摘要:已经开发了基于诱导多能干细胞(IPSC)衍生的运动神经元(MN)的大量体外模型,以研究运动神经元疾病(MNDS)选择性MN变性的潜在原因。例如,球体是简单的3D模型,具有大量生成的潜力,可以在不同的测定中使用。在这项研究中,我们生成了MN球体,并开发了一种工作流以分析它们。开始,通过开发管道来获得其大小和形状的测量,可以实现球体的形态学填充。接下来,我们分别通过QPCR和组织清除样品的免疫细胞化学来确认不同Mn标记在转录本和蛋白质水平上的表达。最后,我们评估了Mn球体使用微电极阵列方法以动作电位和突发形式显示功能活动的能力。尽管大多数细胞都表现出MN身份,但我们还表征了其他细胞类型的存在,即中间神经元和少突胶质细胞,它们与MN共享相同的神经祖细胞池。总而言之,我们成功地开发了一种MN 3D模型,并优化了可以应用其形态学,基因表达,蛋白质和功能性培养的工作流,随着时间的流逝。
4. 典型散射问题:散射问题的定义、斯托克斯参数、穆勒矩阵、相函数、散射和吸收效率、消光、光影定理、平面波展开、球面谐波、电磁多极子、均匀球体的米氏系数、电偶极子和磁偶极子以及孤立球体的定向散射、瑞利散射、瑞利-甘斯近似、导体和电介质圆柱体的平面波散射。
图2:3D PDAC片段模型的开发。a。微流体芯片Identx3,AimBiotech TM的示意图。B.碎屑上胶原蛋白中癌细胞播种的示意图,随后的球体形成。C. PDAC肿瘤球体从单细胞(D0)与芯片上胶原蛋白成熟7天后发育的明亮场显微镜图像(D0)(D7)。比例尺= 100µm。d-f。 Live/Dead Assay的共聚焦显微镜图像(死=红色; Live = Green),带有(d)3D堆栈的Z-Procotity,在第8天芯片,(E-F)3D共聚焦堆栈重建。比例尺= 100µm。g-i。第二次谐波生成(SHG)显微镜图像肿瘤球体(绿色),周围的胶原基质(红色)3D堆栈(G)的Z-Proctions(g),重建了3D图像(H-I)。比例尺= 50µm。
胆管癌(CCA)是一种致命的胆管癌,具有高耐药性和复发率,只有五分之一的患者有资格接受手术治疗。该疾病抵抗了标准的化疗,并且经常复发。嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法对血液学恶性肿瘤有望,但由于PD-L1表达等抗性机制,肿瘤用于逃避免疫系统,因此面临实体瘤的挑战。为了应对这一挑战,我们开发了针对整联蛋白αVβ6的第五代CAR T细胞,该细胞还分泌抗PD-L1单链可变片段(SCFV),以靶向肿瘤细胞和PD-1/PD-L1途径。我们在CCA细胞系和工程T细胞中检查了整联蛋白αVβ6和PD-L1的表达,以表达针对整联蛋白αVβ6(A20 CAR4 T细胞)的第四代CAR T细胞,或用抗PD-L1 SCFV分泌(A20 CAR5 T细胞)(A20 CAR5 T细胞)(A20 CAR4 T细胞)或第五代CAR T细胞(A20 CAR5 T细胞)。在体外,与A20 CAR4 T细胞相比,A20 CAR5 T细胞表现出更少的疲惫和长期功能。 在CCA的3D球体模型中,A20 CAR5 T细胞表现出增强的抗肿瘤活性,并更好地浸润到球体核心中。 这些发现表明A20 CAR5 T细胞在体内研究和临床试验中具有巨大的潜力,并需要进一步。在体外,与A20 CAR4 T细胞相比,A20 CAR5 T细胞表现出更少的疲惫和长期功能。在CCA的3D球体模型中,A20 CAR5 T细胞表现出增强的抗肿瘤活性,并更好地浸润到球体核心中。 这些发现表明A20 CAR5 T细胞在体内研究和临床试验中具有巨大的潜力,并需要进一步。在CCA的3D球体模型中,A20 CAR5 T细胞表现出增强的抗肿瘤活性,并更好地浸润到球体核心中。这些发现表明A20 CAR5 T细胞在体内研究和临床试验中具有巨大的潜力,并需要进一步。
3D生物打印斑块的心外膜移植代表了针对梗塞诱导的心肌损伤的有前途的保护策略。我们先前表明,含有心脏球体的3D生物打印组织(在藻酸盐/明胶(alggel)水凝胶中)促进了细胞活力/功能和内皮细胞管状自组件。在这里,我们假设生物打印的心脏球体斑块可改善心肌梗塞后心脏功能(MI)。为了确定单独或用细胞的水凝胶的治疗效果,将MI小鼠移植到:(i)Alggel caellular斑块,(ii)具有自由悬浮心脏细胞的alggel,(III)带有心脏球体的Alggel。我们包括对照MI小鼠(无治疗)和接受假手术的小鼠。我们进行了28天的测量,包括超声心动图,流式细胞仪和转录组分析。我们的结果测量了所有小鼠的基线基线(手术前)左心室射血分数(LVEF%),为66%。手术后,假(非敏感)的LVEF%为58%,MI(无治疗)小鼠为41%。斑块移植增加了LVEF%:55%(细胞; P = 0.012),59%(细胞; P = 0.106),64%(球体; P = 0.010)。流式细胞术表明宿主心脏组织免疫细胞种群随着治疗而变化。RNASEQ转录组显示了用心脏球形斑块处理的假和小鼠的类似基因表达谱。 挤出3D生物打印允许水凝胶斑块的产生,甚至可以保留直接悬浮在生物墨水中的微动心球体。RNASEQ转录组显示了用心脏球形斑块处理的假和小鼠的类似基因表达谱。挤出3D生物打印允许水凝胶斑块的产生,甚至可以保留直接悬浮在生物墨水中的微动心球体。炎症和遗传机制可能在梗塞心脏斑块移植后调节宿主反应中起重要作用。未来的研究来阐明这些初始发现的潜在的免疫细胞和基因表达相关的分子机制。
图3。真核细胞原型。(a)用塑料球绘制的塑料球产生的真核细胞的表示;一个孤立的球是一个单个细胞,球体的结合代表形成多细胞生物的细胞的缔合。小块的自粘性胶带粘在球体上,使它们可以自由或分组。(b)封闭的真核细胞原型,用两个盆地用工艺涂料绘制,并由电线边缘固定。(c)开放的真核细胞原型,其中可以观察到细胞质,核和遗传物质。(d)方案表示可以在原型中观察到的细胞结构。
该方法还突出了结构内的多个重要的分子信号通路。其中之一,一种称为MTOR的途径,与细胞生长和代谢有关,在轴突球体中过度活跃。因此,团队进行了一个其他实验,在该实验中,他们将淀粉样蛋白施加到培养皿中的神经元中,导致他们开发类似于人和小鼠组织中轴突球体类似的结构。当他们引入阻断MTOR途径的药理剂时,球体会缩小。这也是在小鼠组织中真实的。
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碰撞前粘土-块体和球体-块体系统的动量在两种情况下都是相同的,因为动量在碰撞中不会改变;碰撞后也一样。情况 B 中的球体从块体上弹起,因此碰撞后的动量小于情况 A 中的粘土(或为负)。为了使两种情况下的系统在碰撞后具有相同的动量,块体 B 的动量必须大于块体 A,因此速度也更大。块体下落所需的时间相同,因此块体 B 行进的水平距离(发射速度 x 下落时间)大于 d A 。