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World File Search System电穿孔
电穿孔不会直接影响人类真皮成纤维细胞的增殖和迁移特性，而是通过分泌组间接影响
Sara Gouarderes、Layal Doumard、Patricia Vicendo、Anne-Françoise Mingotaud、Marie-Pierre Rols 等人。电穿孔不会直接影响人类真皮成纤维细胞的增殖和迁移特性，而是通过分泌组间接影响。生物电化学，2020 年，134，第 107531 页。�10.1016/j.bioelechem.2020.107531�。�hal-02560967�
简单的电穿孔即可在小鼠受精卵中实现高效的 CRISPR/Cas9 基因组编辑
受精卵电穿孔是小鼠中 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑中复杂的原核注射程序的快速替代方法。然而，目前的电穿孔方案要么需要投资专门的电穿孔仪，要么需要对受精卵进行腐蚀性预处理，这会损害胚胎的活力。在这里，我们描述了一种易于适应的方法，通过使用带有合成 CRISPR/Cas9 组件的普通电穿孔仪对完整的受精卵进行电穿孔，高效地在小鼠中引入特定突变，并且技术要求最低。该方案可有效处理来自各种遗传背景的受精卵，并与其他 CRISPR 核酸酶（如 Cas12a）兼容。
在子宫内电穿孔中，多d缩的基因组 -
位于小鼠大脑皮层中的原生质星形胶质细胞（PRA）紧密并置，在成人阶段形成了明显连续的三维基质。到目前为止，没有免疫染色策略可以将它们单一单一的策略和在成熟动物和皮质生成过程中的形态进行分割。皮质PRA起源于背胸膜中的祖细胞，可以轻松地使用整合载体的子宫电穿孔来靶向。这里提出了一项方案，该方案将这些细胞用可抑制基因组融合的颜色（魔术）标记策略标记，该策略依赖于PiggyBac/ tol2换位和CRE/ LOX重组以随机表达明显的荧光蛋白（蓝色，氰基，黄色和红色），以特定于特异性的亚细胞界面。这种多色命运映射策略使在胶片发生开始之前与颜色标记物的结合可以标记附近的皮质祖细胞，并跟踪其后代，包括星形胶质细胞，从胚胎到各个细胞水平的成人阶段。半parse标记通过调整电穿孔矢量的浓度和颜色对比度的浓度，该颜色可通过多种基因组整合的颜色标记（魔术标记或MM）提供，使星体胶质细胞个性化并将其领土和复杂的形态单一单一单一单一单独化。是一个全面的实验工作流程，包括电穿孔程序的详细信息，通过共聚焦显微镜进行多通道图像堆栈以及计算机辅助的三维分割，这将使实验者能够评估单个PRA的体积和形态。总而言之，魔术标记的电穿孔提供了一种方便的方法，可以单独标记许多星形胶质细胞并在不同的发育阶段访问其解剖特征。该技术对于分析各种小鼠模型中的皮质星形胶质细胞形态特性将是有用的，而无需诉诸于具有转基因报告基因的复杂杂交。
微秒电穿孔对宫颈癌细胞的孔径，活力和线粒体膜电位的影响
通过应用适当的振幅和参数的电场脉冲来提高膜渗透率。此方法称为“电抛液”或“电穿孔”（EP）。使用EP应用，在正常细胞条件下无法穿越膜的颗粒可以通过膜。强烈和短期的电脉冲导致细胞膜上的跨膜电位（TMP）上升（1-5）。当TMP达到临界值时，水孔的形成将允许通过膜进行分子过渡。尽管无法完全表达分子水平的精确机制，但在观察到最高TMP的膜区域已经证明了分子流量（6-8）。EP的有效性取决于应用的电脉冲参数（持续时间，强度脉冲形状和脉冲数）。基于这些参数的影响，EP可以是可逆的或不可逆的（9-11）。可逆EP在医学和生物技术领域中有许多应用，包括电疗疗法和电化学疗法（ECT）（5,12）。不可逆的EP用于肿瘤消融（由于其非热作用）和灭菌目的（11-13）。
HLA-A/B/C敲除电穿孔套件
说明HLA-A/B/C敲除电穿孔套件适用于通过电穿孔的细胞系和原代T细胞工程。该套件既包含Cas9酶（链球菌）和靶向HLA-A/B/C（人白细胞抗原）的GRNA。该套件足以设计高达500万个原代T细胞。背景HLA（人白细胞抗原）-a，b和c是MHC的三种主要类型（主要的组织相容性复合物）1类跨膜蛋白。它们与β2微球蛋白蛋白（由B2M基因编码）形成异二聚体。MHC 1类分子表现出短多肽，通常在长7-11个氨基酸之间，以识别为“自我”或“非自身”的免疫系统。HLA-C存在于所有细胞中，并且由于HLA-C基因的多样性而作为几种单倍型存在。c*08：02代表一种这样的单倍型。HLA I类将新抗原衍生的肽呈现到细胞表面，从而通过TCR（T细胞受体）识别出T细胞的识别。 癌症免疫疗法一直在使用该机制，方法是表达能够识别特定癌症免疫原子的TCR。 在2016年，HLA-C*08：02限制性TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）在肺癌中靶向KRAS（Kirsten大鼠肉瘤病毒）G12D突变，导致阳性结果。 在转移性胰腺癌患者中采用了类似的方法，并导致该疾病的消退。 HLA-C*08：02限制性TIL对其他新抗原的TCR的研究可能对癌症治疗有益。 应用程序HLA I类将新抗原衍生的肽呈现到细胞表面，从而通过TCR（T细胞受体）识别出T细胞的识别。癌症免疫疗法一直在使用该机制，方法是表达能够识别特定癌症免疫原子的TCR。在2016年，HLA-C*08：02限制性TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）在肺癌中靶向KRAS（Kirsten大鼠肉瘤病毒）G12D突变，导致阳性结果。在转移性胰腺癌患者中采用了类似的方法，并导致该疾病的消退。HLA-C*08：02限制性TIL对其他新抗原的TCR的研究可能对癌症治疗有益。应用程序K562细胞是HLA I和II类负的，使其成为引入和研究特定单倍型响应的理想细胞模型。hla在供体细胞和个体之间的不匹配可以导致免疫排斥反应，一种选择是敲除内源性HLA，从而使细胞被更广泛地普遍使用。
电穿孔在人类和兽医肿瘤学中的应用
ire是一种方法，其中EP通过60-100高压（1.5-3 kV）80-100 µs的爆发来诱导渗透细胞死亡。导致这种渗透死亡的细胞机制是由反应性氧的激活，这是由于跨膜离子流动改变导致的细胞内钙的过度蓄积。IRE触发的细胞死亡发生，没有大量的热变暖或热诱导的Tis-Sue损伤（6）。GET方法论是基于产生能够使遗传颗粒（例如质粒）跨越细胞膜的微孔的，以引入负责诱导免疫系统或靶细胞死亡的基因的表达（9）。ect是一种方法，在这种方法中，通过在肿瘤组织上应用高压电场在局部或系统上的施用，以促进肿瘤细胞对抗肿瘤药物的渗透率（10）。已经提出了几种不同的电程。在图1a，b，c中描绘了最多采用的ECT电场。最常用的细胞毒性化学治疗剂是博来霉素，同样
CRISPR使用霓虹灯电穿孔对永生的细胞系编辑
该方案描述了如何将核糖核蛋白（RNP）复合物组成，这些复合物由纯化的CAS9核酸酶复制，用化学改良的合成单导剂RNA（SGRNA）复制到永生的粘附或悬浮液中。包括一个敲门选项。RNP递送是使用Thermo Fisher Neon™转染系统完成的。包括各种细胞类型的电穿孔设置的参考。化学修饰的SGRNA旨在抵抗可导致细胞死亡的外核酸和先天的细胞内免疫级联反应。Editco化学修改的合成SGRNA具有特殊的纯度，并且始终驱动高编辑频率。
Neon NxT 电穿孔系统
电气额定值 100–240 VAC，50/60 Hz，270 VA 脉冲电压 500–2,500 V 脉冲持续时间 1–100 毫秒 最大占空比 0.1 充电时间 最长 6 秒 海拔高度 最高 2,000 米 工作温度 15°C 至 30°C 最大相对湿度 最高 80% 防护等级 IPX0 保护接地 I 类（接地） 安装类别 II 仪器类型 台式装置 设备尺寸（宽 x 长 x 高） 9.5 x 10.1 x 7.6 英寸（24.1 x 25.7 x 19.3 厘米） 1 通道移液器工作站尺寸（宽 x 长 x 高） 4.9 x 6.6 x 5.0 英寸（12.4 x 16.8 x 12.7 厘米） 8 通道移液器工作站尺寸（宽 x 长 x 高） 5.2 x 8.9 x 4.8 英寸（13.2 x 22.6 x 12.2 厘米） 设备重量 10.1 磅（4.6 千克） 内置功能 触摸屏（800 x 600 像素），数字显示
Neon NxT 电穿孔系统用户指南（出版号 MAN0026677 B.0）
系统组件....................... ... 11 Neon™ NxT 单通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 单通道移液器..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站.................................................................................................................................................................................. .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 15 Neon™ NxT 8 通道移液器.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 尖端..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 1 通道管.................. ... ........................................................................................................................................................................................................................................................................19 Neon™ NxT 8 通道管.......................................................................................................................................................................................................................................................................19
neon-nxt-电穿孔系统手册.pdf
6. 用 2 mL 电解缓冲液填充 Neon NxT 管（对于 10 μ L Neon NxT 吸头，使用缓冲液 E10）。 7. 将 Neon NxT 管插入 Neon NxT 移液器站。 8. 在设备上设置所需的电穿孔方案和脉冲条件。 9. 将预热的细胞培养板从培养箱移到生物安全柜 10. 要将 Neon NxT 吸头插入 Neon NxT 移液器，请按下移液器上的按钮至第二档以打开夹子。 11. 按照下面的板图或表格对样品进行电穿孔。移取样品溶液，将移液器停靠在站上，然后应用相应的电穿孔方案（11a）。每次电穿孔运行完成后，将样品转移到