE IETADYGFMT VKVSTDPTRE IQPFAVKDEK QDKLVYPSPQ NTEITVVKDI FIHAYNQGYV TDYEVIDCWL GYKTEGTTFP FDFIPELYDN RKTAEANGLE KRGLLLKIVL NSMYGKTCQT TPKRRELAES TELELHESYV PDMSLPKMIR EKYSEGFIES LTAGAWFNPF LASYITGLTR LELHKQICKH DLEENTVMLA TDCVMIEEKP FEESNFVENL VQDGLGYWDM EYKGDAFVLG AGVYQIDFDT CQKGCKDNCN KFSHKHKVKT RGFSEADLEK GLVNAAEKAN GHIEIESTRP QTISEIIWSN EELSQVGNFL EQERKIKPEM DTKRKWSENT DFKKLLSTCE特发性骨髓瘤
复原 我们建议在打开前先短暂离心此小瓶,使内容物沉至底部。请使用去离子无菌水复原蛋白质至浓度为 0.1-1.0 mg/mL。我们建议添加 5-50% 甘油(最终浓度)并分装以在 -20°C/-80°C 下长期储存。我们默认的甘油最终浓度为 50%。客户可以将其作为参考。
聚合酶链式反应 (PCR) 是一种功能强大且灵敏的 DNA 扩增技术 (1)。Taq DNA 聚合酶是一种广泛用于 PCR 的酶 (2)。以下指南旨在确保使用新英格兰
家族A DNA聚合酶(Polas)形成了参与DNA复制和修复的现有聚合酶的重要且研究的一类。否则,尽管在独立的,专门的作品中表征了多个子家族,但到目前为止,他们的综合性分类却缺少。因此,我们重新审查了所有目前可用的pola semence,将它们的成对相似性转化为欧几里得空间中的位置,将它们分为19个主要簇。中有11个对应于已知的亚家族,但以前没有八个特征。对于每个组,我们都会汇编它们的一般特征,检查其系统发育关系,并在基本序列基序中进行保护分析。大多数亚家族与生命的特定领域有关(包括噬菌体),但一个亚科出现在细菌,古细菌和真核生物中。我们还表明,两个新的小家族含有功能性酶。我们使用alphafold2来生成缺乏实验降低结构的所有群集的高牢固预测模型。我们确定了涉及结构变化,有序的插入和明显的尿嘧啶-DNA糖基酶(UDG)结构域的明显结构掺入的新的保守效果。最后,T7样噬菌体子集的网络和结构分析表明,将3'–5'EXO和POL结构域分裂为两个单独的基因,第一次在Polas中观察到。
由聚合酶(L)和磷酸蛋白(P)组成的呼吸道合胞病毒聚合酶复合酶复合物,通过RNA依赖性RNA聚合酶,催化核苷酸聚合,CAP添加和CAP甲基化,以及在L.几个核苷上的甲基固定酶,并构成了核苷的甲基固定酶,并构成了核苷的甲基化合酶。复杂,但是缺乏精确抑制剂 - 聚合酶相互作用的结构细节。在这里,我们报告了一种非核苷抑制剂JNJ-8003,在抗病毒和聚合酶测定中均具有亚纳摩尔抑制效力。我们的2.9Å分辨率冷冻EM结构表明,JNJ-8003与封顶结构域上的诱导袋结合,具有多个相互作用,与其紧密结合和抗性突变相一致。微型和基于凝胶的DE从头RNA合成和底漆扩展测定法认为JNJ-8003在RNA文字和复制的早期阶段抑制了核苷酸聚合。我们的结果支持JNJ-8003结合可以调节封盖和RDRP结构域之间的功能相互作用,并且该分子见解可以加速广谱抗病毒药物的设计。