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TrueDesign 基因组编辑器
对于使用 CRISPR 技术的敲除富集实验，设计步骤中选择的 gRNA 和 Invitrogen™ TrueTag™ 供体引物将自动包含在内。该工具还将添加 TrueTag Knockout Enrichment Donor DNA Kit，其中包含所需的供体模板、PCR 试剂和清理试剂盒，以生成可用于转染的供体 DNA。还包括 Invitrogen™ TrueTag™ 验证引物，用于进行连接分析，以确保供体模板正确插入。
Truedesign基因组编辑器
要查看TALEN目标，请单击表的“ Talen”选项卡，并将显示每个Talen对的类似信息。TAL效应子核酸酶（TALEN）对。设计结果表中的绿色选中标记将指示推荐的技术。在Thermofisher.com/tal上了解有关Talen Technology的更多信息。
基于 CRISPR-Cas9 的基因组工程...
（Doudna 和 Charpentier，2014 年）并在图 1a 中以示意图形式显示。许多细菌物种都有 CRISPR 和 Cas 基因座的变体，其中作为基因组编辑工具研究最广泛的变体是 CRISPR-Cas9 系统（Makarova 等人，2011 年）。CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑需要一个 Cas9 引导 RNA（gRNA）复合物，其中包含 Cas9、CRISPR RNA（crRNA）和反式激活 CRISPR RNA（tracrRNA）（见框 1：CRISPR 术语）。如前所述，可以通过多种方法将该复合物引入靶细胞（Lino 等人，2018 年；Shi 等人，2021 年）。在 crRNA 的引导下，该复合物与补体 DNA 结合，并伴有侧翼的原始间隔区相邻基序 5 0 -NGG-3 0（对于化脓性链球菌 Cas9）（ Chylinski 等人，2013）。Cas9-gRNA 复合物在靶位点诱导双链断裂（ Deltcheva 等人，2011；Shah 等人，2013），靶细胞可以通过非同源末端连接 (NHEJ)（ Hefferin 和 Tomkinson，2005）或同源定向修复 (HDR)（ Liang 等人，1998）进行修复。在 NHEJ 中，断裂的 DNA 链被重新连接，可以直接重新连接，也可以在随机核苷酸插入或缺失后重新连接（ Takata 等人，1998）。这通常会导致移码突变和过早的终止密码子，因此，这种机制很容易用于敲除目的蛋白的表达。在 HDR 中，双链断裂是使用姐妹染色单体作为同源模板链来修复的。通过多次交换、DNA 合成和连接，受损链可以得到精确修复（Takata 等，1998）。不用姐妹染色单体作为模板链，而是将含有所需突变或基因盒的外源 DNA 模板以单链或双链 DNA 的形式引入，同源臂在外侧（Chen 等，2011；Radecke 等，2010；Rouet 等，1994）。多年来，越来越多的实验皮肤病学领域的研究利用了 CRISPR-Cas9 工具箱，尽管目前的数量有限，但在过去 5 年中有所增加（图 1 b 和 c 以及表 1）。本综述旨在认识到在人类表皮角质形成细胞 (KC) 中进行的所有 CRISPR-Cas9 工作，以确定在不同人类 KC 细胞来源中可用的最佳实践和成功策略的关键决定因素，同时为未来使用 CRISPR-Cas9 进行研究提供关键考虑，无论是基础应用还是临床应用。
泛基因组综述
© 作者 2023。开放存取 本文根据知识共享署名 4.0 国际许可进行授权，允许以任何媒体或格式使用、共享、改编、分发和复制，只要您给予原作者和来源适当的信任，提供知识共享许可的链接，并指明是否做了更改。 本文中的图片或其他第三方资料包含在文章的知识共享许可中，除非资料的致谢中另有说明。 如果资料未包含在文章的知识共享许可中，且您的预期用途不被法定规定允许或超出允许用途，则需要直接从版权所有者处获得许可。 要查看此许可证的副本，请访问 http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ 。知识共享公共领域贡献豁免（http://creativeco mmons.org/publicdomain/zero/1.0/）适用于本文中提供的数据，除非数据来源中另有说明。
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要查看 TALEN 靶标，请单击表格中的 TALEN 选项卡，每个 TALEN 对都会显示类似的信息。当敲入位点 10 bp 范围内没有 PAM 位点，或者 gRNA 的效率和特异性不理想时，建议使用 TAL 效应核酸酶 (TALEN) 对。设计结果表中的绿色复选标记将指示推荐的技术。有关 TALEN 技术的更多信息，请访问 thermofisher.com/tal 。
基因组项目–Write
负责任的创新基因组合成是基因工程工具的逻辑扩展，该工具已在生物技术行业中安全使用了约40年，并提供了重要的益处。然而，最近的技术进步 - 例如，标准化的基因部分，全基因组合成和群集定期散布的短篇小说（CRISPR） - CAS9基因组编辑技术（3，4） - 彻底改变领域（5）。某些申请是有争议的；特别是人类种系编辑引发了激烈的道德辩论（6）。随着人类基因组规模的合成似乎越来越可行，这是及时的统治，讨论和应用大型基因组工程技术的协调科学努力。hgp-写作将需要从一开始就需要公众参与和考虑道德，法律和社会信息（ELSI）。负责任的创新不仅需要ELSI，还涉及通过及时，详细的咨询来确定对科学家和更广泛的公众的共同目标。