人们普遍认为,制药行业需要一种更具生理相关性的体外模型,以更好地预测药物毒性和疗效。十多年前,一种被称为“芯片器官”(OOAC)的新技术的出现引起了极大的兴奋,因为人们相信 OOAC 可以满足这一需求。政府机构和风险投资的开发活动和投资激增。大多数开发 OOAC 的组织选择使用采用微加工技术制造的微流体设备,该技术在电子行业有着悠久的成功历史,因为它在微电子芯片中提供了更强的功能、更好的性能和经济效益。然而,生物系统中液体流动的物理原理与控制微电子电路中电子的物理原理非常不同。经过 10 年的紧张发展,值得研究 OOAC 技术的现状并评估需要什么才能实现预期的转变。令人失望的是,包括 OOAC 在内的先进体外方法至今仍无法减少使用动物进行药物安全性评估的次数。似乎至少有三个因素:i) 缺乏对医学研究中动物替代与药物开发中高通量筛选 (HTS) 需求之间相互冲突的市场需求的理解 ii) 开发更复杂模型(尤其是在使用微流体时)的技术困难 iii) 在行业采用任何新技术之前,需要有证据表明该技术对行业具有强大的经济优势。
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步骤:将Vero细胞接种在适当的培养基中(RPMI 1640,10%FBS)。将两个细胞培养容器分别放在一个Provi™CM20孵化监视器头上,该孵育型显示器头部安装在CellXpert C170I CO 2从Eppendorf的CellXpert C170i CO 2孵育器中,温度为21.2°C。细胞在37°C和5%CO 2下孵育。播种后约60小时监测细胞生长。CO 2浓度和温度同质性同时记录。根据DIN 12880:2007-05标准,通过外部探针在27个测量点处测量CO 2孵化器中的温度均匀性。
摘要:背景:高危神经母细胞瘤患者的结果仍然很差,并且迫切需要新的治疗策略。RIST方案代表了一种新型的计量和多模式治疗策略,用于将分子靶向药物作为“预处理”与常规化学疗法主链结合的高危神经细胞瘤,目前在II期临床试验中进行了评估。用于临床前药物测试,与mo-nolayer培养物相比,癌细胞的生长是球体的优势,因为它重现了广泛的肿瘤特征,包括三维结构和癌症干细胞(CSC)特性。这项研究的目的是建立一个神经母细胞瘤模型,以严格评估RIST治疗方案。方法:通过mRNA和蛋白质分析和球体生存能力通过基于发光的测定进行评估CSC标记表达。通过组织微阵列分析和患者数据挖掘评估RNA结合蛋白LA在神经母细胞瘤中的异常表达。结果:与单层培养物相比,球体培养物显示出较高的CSC样标记(CXCR4,Nanog和BMI)亚组的表达和更高的THR389磷酸化表达。球体靶向分子的“预处理”降低了肿瘤信号传导和CSC标记表达。结论:RIST治疗方案有效地降低了以晚期CSC特性为特征的神经母细胞瘤球体的活力。
US FDA在两次独立的预定会议中证实(1),上述临床前安全研究足以支持单位RVSVN4CT1-AMARV GP1疫苗的临床评估。
乳腺癌 (BC) 是一种复杂的疾病,包含多种不同的亚型,这些亚型具有不同的遗传特征和病理特性。尽管大量抗肿瘤化合物已被批准用于临床,但患者之间药物反应的差异十分常见,这凸显了对个体化治疗进行有效治疗预测的必要性。最近,已经建立了几种用于预测药物反应的患者衍生模型。然而,每种模型都有其局限性,阻碍了它们的临床应用。在这里,我们报告说,可以从所有乳腺肿瘤中稳定地建立全肿瘤细胞培养 (WTC) 体外模型,成功率很高(116 个中的 98 个),并且它可以将亲本肿瘤与内源性微环境重新组装。通过研究来自一个患者群体的 WTC 的广泛 BC 疗法,我们观察到了很强的临床关联和预测值。在另一项验证研究中,基于 WTC 的测试结果与患者的临床反应之间的相关性进一步证实了准确性,该研究模拟了 15 名 BC 患者的新辅助治疗方案。总的来说,WTC 模型使我们能够在 10 天内完成个性化药物测试,即使是小型肿瘤,也凸显了其在个性化 BC 治疗中的潜力。此外,结合基因组和转录组分析,基于 WTC 的测试还可以帮助对特定患者群体进行分层,以便分配到适当的临床试验中,并在药物开发过程中验证潜在的生物标志物。
摘要:栽培富有的草莓的花卉过渡是一个热门话题,因为这些基因型永远存在,并且很难以非浮基状态保持。但是,很少使用形态发生和分子分析对其进行研究。因此,我们检查了涉及源自口服的基因的形态发生效应和基因的激活,并在富有雌雄的F1杂交幼苗中进行了启动。在10 h SD和20 h LD条件下的12、19和26℃下生长幼苗。我们观察到对分生组织发育的强烈影响和开花基因座T1(FAFT1) - Constans1(FASOC1)途径过表达的抑制剂,类似于富有林地草莓中的途径。富有的品种显示出定量LD植物的典型特征,在所有温度下,在LD下比SD条件更早地流动。我们还发现,在LD条件下FAFT1上调促进了口服诱导,而顶端的FASOC1上调导致光周期独立的lip loperal启动。此外,我们确定了草莓分生组织身份基因faful也可以用作EB品种中植物启动的早期指标。这项研究还强调了种子传播的F1杂交体在遗传研究中的优势,即它们在遗传上是相同的,并且不受先前的浮雕病史的偏见。
DNA 质粒是细胞培养实验中 RNA 和蛋白质传递和表达的重要工具之一。质粒的制备通常涉及繁琐的细菌克隆、验证和纯化过程。虽然可以从合同制造商处设计和订购表达质粒,但当需要大量质粒时,成本可能会过高。我们开发了一种高效的全合成方法和协议,能够在短短 3 小时内生产出包含表达元件的环化 DNA,这些元件可供转染,从而省去了细菌克隆步骤。该协议描述了如何将使用常用软件设计并从其中一个商业制造商处订购的线性双链 DNA 片段作为输入,然后以最少的动手时间有效地环化和纯化该 DNA 片段。作为该原理的证明,我们通过生产表达扩展的 Prime 编辑向导 RNA (epegRNA) 的 DNA 来展示该方法的功能,用于细胞培养基因组编辑。该方法不仅限于基因编辑,还可用于需要表达短 RNA 和蛋白质的各种应用。速度快、成本低、使用方便,将使该方法成为基因编辑工具包中的另一个有价值的工具,而且由于反应简单,该方案可以轻松实现自动化。
Horizon HAP1 细胞系在干冰上运输。虽然已采取预防措施防止 CO 2 在运输过程中进入小瓶,但建议在收到细胞后将其在液氮中储存两天或更长时间,以让任何 CO 2 消散。从液氮储存中取出小瓶时,将其置于室温下约 30 秒或更长时间,以使液氮从小瓶中消散。注意:处理储存在液氮中的小瓶时,务必佩戴防护眼镜和手套。
质量保证证实该产品已根据正确的程序制造和测试。国家监管局授予最终授权发布产品