在本研究中,我们正在开发优化的、自组装的、ROS 敏感和 ROS 清除纳米粒子 (NP),作为慢性炎症疾病的潜在治疗途径。RAFT 聚合方法能够合成硼酸聚合物,这是系统 ROS 敏感性的基础,依赖于这些聚合物和多酚儿茶酚基团之间的硼酸酯键。我们的 NP 是使用纳米沉淀和微流体方法合成的,并通过尺寸和表面电荷进行表征。进行了 TEM 成像和紫外可见光和荧光光谱研究,以确认 NP 络合和 ROS 敏感性。ROS-Glo H 2 O 2 和 DCFDA 测定将确认巨噬细胞和小胶质细胞中的 ROS 清除。流式细胞术将确认我们的 NP 进入细胞,显微镜将能够观察其线粒体定位。将进行 ELISA 来监测促炎细胞因子,确保我们的 ROS 清除转化为减少炎症。
图 4 . (A) 对表达逆转录子 Eco2 (67 nt) 或 4LE-v1 至 v4 (126 nt) 的细胞中提取的 RT-DNA 进行变性 PAGE 分析。基因组编码的逆转录子 Eco1 (90 nt) 作为内部控制。标记物 M1 是 4LE- v4 的化学合成 DNA 版本。(B) 通过长度标准化荧光带强度分析确定逆转录子 Eco2 (67 nt) 和 4LE 变体相对应的 RT-DNA 相对于内源性 Eco1 的富集倍数。所示数据来自 n = 3 个技术重复。(C) 用 DFHBI-1T 进行大量体内荧光测量。配对 t 检验,诱导与未诱导:Eco2,p = 0.86;4LE-v1,p = 0.27;4LE-v2,p = 0.003;4LE-v3,p = 0.007; 4LE-v4,p = 0.005;n = 3 个生物学重复。(D)表达 4Lettuce 位置变体的 DFHBI-1T 染色细胞的流式细胞术分析。153
图 2:在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔,浓度增加,显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白:crRNA:tracrRNA 电穿孔,LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加,显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后,HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致,位于细胞核中,并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示,随着 DNA 供体质粒数量的增加,EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%(未显示数据)。
全基因组筛选是全面了解生物现象分子机制的有效方法。然而,尽管它在过去几十年中广泛应用于各种生物目标,但将其应用于具有暂时和可逆生物输出的生化反应仍然是一项艰巨的挑战。为了揭示各种生化反应背后的分子机制,我们最近开发了复兴筛选方法,该方法结合了基于流式细胞术的细胞分选和从收集的细胞中重建文库。我们对传统全基因组筛选技术的改进已被证明能成功揭示感兴趣的生化反应的分子机制。在本文中,我们阐明了复兴筛选的技术基础,重点介绍了其在 CRISPR-Cas9 单向导 RNA (sgRNA) 文库筛选中的应用。最后,我们还讨论了全基因组筛选的未来,并描述了体外和体内筛选的最新成果。
方法和结果:我们建立了具有皮下和原位HCC的基于细胞系或患者衍生的基于患者衍生的人源化免疫 - 免疫 - 系统小鼠模型。小鼠注入人类特异性抗体(ABS)以耗尽人类免疫细胞。我们使用实时PCR和RNA测序分析了HCC细胞和人免疫细胞的转录谱。使用流式细胞术,蛋白质印迹和免疫组织化学确定HCC肿瘤细胞/组织或人免疫细胞的蛋白质水平。使用n-(1ʹ,2-二羟基-1,2ʹ-Binaphthalen-4ʹ-基)-4-甲氧基苯甲苯甲烯酰胺(C188-9),bevacizumab,pembrolizab和pembrolizab和pembrolizab。在这项研究中,强烈选择了肿瘤微环境中的人类免疫细胞,并由HCC调节,该细胞促进了IL-6/Janus激酶2(JAK2)/信号传感器和激活剂
摘要 ◥ L-精氨酸分解代谢酶精氨酸酶 1 (ARG1) 的表达是一种由肿瘤诱导的髓系细胞介导的中心免疫抑制机制。ARG1 活性的增加促进了免疫抑制微环境的形成,并导致许多癌症表现出更具侵袭性的表型。此前已证实癌症患者和健康受试者的外周血中存在针对 ARG1 衍生表位的内在 T 细胞免疫。为了评估 ARG1 衍生肽疫苗作为单一疗法和与检查点阻断联合疗法的抗肿瘤效果,我们利用了不同的体内同源小鼠肿瘤模型。为了评估抗肿瘤效果,对肿瘤进行了流式细胞术分析和 IHC,并进行了 ELISPOT 测定以表征免疫反应。我们表明,针对 ARG1 的治疗性疫苗能够激活内源性抗肿瘤
发送用于流式细胞术和细胞因子的血液样本 • 填写测试申请单。查看申请单,了解试管类型、样本量、采血天数等信息。 • 在患者样本上贴上标签,标明患者的全名、出生日期、采集日期和时间以及采集者姓名。将标签牢固地贴在样本上。 • 采集并贴上标签后,根据运输规定包装样本。 • 将填写完整的测试申请单连同样本一起放入运输箱中。 • 确保在运输箱中放入 3-4 个室温凝胶包,以便在运输过程中保持室温。 • 根据“FedEx First Overnight”运输规定包装样本和内容物。 • 填写 FedEx 表格和任何其他所需文件,以“FedEx First Overnight”运送包裹。FedEx 运费可记入我们的账户。请联系我们获取帐号。 • 将样本寄送至以下地址:
第一代 KRAS G12C (OFF) 抑制剂已被批准作为针对携带 KRAS G12C 突变的非小细胞肺癌患者的靶向治疗。然而,疗效并不持久,肿瘤很快就会摆脱单一疗法。除了已记录的肿瘤细胞内在耐药机制外,据报道,用 KRAS 抑制剂治疗的肿瘤中 TME 重塑和免疫编辑可能在获得性耐药中发挥作用。KRAS G12C (ON) 和 KRAS G12D (ON) 三重复合物抑制剂可驱动抗肿瘤免疫,并在传统上难以治疗的免疫难治性肿瘤模型中实现短暂的完全消退。我们比较了肿瘤在早期对 RAS(ON) 抑制剂的反应和后来的肿瘤再生长过程中的基因表达谱和流式细胞术分析,以指导包括联合治疗在内的最佳治疗策略。
摘要 ◥ 目的:在适当的体外和体内模型系统中,已经开发出基于精确机制的基因表达特征 (GES),以识别重要的癌症相关信号传导过程。然而,一些最初开发用于代表特定疾病过程的 GES,主要针对上皮细胞,正在应用于异质性肿瘤样本,其中特征中基因的表达可能不再是上皮特异性的。因此,在不知不觉中,肿瘤基质百分比的微小变化也会直接影响 GES,从而破坏预期的机制信号传导。实验设计:以结直肠癌为例,我们部署了多种正交分析方法,包括激光捕获显微切割、流式细胞术、大量和多区域活检临床样本、单细胞 RNA 测序以及最终的空间转录组学,以全面评估最广泛使用的 GES 的潜力,以
图 1:摘要论文主要发现的图形表示。(A) 多发性骨髓瘤中表达最多的 CD56 亚型会产生一种跨膜蛋白,该蛋白具有细胞外部分和细胞质尾。(B) 左图。与正常浆细胞相比,恶性多发性骨髓瘤细胞中的 CD56 表达更高。右图。存在超过 10% 的表达 CD56 的克隆细胞(克隆大小)与较差的结果相关。(C) 通过过度表达或沉默(基因验证)或使用实验药物(药理抑制)治疗(例如 RSK2 抑制剂 BI-D1870 (RSK2i)、CREB1 抑制剂 666-15 (CREBi) 或来那度胺)对 CD56 的调节会影响多发性骨髓瘤生存。(D) 通过流式细胞术进行 CD56 测试可根据 CD56 克隆大小对患者进行分组。 CD56 高患者对 RSK2i 或 CREB1i 与来那度胺联合使用更敏感。