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超分辨率显微镜已在纳米尺度分辨率下实现了成像。但是,在不引入可能误导数据解释的文物的情况下达到这种细节水平,需要在整个成像采集中保持样本稳定性。此过程的范围从几秒钟到几个小时,尤其是在将活细胞成像与超分辨率技术相结合时。在这里,我们基于实时跟踪效果标记的3 d主动样品稳定系统。为了确保广泛的可访问性,该系统是使用易于可用的避开功能的光学和光子组件设计的。此外,随附的软件是开源的,并用Python编写,促进了社区的采用和定制。,我们在侧面和轴向方向上在1 nm内实现样品运动的标准偏差,持续时间在小时范围内。我们的方法可以轻松地整合到现有的显微镜中,不仅使延长的超分辨率显微镜更容易访问,而且还可以使共同体和宽阔的现场活细胞成像实验跨小时甚至几天。
软X射线断层扫描(SXT)可以实现完全水合,低温保存的生物样品的三维(3D)成像,揭示了超微结构的细节,而无需染色,嵌入或切片。传统上仅在同步基因设施上可用,激光驱动的等离子源的最新进展导致了紧凑的软X射线显微镜(例如SXT-100)的发展。SXT-100将成像分辨率降低到54 nm全螺距,在30分钟到两个小时内获得了断层图。SXT-100与落叶显微镜整合在一起,通过桥接荧光和电子显微镜来促进相关工作流,同时保留玻璃化样品的结构完整性。我们通过各种用例演示了SXT-100的功能,包括成像Euglena Gracilis,酿酒酵母酵母细胞和哺乳动物细胞中的纳米颗粒。相对较短的断层图采集时间,软X射线断层扫描的几乎没有破坏性的性质以及其定量成像功能强调了其作为高级生物成像的强大工具的潜力。未来的发展有望增强吞吐量和更深入的整合,并与新兴的相关成像方式以及包括组织在内的各种样本类型。
背景:我们的MPM组装(在[1]中报告的详细信息)使用扫描,紧密焦点飞秒激光器(1,040和1,560 nm)来刺激样品中的非线性光学相互作用。这些相互作用发生在多个光子同时相互作用并激发电子,从而赋予其能量之和。当激发电子落回其基态时,单个光子被入射光子的能量之和发出[4]。在2光子相互作用中,发射的光子的能量是入射光子的第二阶谐波(即,频率/能量/能量或一半波长)。这发生在缺乏反转对称中心的晶体结构中的矿物质中。对于3光子相互作用,发射光子的能量相对于入射光子的三倍。这些相互作用会发生在激光焦点范围内的折射率变化时。在2-光子和3光子的相互作用中,如果将电子在激发态内刺激到更高的振动水平,则振动衰变损失了一定数量的能量,从而导致在较长波长下荧光发射。非线性
电气和计算机工程部,伍斯特理工学院,美国马萨诸塞州伍斯特市B Max Planck Inst。对于人类认知和脑科学,德国莱比锡c莱比锡应用科学大学(HTWK),工程学院,莱比锡,德国d d d div>计算神经刺激研究计划,无创神经调节单元,实验治疗和病理生理学分支,国家心理健康研究所,美国国立卫生研究院,贝塞斯达,马里兰州贝塞斯达,美国马里兰州Gathinoula A. Martinos Ctr。用于生物医学成像,马萨诸塞州综合医院,美国马萨诸塞州查尔斯敦,h伍斯特理工学院数学科学系,美国马萨诸塞州伍斯特,美国马萨诸塞州
图2。适应性的光学设置(A)照明系统(顶部)和管镜(底部)。灯由1 W白色的LED提供,该LED可以单独使用或带有磁连接的冷凝器。也可以添加RGB LED环以提供Darkfield照明。显微镜使用标准显微镜镜头,该镜头通过3D打印的管镜安装在覆盆子Pi HQ摄像机上。管镜包括一个光学双线,用于场校正。(b)使用40倍物镜镜头和不同的照明方式示例图像。tardigrade仅用LED(左上),冷凝器(右上角),Darkfield投影仪完全(左下)(左下)或一半的投影仪进行照明,或者是斜胶带的一半,以进行扩散(即克里斯蒂安森照明或伪动物;右下)。(c)使用带有和不带F50双重透镜的40倍物镜镜头获得的图像质量进行比较。没有冷凝器光(通常用于低放大倍数),不需要多余的镜头。使用冷凝器(右下角)时,可以实现图像质量的实质性提高。
了解细胞的复杂三维结构在生物学的许多学科中至关重要,尤其是在神经科学中。在这里,我们介绍了一组模型,包括3D变压器(Swinuneter)和一种新颖的3D自我监督学习方法(WNET3D),旨在解决生成3D地面真相数据和量化3D卷的核的固有复杂性。我们开发了一个名为CellSeg3d的Python软件包,该软件包在Jupyter笔记本和Napari GUI插件中提供了对这些模型的访问。认识到高质量的3D地面真相数据的稀缺性,我们创建了一个完全被人类宣传的中膜数据集,以提高该领域的评估和基准测试。为了评估模型性能,我们在四个不同的数据集中进行了测试:新开发的MesoSpim数据集,一个3D Platynereis-ish-Nuclei共聚焦数据集,一个单独的3D Platynereis-Nuclei灯光数据集,以及一个具有挑战性且具有挑战性和密集包装的Mouse-Skull-Nucleii colderii coldasaset。我们证明,我们的自我监管模型WNET3D(未经任何地面真相标签训练)以最先进的监督方法来实现绩效,为在标签式生物学环境中更广泛的应用铺平了道路。
使用MMI Cellcut(一种提供精确的单细胞隔离的高级激光显微解剖(LMD)系统)解锁研究的全部潜力。此功能强大的工具对于精确样本准备至关重要,为您提供了在各个研究领域成功下游实验所需的明确定义的起始材料。样品安装在载玻片和载体膜之间,以确保有效防止污染的无接触式切割过程。体验LMD作为您的基础研究资产的准确性和效率差异。
将传统育种与体外培养技术相结合,辅以组织学和显微镜分析,可以增强植物特性、保护濒危物种,并有助于在具有经济价值的植物中生产有价值的化合物。这些方法为细胞过程提供了重要的见解,指导了植物生物技术研究。在多细胞植物中,传统育种与体外培养技术相结合可以增强作物特性并保护稀有药用植物。愈伤组织,即大量未分化细胞,在组织培养再生中起着关键作用。组织学分析是在显微镜下检查组织,对于了解胚胎发生、愈伤组织形成和再生过程中的细胞过程至关重要。扫描和透射电子显微镜等显微镜技术揭示了细胞结构和细胞器,推动了植物组织培养技术的发展,并有助于物种保护和化合物生产。组织学研究还揭示了组织培养过程中的结构变化,优化了培养条件。通过直接或间接方法进行的体细胞胚胎发生为繁殖和生物技术提供了独特的优势。本综述鼓励进一步使用组织学技术来改进组织培养应用,以造福社会。关键词:组织学,植物组织培养,微观,愈伤组织培养
线粒体在真核细胞的生命周期中起着至关重要的作用。但是,我们仍然不知道它们的超微结构(例如内膜的cristae)如何动态发展以调节这些基本功能,以响应外部条件或与其他细胞成分相互作用。尽管高分辨率的荧光显微镜与最近开发的创新探针可以揭示该结构组织,但它们的长期,快速和实时3D成像仍然具有挑战性。为了解决这个问题,我们开发了一个称为DeepCristae的卷积神经网络,以恢复低空间分辨率显微镜图像中的线粒体cristae。我们的网络是使用专门为Cristae修复设计的新型损失从2D Sted图像训练的。为了有效地增加训练集的大小,我们还开发了一个以线粒体区域为中心的随机图像贴片采样。为了评估deepcristae,使用我们得出的指标来进行定量评估,我们通过关注线粒体和cristae像素而不是像往常一样在整个图像上进行了定量评估。根据所示的使用条件,DeepCristae在广泛的显微镜模态(刺激的发射耗尽(STED),Live-SR,Airyscan和Lattice Light片显微镜下都很好地工作。它最终是在与内托/溶酶体膜相互作用期间的线粒体网络动力学的上下文中应用的。