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World File Search System转染
transit®-lenti转染试剂
要产生慢病毒，HEK 293细胞被编码所需的GAG，POL和REV结构和调节基因的包装质粒以及编码兴趣基因的转移载体（GOI）。复制无能是通过在单独的质粒上表达最小病毒成分来实现的，并通过在转移载体中的3'长末端重复（LTR）的重大删除来结合自我激活（SIN）元素。必需成分与VSV包膜蛋白G结合使用，以进行广泛的病毒质量和纯化过程中稳定性的提高。慢病毒颗粒被分泌到细胞培养基中，在该培养基中收集，过滤并冷冻到等分试样中，以便随后转导到靶细胞中。
Transit®-CHO转染套件
转染时细胞密度（％汇合）。转染时CHO细胞亚型的建议细胞密度≥80％汇合。确定每个CHO细胞亚型的最佳细胞密度，以最大程度地提高转染效率。在转染前18-24小时将细胞划分，以确保细胞在转染时积极分裂并达到适当的细胞密度。DNA纯度。使用高度纯化，无菌和无污染物的DNA进行转染。无内毒素且具有260/280的吸光度比为1.8-2.0的质粒DNA准备。DNA，因为它可能包含高水平的内毒素。我们建议使用Miraclean®内毒素去除试剂盒（miR 5900）从DNA制备中去除内毒素的任何痕迹。TransIt® -cho试剂：DNA比。作为起点，使用3 µL每1 µg DNA的反式IT-CHO试剂。可以通过从每µg 1-5 µl的DNA滴定试剂来确定最佳的反式IT-CHO试剂与DNA比。请参阅第3页的表1，以获取建议的起始条件。CHOMOJO试剂：DNA比率。根据细胞培养和实验条件，可能需要不同的Cho Mojo试剂量。最佳的Cho Mojo试剂：DNA比应通过滴定从每µg每µg DNA滴定为0-2 µl的试剂来确定。请参阅第3页的表1，以获取建议的起始条件。复杂的形成条件。准备trans It-cho：Cho Mojo：无血清生长培养基中的DNA复合物。Mirus建议Opti-Mem I还原媒介。细胞培养条件：适当的培养基中，有或没有血清的培养细胞。无需执行介质更改即可去除转染络合物。反式转染试剂盒在没有转染后培养基变化的情况下进行转染时会提高效率。存在抗生素：抗生素将抑制转染复合物的形成，因此应排除在复合形成步骤中。可以将转染复合物添加到包含低水平抗生素（0.1-1倍终浓度的青霉素/链霉素混合物）的完整培养基中生长的细胞中。转染后的孵育时间。确定每种细胞类型后转染后最佳的孵育时间。最佳孵育时间通常为24-72小时，但会根据实验的目标，质粒的性质和表达蛋白质的半衰期而变化。
定义转染的疟原虫中载体吸收的多样性
恶性疟原虫中耐药性的复发性出现增加了遗传验证耐药性机制并确定新靶标的紧迫性。反向遗传学促进了基因组规模的基因敲除筛网和弓形虫弓形虫的基因组规模的敲除筛选，其中多个向量的合并转染对于增加规模和吞吐量至关重要。这些方法尚未在人类疟疾物种（如恶性疟原虫和诺尔斯氏菌）中实施，部分原因是在这些物种中可以进行合并转染的程度尚待评估。在这里，我们使用下一代测序来定量摄取94个条形码向量的池。载体采集的分布使我们能够估计寄生虫种群所取的条形码和DNA分子的数量。恶性疟原虫转染物的稀释克隆表明，单个克隆具有多达七个偶发性条形码，表明尽管转染效率低下，多个载体的摄入量经常发生。对三个光谱呈现的荧光记者的转染使我们能够评估不同的转染方法，并发现Schizont阶段转染限制了寄生虫接收多个向量的趋势。与恶性疟原虫相比，我们观察到，诺尔斯氏菌的较高转染效率导致文库几乎完全表示。这些发现对如何在可培养的质量物种中缩放反向遗传学具有重要意义。
简单而强大的电转染方案，可在人类 B 细胞中实现有效的异位基因表达和基因组编辑
1. Zhao N、Qi J、Zeng Z、Parekh P、Chang CC、Tung CH 等。使用简单的阳离子聚合物纳米复合物转染难以转染的淋巴瘤/白血病细胞。《Journal of Controlled Release》。2012；159(1)：104-10。2. Meacham JM、Durvasula K、Degertekin FL、Fedorov AG。细胞内递送的物理方法。《Journal of Laboratory Automation》。2014 年 2 月；19(1)：1-18。3. Kaestner L、Scholz A、Lipp P。转染和基因递送的概念和技术方面。《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》。2015 年 3 月；25(6)：1171-6。4. Mosier DE。“逆转录病毒载体的安全注意事项：简要回顾”简介。《Applied Biosafety》。2016；9(2)：68-75。 5. Glover DJ、Lipps HJ、Jans DA。《面向人类安全、非病毒治疗性基因表达》。《自然遗传学评论》。2005 年 4 月 10 日；6(4)：299-310。6. Kim TK、Eberwine JH。《哺乳动物细胞转染：现在和未来》。《分析和生物分析化学》。2010 年；397(8)：3173-8。7. Rols MP。《电通透化：一种将治疗分子递送到细胞中的物理方法》。《生物化学与生物物理学报》（BBA）-生物膜。2006 年 3 月；1758(3)：423-8。8. Jordan ET、Collins M、Terefe J、Ugozzoli L、Rubio T。《优化原代细胞和其他难以转染的细胞中的电穿孔条件》。《生物分子技术杂志》。2008 年； 9. Chicaybam L、Barcelos C、Peixoto B、Carneiro M、Limia CG、Redondo P 等人。一种用于哺乳动物细胞遗传改造的有效电穿孔方案。生物工程与生物技术前沿。2016；4：99。10. Machy P、Lewis F、McMillan L、Jonak ZL。通过电穿孔将基因从靶向脂质体转移到特定淋巴细胞。美国国家科学院院刊。2006；85(21)：8027-31。11. Maurisse R、De Semir D、Emamekhoo H、Bedayat B、Abdolmohammadi A、Parsi H 等人。将 DNA 转染到来自不同谱系的原代和转化哺乳动物细胞中的比较。BMC 生物技术。2010；10。 12. Gahn TA、Sugden B. 电穿孔显著、短暂抑制伯基特淋巴瘤细胞系中 Epstein-Barr 病毒潜伏膜蛋白基因的表达。J Virol。1993；67(11)：6379-86。13. Goldstein S、Fordis CM、Howard BH。电穿孔 G2/M 同步细胞并用丁酸钠处理后，转染效率提高，细胞存活率提高。Nucleic Acids Research。1989；17(10)：3959-71。14. Liew A、André FM、Lesueur LL、De Ménorval MA、O'Brien T、Mir LM。使用方波电脉冲对人类间充质干细胞进行可靠、高效、实用的电基因转移方法。人类基因治疗方法。2013 年 10 月；24(5)：289-97。 15. Kreiss P, Cameron B, Rangara R, Mailhe P, Aguerre-Charriol O, Airiau M 等。质粒 DNA 大小不影响脂质体的理化性质，但可调节基因转移效率。核酸研究。1999；27(19)：3792-8。16. Lesueur LL, Mir LM, André FM。克服体外原代细胞大质粒电转移的特殊毒性。分子疗法 - 核酸。2016；5：e291。17. Germini D、Saada YB、Tsfasman T、Osina K、Robin CC、Lomov N 等人。基于一步法 PCR 的检测方法用于评估基因组 DNA 编辑工具的效率和精度。分子疗法 - 方法与临床开发。2017 年 6 月；5（六月）：43-50。18. Georgakilas AG、Martin OA、Bonner WM。p21：双面基因组守护者。分子医学趋势。2017 年 4 月；23（4）：310-9。
nepa21单元转染数据库
1 |提供我们免费的演示和试用优惠的PA G E客户提供了进一步的专有数据和专有信息信息，以通过NEPA21系统转染干细胞转染。列出的高效率和高可行性是可重复的（每个电动穿孔）。请随时与我们联系以获取最新数据：sales@sonidel.com
可扩展的结果30ml-2l在转染后带有Expicho™表达系统的OptimumGrowth®瓶中的30ml-2l
A.拆分Expicho-S™种子细胞，达到4 x 10^6活细胞/mL的最终密度。B.在37°C下将细胞与8％Co₂一起孵育过夜，在平台振荡器上，将2英寸轨道设置为100 rpm。应将1英寸轨道的振动器设置为140 rpm。转染后的速度调整将使2英寸轨道振荡器上的速度降低至80rpm，或者在1英寸轨道振荡器上将速度降低至100rpm。（请参阅表2）C。对于最佳的实验条件，保持湿度水平在50-55％之间至关重要。如果没有湿度控制，则另一种方法是使用装有水的汤姆森1.6升烧瓶，使帽子掉落以帮助维持所需的水分水平。第0天|转染
使用 24 孔板脂质体转染技术对含有 RNP 的永生化细胞系进行 CRISPR 编辑
本方案描述了如何将由纯化的 Cas9 核酸酶与化学修饰的合成单向导 RNA (sgRNA) 组成的核糖核蛋白 (RNP) 复合物递送至标准永生化细胞系（粘附或悬浮）。尽管针对 HEK293（人胚胎肾 293 细胞）进行了优化，但本方案可能适用于许多其他细胞系（例如 A549、U2OS、HeLa、CHO、MCF-7）。RNP 递送是使用 Lipofectamine™ CRISPRMAX™ 转染试剂完成的。化学修饰的 sgRNA 旨在抵抗核酸外切酶的降解并防止可能导致细胞死亡的先天性细胞内免疫级联。本方案可用于转染 EditCo 的多向导基因敲除试剂盒。
使用 RNP 在永生化细胞系中进行阵列式 CRISPR 多向导文库核转染
功能测定通常使用阵列式 CRISPR 筛选进行，以关联每种基因扰动对细胞功能、形态或生理学方面的影响。优化所选测定至关重要，以确保其能够可靠地识别感兴趣的表型。这可以使用测定特异性阳性和阴性对照来完成（参见第 5 页的建议对照表）。此外，优化 CRISPR 编辑和测定之间的时间也很重要，以确保可以测量清晰的表型信号。测定特异性阳性对照可用于此目的。
利用 NxT 的最佳技术进行转染 - Rhenium Bio
图 3. Neon NxT 重悬基因组编辑缓冲液在不同细胞类型和靶标的 CRISPR-Cas9 基因组编辑实验中的表现。靶标位点包括 Jurkat 和 K562 细胞的 ACTN、活化原代 T 细胞的 TRAC、HSC 的 B2M 和原代 NK 细胞的 AAVS1。细胞在 10 µL 或 100 µL 反应中进行电穿孔。(A) GFP 供体 DNA 敲入效率报告为 GFP 阳性细胞的百分比。(B) GFP 供体 DNA 敲入后的细胞活力。(C) 敲除效率报告为与未处理对照相比特定靶标位点的减少百分比。对于原代 NK 细胞，通过基因组切割检测 (GCD) 测定确定的插入/缺失效率 (%) 可作为敲除效率的指标。(D) 敲除细胞的电穿孔后活力。
开发含有修饰二甲双胍的转染凝胶：治疗II型糖尿病（T2DM）的更有效方法
Luiza Catarina Percilio Barros Graduate in Pharmacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil E-mail: luizacatarina10@gmail.com Beneyton Gonçalo Carvalho Graduacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, goncalobeneyton@gmail.com Flávia.com Ritchelle Coutinho Lucena Graduate in Pharmacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email: flaviaritchelled@gmail.com Rafael Portela Serra and Serra Graduate in Production Engineering Institution: State University of Maranhão Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email Borges Master's in Administration and Accounting机构：Fucape商学院地址：巴西MaranhãoS圣路利：luizf-borges@uol.com.brSaulojoséfigueiredoMendes Mendes Biotechnology Institation in Ceuma University of Ceuma University：SãoLuís：Maranhhão，Maranhhão，Brazil emailse net net： of Neto of doctor of doctor of doctorate Pharmaceutical Sciences Institution: University of Sao Paulo (USP) Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email: lidiogneto@gmail.com Lully Gabrielly Silva Alves Master's in Biosciences Applied to Health Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil E-mail: lully021481@ceuma.comLuiza Catarina Percilio Barros Graduate in Pharmacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil E-mail: luizacatarina10@gmail.com Beneyton Gonçalo Carvalho Graduacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, goncalobeneyton@gmail.com Flávia.com Ritchelle Coutinho Lucena Graduate in Pharmacy Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email: flaviaritchelled@gmail.com Rafael Portela Serra and Serra Graduate in Production Engineering Institution: State University of Maranhão Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email Borges Master's in Administration and Accounting机构：Fucape商学院地址：巴西MaranhãoS圣路利：luizf-borges@uol.com.brSaulojoséfigueiredoMendes Mendes Biotechnology Institation in Ceuma University of Ceuma University：SãoLuís：Maranhhão，Maranhhão，Brazil emailse net net： of Neto of doctor of doctor of doctorate Pharmaceutical Sciences Institution: University of Sao Paulo (USP) Address: São Luís, Maranhão, Brazil Email: lidiogneto@gmail.com Lully Gabrielly Silva Alves Master's in Biosciences Applied to Health Institution: Ceuma University Address: São Luís, Maranhão, Brazil E-mail: lully021481@ceuma.com