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针对不动杆菌 1 的高效无疤痕基因组编辑工具包
图 2. 适用于鲍曼不动杆菌 276 AB5075 的基因组编辑策略示意图，用于删除 craA 。质粒特征如图 1 所示。当 277 表示时，LB 琼脂平板补充了 100 mg/L 氨苄青霉素 (Ap)、200 mg/L 阿普霉素 (Apr) 和/或 30 mg/L 亚碲酸盐 (Tel)。为了确认 craA 缺失，使用引物 craA fw seq 和 craA down rv 进行菌落 PCR 279。作为对照，使用野生型 AB5075 280 (WT) 和 pEMGT-craA (p)。M：DNA 分子量标记，条带大小以千碱基 (Kb) 表示。使用 BioRender.com 创建。282
一种用于噬菌体工程的高效，无疤痕，无选择的技术
未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本的版权持有人（本版本发布于5月29日，2021年。; https：//doi.org/10.1101/2021.05.27.4446060 doi：biorxiv Preprint
CRISPR 共编辑策略实现无疤痕同源性......
摘要：成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/Cas9 通过提供一种简单而强大的方法来切割特定的基因组序列，彻底改变了基因组编辑。然而，在目标位点引入模板化变化通常需要同源定向修复 (HDR)，而这种修复仅在培养的一小部分细胞中起作用。为了富集 HDR 依赖性编辑细胞，我们采用了一种共同编辑策略，即在挽救内源性预制温度敏感 (ts) 突变的同时编辑目标基因 (GOI)。通过使用 ts 突变的修复作为可选择标记，由于编辑会恢复野生型 (wt) 序列，因此选择是“无疤痕的”。为了验证原理，我们使用了 HEK293 和 HeLa 细胞，这些细胞在必需的 TAF1 基因中发生了 ts 突变。 CRISPR 联合编辑 TAF1ts 和 GOI 可使高达 90% 的耐高温细胞携带 GOI 中的所需突变。我们使用该系统插入由质粒供体编码的大盒和由单链寡核苷酸供体 (ssODN) 编码的较小变化。值得注意的是，我们编辑的基因之一是在蛋白酶体亚基 PSMB6 中引入 T35A 突变，从而消除其 caspase 样活性。编辑后的细胞显示出这种活性的特定降低，证明了该系统在生成具有内源基因生物学相关突变的细胞系中的实用性。这种方法提供了一种快速、高效且无疤痕的方法来选择需要 HDR 的基因组编辑细胞。
任何站点附近果蝇基因组的无疤痕工程...
我们描述了一种简单而有效的技术，该技术允许在任何包含倒置ATTP盒的着陆点附近对果蝇基因组序列进行无疤痕的工程，例如模拟插入。这种两步方法结合了PHIC31积分酶介导的位点特异性和归纳核酸酶介导的局部重复分辨率，有效地将原始的着陆点等位基因转换为修改等位基因，仅具有所需的变化。纳入此方法中的主要标记允许在每个步骤中对正确的单个平流进行效率。原则上，单个ATTP站点和FRT站点也是有效的着陆点。鉴于较大且越来越多的着陆点线可用，因此该方法提供了一种简单而快速的方法，可以以无忧的方式对大多数果蝇基因组进行有效编辑。此技术也应适用于其他物种。
高度抛光的手术刀叶片可减少杜罗克猪的切口伤口疤痕变异性
对手术切口产生的疤痕外观的担忧仍然是投资微创手术的主要动机。在某些医学情况下，需要开放手术程序，因此继续需要减少手术后皮肤疤痕。与临床标准手术刀叶片相比，该项目旨在确定高度抛光的手术手术刀叶片是否会减少组织损伤，随后的炎症和疤痕。使用Duroc Pig手术切口模型比较抛光标准的商业手术叶片在三个级别增强的表面饰面到市售叶片的疤痕。在各个时间点（第5天，第30天和第60天）比较了组之间疤痕形成（区域和宽度）的差异。在每个术后时间点，抛光的叶片显示出明显小的疤痕面积（P <0.05），比相应的对照组（Bard-Parker＃15叶片）。此外，我们观察到的抛光叶片的疤痕宽度和宽度方差明显小于第60天（p <0.05）。这种作用的解释与由精细过程产生的手术刀叶片引起的减少组织创伤有关。数据支持以下假设：从极其完成的叶片中的手术切口导致疤痕大大减少。