- HIPSC培养和分化 - 细胞基因工程。- 通过qRT -PCR,流式细胞术和显微镜对细胞的功能表征。适用的立法和法规:由8月18日的第40/2004号法律批准的科学研究研究员的法规,在12月之前修改和重新发布。 8月27日的第202/2012号法律和第123/2019号法令第123/2019号法律法律,第164/2019号,第I系列2019-08-28,以及对科学技术基金会研究奖学金的规定,I.P.。-in https://dre.pt/dre/detalhe/ congulation/950-2019-127238533和IBET奖学金法规。
已对一种全面的流式细胞量QC方案进行了发展,以分析起始和靶向细胞产品,结合了CD34 +细胞和白细胞细胞的细胞浓度,细胞频率以及可行性的方便,快速评估,以及对潜在污染物的准确检测以及诸如残留的T和B细胞和分类的准确检测。MacSquant®分析仪10和16的抗体面板和相应的门控策略如图3a&3b。,根据流式细胞仪的CD34 +细胞终止终止的ISHAGE指南,茎的门控策略
补充图 2:(A) A549 和 A549-ISG15i 中未经顺铂处理的 p53 表达水平的 q-PCR 结果。(B) A549-ISG15i 细胞中的 Caspase-3 活性分析与用 20 μM 顺铂处理 24 小时的相关对照细胞相比。(C) 通过流式细胞术对 A549/A549-ISG15i 和 HO-8910/HO-8910-ISG15i 细胞进行细胞周期停滞分析。所有结果均显示三个独立实验的平均值。误差线表示 SEM。使用 Student's t 检验分析数据。* p < 0.05、** p < 0.01 和 *** p < 0.001。
图 6. CD4 与 CD8 T 细胞比例的保持。通过流式细胞术鉴定 CD4 和 CD8 T 细胞。非电穿孔细胞(条件 0)在活细胞、单个细胞和未转染细胞(TCRαβ + )上进行门控,而电穿孔细胞在活细胞、单个细胞和敲除细胞(TCRαβ – )上进行门控。非电穿孔细胞与使用 Neon 系统(100 µL)和 CTS Xenon 系统(1 和 9 mL)电穿孔的细胞之间的 CD4(深蓝色)和 CD8(浅蓝色)T 细胞比例基本保持一致。
摘要 背景 迫切需要免疫检查点抑制剂相关急性肾小管间质性肾炎 (ICI-肾炎) 的非侵入性生物标志物。由于 ICI 阻断了包括细胞毒性 T 淋巴细胞抗原 4 (CTLA4) 在内的免疫检查点通路,我们推测,先前在先天性 CTLA4 缺乏症患者中定义的免疫失调生物标志物,包括可溶性白细胞介素-2 受体 α (sIL-2R) 升高和外周血中 B 细胞和 T 细胞失调的流式细胞学细胞标志物可能有助于诊断 ICI-肾炎。方法回顾性研究确诊为 ICI-肾炎的患者队列,并与三组前瞻性纳入的对照队列进行比较:接受 ICI 治疗且未发生免疫相关不良事件的对照、未接受 ICI 且发生血流动力学急性肾损伤 (血流动力学 AKI) 的患者以及未接受 ICI 且经活检证实患有其他原因引起的急性间质性肾炎 (非 ICI-肾炎) 的患者。使用 Wilcoxon 秩和检验或 Kruskal-Wallis 检验比较各组间的 sIL-2R 水平和流式细胞术参数。生成受试者工作特征曲线,以确定 sIL-2R 和流式细胞术生物标志物在诊断 ICI-肾炎中的准确性。使用存档的活检样本研究了患肾中 T 细胞活化的下游影响,以评估 ICI 肾炎患者与其他原因引起的药物性肾炎、急性肾小管损伤和组织学正常对照相比的 IL2RA、IL-2 信号和 T 细胞受体信号基因表达。结果 ICI 肾炎患者 (N=24) 外周血 sIL-2R 水平显着高于接受 ICI 治疗的对照 (N=10) (中位数 0.8 倍 ULN,IQR 0.5–0.9,p<0.001) 和血流动力学 AKI 对照 (N=6) (中位数 0.9 倍 ULN,IQR 0.7–1.1,p=0.008)。与接受 ICI 治疗或血流动力学 AKI 的对照组相比,sIL-2R 临界点为 1.75 倍 ULN,可高度诊断为 ICI-肾炎(曲线下面积 >96%)。通过外周血流式细胞术分析,与接受 ICI 治疗的对照组相比,绝对 CD8+T 细胞、CD45RA+CD8+ T 细胞、记忆性 CD27+B 细胞较低以及浆母细胞扩增是 ICI-肾炎的显著特征。IL2RA、IL-2 信号传导和
摘要:目的 T 辅助细胞 (Th) 在溃疡性结肠炎 (UC) 的发病机制中起着核心作用。本研究分析了使用白细胞介素 12/23p40 抗体乌司他丁 (UST) 后循环 T 细胞的变化。方法在 UST 治疗后 0 周和 8 周从外周血中分离 CD4 T 细胞,并通过流式细胞术分析 CD4 T 细胞的比例。在 0、8 和 16 周获取临床信息和实验室数据。患者我们评估了 2020 年 7 月至 2021 年 8 月期间接受 UST 诱导缓解的 13 名 UC 患者。结果使用 UST 后,中位部分 Mayo 评分从 4 (1-7) 提高到 0 (0-6) (p<0.001)。在血清学参数中,白蛋白浓度、C反应蛋白浓度、沉降率和富含亮氨酸的α2糖蛋白浓度在UST治疗后均显示出显著改善。循环CD4T细胞的流式细胞术分析显示,所有患者的Th17细胞百分比在UST治疗后均显著降低(1.85%至0.98%,p<0.0001)。Th1细胞在UST治疗后显著增加(9.52%至10.4%,p<0.05),但Th2和调节性T细胞没有显著差异。在UST治疗16周后,高Th17亚组的部分Mayo评分明显优于低Th17亚组(0 vs. 1,p=0.028)。结论 UST治疗会减少循环中Th17细胞,提示这种变化可能与UC的抗炎作用有关。
摘要 背景 严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) Omicron 变体具有高度传染性,并能逃避预先建立的免疫力。针对祖先毒株刺突蛋白的信使 RNA (mRNA) 疫苗接种可以诱导针对 Omicron 变体的完整 T 细胞免疫力,但晚期肺癌患者对包括抗程序性细胞死亡蛋白 1 (PD-1)/程序性死亡配体 1 (PD-L1) 在内的免疫调节剂进行加强疫苗接种的疗效尚未阐明。方法 我们使用改进的活化诱导标志物测定法结合高维流式细胞术分析来评估 T 细胞反应。用各种病毒肽刺激外周血单核细胞 (PBMC),并使用流式细胞术评估抗原特异性 T 细胞反应。结果 加强疫苗在非癌症受试者和肺癌患者中均诱导了针对祖先 SARS-CoV-2 毒株和 Omicron 变体的 CD8 + T 细胞反应,但仅检测到 CD4 + T 细胞的边际诱导。重要的是,与非癌症受试者相比,肺癌患者的抗原特异性 T 细胞表现出不同的亚群动态,分化程度不同,并有功能障碍的证据。值得注意的是,观察到女性偏向的 T 细胞反应。结论 我们得出结论,接受免疫治疗的肺癌患者在对 mRNA 疫苗的 T 细胞反应方面与非癌症受试者存在显着的定性偏差,这凸显了对癌症患者加强保护措施的必要性,以最大限度地降低 Omicron 和其他未来变体突破性感染的风险。
摘要背景凝血酶是一种多功能的止血调节酶,具有促凝和抗凝作用。因此,几十年来它一直是药物研发的主要目标。凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶,具有两个带正电荷的区域(称为外部位点),已知它可以通过这些区域与许多底物结合。达比加群是一种凝血酶抑制剂,广泛用作口服抗凝剂,用于心房颤动和静脉血栓栓塞的抗血栓治疗。达比加群抑制凝血酶的机制是阻断活性位点,然而,它对凝血酶与底物结合的影响尚未得到彻底研究,因此对其了解甚少。材料和方法使用荧光标记的凝血酶和洗涤过的血小板,通过流式细胞术评估达比加群对凝血酶与血小板结合的影响。此外,为了证实结果,我们利用了现代生物分子结合研究技术、微尺度热泳动 (MST) 和表面等离子体共振 (SPR),对结果进行了验证。结果流式细胞术分析显示达比加群抑制凝血酶与血小板结合。抑制呈剂量依赖性,IC50 为 118 nM,略低于抑制血小板活化的 IC50,接近达比加群的临床相关血浆浓度。MST 和 SPR 也证实了达比加群对凝血酶与血小板结合的抑制作用。结论除了阻断活性位点外,达比加群还抑制凝血酶与血小板结合。由于凝血酶除了心血管系统之外还有许多其他功能,这一发现可能具有重要意义。
拥有生物化学、细胞生物学、分子生物学、血液学或相关领域的硕士学位。 拥有扎实的分子和细胞生物学基础,并具有细胞培养和显微镜、流式细胞术或蛋白质印迹等技术的实际经验。 对生物信息学(包括单细胞 RNA 序列数据分析)感兴趣,并且具备计算技能(例如使用数据分析工具(例如 GraphPad)或 R 等编程语言的经验)将是一种优势。 表现出科学严谨性、好奇心以及学习和应用新方法的意愿。 具有很强的积极性和沟通技巧,通过语言考试、论文工作、出版物或会议演讲表现出熟练的英语书面和口语能力。