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World File Search System敲低
来自 PYCR1 敲低骨髓的外泌体...
摘要：膀胱癌（BC）是一种异质性疾病，吡咯烷-5-羧酸还原酶1（PYCR1）能够促进BC细胞的增殖和侵袭，加速BC进展。本研究将si-PYCR1加载到BC的骨髓间充质干细胞（BMSC）来源的外泌体（Exos）中。首先，评估BC组织/细胞中的PYCR1水平，并评估细胞增殖、侵袭和迁移。测定有氧糖酵解水平（葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成和相关酶的表达）和EGFR/PI3K/AKT通路磷酸化水平。通过共免疫沉淀实验检查PYCR1-EGFR相互作用。用oe-PYCR1转染的RT4细胞用EGFR抑制剂CL-387785处理。将si‑PYCR1装载于Exos中并进行鉴定，随后评估其对有氧糖酵解和恶性细胞行为的影响。通过给小鼠注射Exo‑si‑PYCR1和Exo‑si‑PYCR1建立异种移植瘤裸鼠模型。PYCR1在BC细胞中上调，在T24细胞中表达最高，在RT4细胞中表达最低。PYCR1敲低后，T24细胞的恶性行为和有氧糖酵解降低，而在RT4细胞中PYCR1过表达则扭转了这些趋势。PYCR1与EGFR相互作用，CL‑387785抑制EGFR/PI3K/AKT通路并减弱PYCR1过表达对RT4细胞的影响，但对PYCR1表达没有影响。 Exo‑si‑PYCR1对有氧糖酵解和T24细胞恶性行为的抑制作用比si‑PYCR1更强。Exo‑si‑PYCR1阻断了异种移植肿瘤的生长，具有良好的生物相容性。简而言之，
HES6人类造血前体细胞中的敲低
造血是由诱导造血干细胞及其后代分化和增殖的分子机制驱动的。这涉及各种转录因子的活性，例如分裂（HES）家族的毛/增强子的成员以及HES1和HES4的重要作用，已显示在正常和恶性造血中。在这里，我们使用体外和体内模型研究了HES6在人造血中的作用。使用大量和单细胞RNA序列数据，我们表明HES 6在红细胞/巨核细胞和浆细胞类动物树突状细胞的发育以及多能前体以及在T-B-cell发育的特定阶段中表达，分别在T-和B细胞发育的特定阶段中。一致地，在体外分化良好的体外分化测定中，在脐带血源性血液中的HES6敲低导致人类造血质体前体降低了对巨核细胞，红细胞，血浆乳清细胞，血浆乳清细胞，B细胞，B细胞和T细胞的分化。此外，HES6敲低造血茎和祖细胞在体外表现出降低的菌落形成单位容量，并且在竞争性移植测定中在体内重新构成造血的潜力受损。我们证明，HES6表达的丧失对红细胞分化过程中的细胞周期进程有影响，并为影响这些扰动的潜在下流靶基因提供了证据。因此，我们的研究为HES6在人类造血中的作用提供了新的见解。
TYRO3 敲低可抑制髓系白血病细胞的生长
摘要。背景/目的：TYRO3 是受体酪氨酸激酶 TAM 家族 (TYRO3、AXL 和 MERTK) 的成员。虽然已报道了激活的 AXL 和 MERTK 在白血病细胞生长中的作用，但 TYRO3 的影响尚未确定。因此，我们研究了 TYRO3 敲低对白血病细胞系生长的影响。材料和方法：本研究使用了三种表达 TYRO3 蛋白的人类白血病细胞系 (纯红细胞白血病衍生的 AA、OCI/AML2 和 K562)。为了诱导 TYRO3 敲低，使用电穿孔系统转染针对 TYRO3 的小干扰 RNA (siRNA)。通过比色测定评估细胞生长。通过免疫印迹检查各种信号蛋白的表达水平和激活。通过微阵列分析检查 TYRO3 敲低后综合基因表达的变化。结果：TYRO3 敲低抑制了所测试的白血病细胞系中的细胞生长。此外，敲低还抑制了 AA 细胞中的信号转导和转录激活因子 3 的磷酸化，以及 AA 和 OCI/AML2 细胞中的细胞外信号调节激酶 (ERK) 1/2；两者都是 TYRO3 信号传导的下游分子。TYRO3 敲低还抑制了所有细胞系中 survivin 的表达。TYRO3 敲低强烈抑制了 TYRO3 mRNA 表达，但没有抑制 AXL 和 MERTK 的表达。此外，TYRO3 敲低抑制了 ERK 下游分子细胞周期蛋白 D1 mRNA 的表达。结论：TYRO3 在白血病细胞生长中发挥作用，是白血病的潜在治疗靶点。
敲低SALL4抑制人体和体外肺癌细胞的增殖，迁移和侵袭
直到最近，索拉非尼（7）和兰瓦替尼（8）是唯一被批准用于晚期HCC一线治疗的靶向疗法。尽管在过去几十年中不断寻求有效的高级HCC药物治疗，但患者的生存却没有显着改善。基于检查员040（9）和主题演讲224（10），Nivolumab和pembrolizumab被批准为索拉非尼后的二线治疗。然而，在2019年，第一线与索拉非尼（11）和第三阶段主题演讲240相对于安慰剂与安慰剂（12）的结果是负面的，导致全球批准失败。实际上，这些药物都无法证明具有统计学意义的生存益处。在2020年，Finn等人。（13）报道了Imbrave 150的结果，Imbrave 150的结果是一项临床试验，其中atezolizumab [反编程的细胞死亡配体配体1（PD-L1）单克隆抗体（MAB）]和贝伐单抗研究了对索拉替尼的贝伐单抗，以在第一线设置中治疗先进的HCC。这种组合疗法的无进展生存期（MPF）为6.8个月，索拉非尼单一疗法明显超过4.3个月。尽管在组合疗法组中未达到总体生存期（MOS），但它比索拉非尼组的13.2个月MOS（HR = 0.58，95％CI，0.42-0.79）长得多。因此，
在主要非洲疟疾媒介阵线菌群中发现敲低抗性
资金：这项研究得到了从Bill＆Melinda Gates Foundation获得的资金（授予号Inv-002138）致F.O.O.，F.B.，H.M.F。 霍华德·休斯医学研究所基金会国际研究学者奖（授予号） OPP 1099295）至F.O.O.和医学科学学院Springboard奖（参考：SBF007 \ 100094）至F.B. 本出版物中的发现和结论是作者的发现和结论，不一定反映了HHMI，BMGF或AMS的立场或政策。 疟疾载体天文台得到多个机构和资助者的支持。 Wellcome的参与得到了Wellcome的资金（220540/Z/20/A，“ Wellcome Sanger Institute Quinquennial Review 2021-2026”）和Bill＆Melinda Gates Foundation（Inv-001927）的支持。 利物浦热带医学学院的参与得到了美国国家过敏和传染病研究所（[NIAID] R01-AI116811）的支持，并得到了医学研究委员会的额外支持（MR/P02520X/1）。 后者的赠款是英国资助的奖项，是欧盟支持的EDCTP2计划的一部分。 马丁·唐纳利（Martin Donnelly）得到皇家学会（RSWF \ ft \ 180003）的支持。 泛非蚊子控制协会的参与是由Bill and Melinda Gates Foundation（Inv-031595）资助的。Inv-002138）致F.O.O.，F.B.，H.M.F。霍华德·休斯医学研究所基金会国际研究学者奖（授予号OPP 1099295）至F.O.O.和医学科学学院Springboard奖（参考：SBF007 \ 100094）至F.B.本出版物中的发现和结论是作者的发现和结论，不一定反映了HHMI，BMGF或AMS的立场或政策。疟疾载体天文台得到多个机构和资助者的支持。Wellcome的参与得到了Wellcome的资金（220540/Z/20/A，“ Wellcome Sanger Institute Quinquennial Review 2021-2026”）和Bill＆Melinda Gates Foundation（Inv-001927）的支持。利物浦热带医学学院的参与得到了美国国家过敏和传染病研究所（[NIAID] R01-AI116811）的支持，并得到了医学研究委员会的额外支持（MR/P02520X/1）。后者的赠款是英国资助的奖项，是欧盟支持的EDCTP2计划的一部分。马丁·唐纳利（Martin Donnelly）得到皇家学会（RSWF \ ft \ 180003）的支持。泛非蚊子控制协会的参与是由Bill and Melinda Gates Foundation（Inv-031595）资助的。
CRISPR 敲入方案
注意：确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。在 KO 实验中，无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3，对于 1.8kb ssDNA，HDRT 为 4 μ g。强烈建议针对每个具体设计对 Cas9：sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。我们建议 ssDNA 的量可以设置在 2 μ g 和 6 μ g 之间（对于 0.5kb 和 4kb 之间的 HDRT 长度；如果 HDRT 长度超出此范围，则可能需要适当调整试剂的量）。最好为第一次实验分别设置阴性对照、阳性对照和转染对照。
在BACN2 -Q72转基因小鼠中，在脑室内给药后，ATXN2的有效敲低ATXN2
参考文献：1 Masrori＆van Damme，2020年； 2 Becker等人2017年。缩写：AAV：腺相关病毒； ALS：肌萎缩性侧索硬化；方差分析：方差分析； ATXN2：ataxin-2; BAC -ATXN2 -Q72小鼠：表达人ATXN2的转基因小鼠；续：控制向量； DPCR：数字聚合酶链反应； FTD：额颞痴呆； G：mirna指南候选人； ICV：脑室室内； mRNA：Messenger RNA； mirna：microRNA； PBS：磷酸盐缓冲盐水； QPCR：定量聚合酶链反应； SD：标准偏差； TDP-43：焦油DNA结合蛋白43; VG：矢量基因组； VMIX TM：miRNA沉默平台。致谢和披露：这项研究由Aviadobio Ltd. PMC，RJ，ZW，ED，NS，LR，CA，CA，AA，LI，CJM，JI和CES资助，是Aviadobio Ltd. OB和NAMN的雇员和股东。RJ，CS，DYL和YBL在与VMIX™平台有关的专利中命名。
CRISPR/CAS13D介导的猪体细胞和单毒性胚胎中的有效KDM5B mRNA敲低
需要一种有效的mRNA敲低策略来探索细胞和胚胎中的基因功能，尤其是在早期胚胎发育过程中了解母体mRNA衰变的过程。cas13是一种新型的RNA靶向CRISPR效应蛋白，可以结合并切割互补的单链RNA，该RNA已用于小鼠和人类细胞中的mRNA敲低以及植物中的RNA病毒干扰。cas13尚未据报道用于猪。在当前的研究中，我们探讨了猪中CRISPR/ CAS13D介导的内源性RNA敲低的可行性。KDM5B是H3K4ME3的组蛋白去甲基酶，在转录水平下下调了50％，在猪成纤维细胞中，CRISPR/CAS13D在转录水平下被下调。敲低KDM5B诱导的H3K4ME3表达，并降低了H3K27ME3，H3K9ME3，H3K4AC，H4K8AC和H4K12AC的丰度。这些变化影响了细胞增殖和细胞周期。此外，将CRISPR/CAS13D系统稳定地整合到猪基因组中，导致CAS13D的连续表达和KDM5B的持续敲低。最后，在猪par植物发育胚胎中进一步验证了CAS13D的RNA靶向潜力。通过将cas13d mRNA和靶向KDM5B的GRNA的显微注射到猪卵母细胞中，KDM5B的表达被下调，H3K4ME3的丰度按预期增加，并且胚胎发育相关基因的表达被相应地更改。这些结果表明CRISPR/CAS13D为猪的时空转录操作提供了易于编程的平台。繁殖（2021）162 149–160
基于质粒的CRISPR敲入秀丽隐杆线虫
图1。基于质粒的CRISPR敲入的高度提高的克隆效率：（a）泳道1：NEB®DNA梯子标准（N3200S）；泳道2：标准NEB®Q5PCR方案30个周期的Q5 PCR方案基于光涂抹和〜300bp的额外不需要的PCR产物导致过多的DNA，可重复出现30个周期。车道3-8：优化PDD162扩增的PCR循环编号。基于此数据，我们选择了15个周期作为PDD162所有后续扩增的最佳数字。（b）过多的PCR产物和DPNI消化不足会导致约35％的KLD连接克隆是错误的CAS9/SGRNA质粒。相反，优化PCR和KLD连接反应会导致90％的克隆具有正确的GRNA插入。（c）载体主链和用于
