摘要随着细胞在有丝分裂过程中复制其DNA,由于DNA复制过程的固有局限性,端粒缩短了。维持端粒长度对于癌细胞克服端粒缩短引起的细胞衰老至关重要。端粒酶逆转录酶(TERT)是端粒酶的限速催化亚基,端粒酶是RNA依赖性的DNA聚合酶,可延长端粒DNA以维持端粒稳态。tert启动子突变。此外,TERT启动子高甲基化也会导致TERT转录增加,已在dend依膜瘤和小儿脑肿瘤中使用。在高度癌症的气氛中观察到的TERT失调的高频使端粒酶活性成为开发新型疗法的有吸引力的靶标。在这篇综述中,我们简要讨论正常人类细胞中TERT的正常端粒生物学以及TERT的结构,功能和调节。我们还强调了TERT在癌症生物学中的作用,重点是原发性中枢神经系统肿瘤。最后,我们总结了TERT启动子突变在癌症中的临床意义,这些突变促进造成肿瘤的分子机制以及针对TERT的癌症疗法的最新进展。
摘要:Fallot(TOF)的四边形是新生儿中最常见的氰基先天性心脏病。isl1是第二心脏场发育中的主要转录因子,而ISL1基因启动子在TOF患者中的作用尚未进行遗传研究。从601名人类受试者中提取总DNA,包括308名TOF患者和293例健康对照组,并进行了Sanger测序。仅在TOF患者中发现了ISL1基因启动子中的四种变体(包括一种新型杂合变体)。功能分析,并证明四种变体中的三个显着降低了HL1基因启动子在HL-1细胞中的转录活性(P <0.05)。此外,在线JASPAR数据库和电泳移动性转移测定法显示,这三种变体影响了转录因子的结合和ISL1表达水平的改变。总而言之,当前的第一次研究表明,从ISL1基因启动子区域鉴定的变体可能通过影响转录活性和改变ISL1表达水平而参与TOF的发展。因此,这些发现可能会为TOF的分子病因和潜在的治疗策略提供新的见解。
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证永久有效。它是在预印本(未经同行评审认证)下提供的,作者/资助者已授予 bioRxiv 许可,可以在该版本中显示预印本。此版本的版权持有者于 2023 年 2 月 7 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.02.06.527393 doi:bioRxiv 预印本
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证永久有效。它是在预印本(未经同行评审认证)下提供的,作者/资助者已授予 bioRxiv 许可,可以在该版本中显示预印本。此版本的版权持有者于 2023 年 2 月 7 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.02.06.527393 doi:bioRxiv 预印本
供应形式和标准包装•Estane®ZHF 80AT7以颗粒形式提供,并以50磅的袋子或1000磅的盒子包装。材料制备•在加工之前,必须在220°F(104°C)下干燥estane®ZHF 80AT7 2-4小时。•建议在干燥剂型干燥机中干燥材料。目标露点应为-40°C。•根据所应用的加工技术,最大水分水平应为0.02%。处理条件•可以在任何常规挤出机上处理estane®ZHF80AT7。
摘要:蚊子转基因和基因驱动技术为开发有前途的新型媒介传播疾病预防工具提供了基础,这些工具要么抑制野生蚊子种群,要么降低其传播病原体的能力。许多关于具有强大性别、组织和阶段特异性表达谱的基因的调控 DNA 和启动子的研究支持开发可以控制蚊媒疾病的新工具和策略。尽管可用的调控元件列表很重要,但只有有限的一组可以可靠地驱动时空表达。在这里,我们回顾了我们在蚊子中表达有益基因和其他基因的能力方面的进展,并强调了开发新的蚊虫控制和抗病策略所需的信息。
摘要:人类和其他生物体通过大气、饮用水、食物或直接接触不断接触成千上万种化学物质。这些化学物质中很大一部分浓度很低,即使在未观察到不良影响水平 (NOAEL) 下也可能产生协同作用。复杂的污染物混合物很难通过传统的毒理学方法进行评估。人们越来越关注不同污染物如何通过影响昼夜节律而诱导人体不良的生理功能。然而,从大量化学物质或其复杂混合物中筛选出具有昼夜节律破坏作用的化合物非常困难。我们通过 CRISPR/Cas9 建立了稳定的萤火虫荧光素酶报告基因敲入 U2-OS 细胞系,以筛选昼夜节律破坏污染物。荧光素酶基因插入核心时钟基因 BMAL1 下游并由内源启动子控制。与使用外源启动子的检测系统相比,这些细胞能够检测干扰 BMAL1 基因表达介导的昼夜节律系统的化合物。U2-OS 敲入细胞显示,当用 BMAL1 抑制剂和激活剂处理时,BMAL1 和荧光素酶活性发生了平行变化。此外,荧光素酶报告基因具有高灵敏度,比传统毒理学方法更快、更经济。敲入细胞系可用于高通量、高效筛选破坏昼夜节律的化学物质,例如药物和污染物。
合成了具有最高预测效力的构建体并在 HEK293T 细胞中进行了测试。第一代的结果表明,大多数增强子+启动子构建体的性能与母体 C6 启动子一样好或更好。特别是,构建体 C120 和 C124 分别表现出约 30% 和约 40% 的提高效力。同样,一些点突变导致性能提高 10% 到 30%。超突变构建体(采用迭代或贪婪方法)破坏了 HEK293T 细胞中的启动子活性。根据第一代的结果,我们合理地设计了一组新的构建体,这些构建体基于体外表达最高的构建体的组合。第二代在 HEK293T 细胞中进行了测试,所有构建体都表现出比亲本 C6 更高的表达。特别是,与原始 C6 构建体相比,构建体 C187 达到了约 2 倍的改善。
MGMT启动子甲基化是一个表观遗传事件。 表观遗传事件在功能上是相关的,但不涉及核苷酸序列的变化。 因此,虽然MGMT启动子甲基是一个重要的预后标记,但它并不能定义胶质瘤的分离子集。 MGMT是一种DNA修复酶,可保护鼻孔和gliomacellsalsymacellsylatingchemotherapeen剂。 MGMT启动子的甲基化是表观遗传沉默的一个例子,导致MGMT酶功能损失及其对神经胶质瘤细胞的保护作用。 MGMT启动子甲基化在用替莫唑胺(TMZ)治疗的患者中产生的表面益处。。MGMT启动子甲基化是一个表观遗传事件。表观遗传事件在功能上是相关的,但不涉及核苷酸序列的变化。因此,虽然MGMT启动子甲基是一个重要的预后标记,但它并不能定义胶质瘤的分离子集。MGMT是一种DNA修复酶,可保护鼻孔和gliomacellsalsymacellsylatingchemotherapeen剂。MGMT启动子的甲基化是表观遗传沉默的一个例子,导致MGMT酶功能损失及其对神经胶质瘤细胞的保护作用。MGMT启动子甲基化在用替莫唑胺(TMZ)治疗的患者中产生的表面益处。1随后的Stupp等人2的工作表明,在接受放射线和替莫唑胺的患者中,MGMT促进甲基化改善了中值的中位数生存期(相比之下,甲基化的中位数(21.7 vs 12.7个月)。2
基于核酸酶失活 CRISPR/Cas (dCas) 的系统已成为一种强大的技术,可以综合重塑人类表观基因组和基因表达。尽管这些平台的采用越来越多,但它们的相对效力和机制差异尚未完全表征,特别是在人类增强子-启动子对中。在这里,我们系统地比较了最广泛采用的基于 dCas9 的转录激活因子,以及由与人类 CBP 蛋白催化核心融合的 dCas9 组成的激活因子,以及人类增强子-启动子对。我们发现这些平台在不同人类细胞类型中显示出不同的相对表达水平,并且它们的转录激活效率因效应域、效应子募集结构、靶位点和细胞类型而异。我们还表明,每种基于 dCas9 的激活剂都可以诱导增强子 RNA (eRNA) 的产生,并且这种 eRNA 诱导与同源启动子的下游 mRNA 表达呈正相关。此外,我们使用基于 dCas9 的激活剂来证明人类增强子和启动子之间可以存在内在的转录和表观遗传互惠性,并且可以通过将基于 dCas9 的转录激活剂靶向增强子来合成驱动增强子介导的下游启动子的追踪和参与。总之,我们的研究为增强子介导的人类基因表达控制和基于 dCas9 的激活剂的使用提供了新的见解。