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World File Search System逆转录酶
疫苗和相关生物产品咨询委员会2月28日至2023年3月1日，会议简报文件-FDA：申请人Pfizer
AE adverse event ARI acute respiratory illness BLA Biologics License Application CDC Centers for Disease Control and Prevention CI confidence interval COPD chronic obstructive pulmonary disease COVID-19 coronavirus disease 2019 eDiary electronic diary ERD enhanced respiratory disease FDA US Food and Drug Administration FI-RSV formalin-inactivated RSV GBS Guillain-Barré Syndrome LB lower bound LRTI lower respiratory tract infection LRTI-RSV RSV-associated lower respiratory tract illness MedDRA Medical Dictionary for Regulatory Activities MFS Miller Fisher syndrome NAAT nucleic acid amplification test NDCMC newly diagnosed chronic medical condition PASS post-authorization safety study PCR polymerase chain reaction preF prefusion F protein PT MedDRA preferred term PVP pharmacovigilance plan RSV呼吸综合病毒RT-PCR逆转录酶聚合酶链反应反应SAE严重不良事件SIIV季节性灭活流感疫苗SLRTI-RSV严重的RSV相关的RSV相关的下呼吸道相关的下呼吸道疾病，
评估基于 CRISPR 的 Prime Editing 在类器官中对癌症建模和 CFTR 修复的作用
Prime editing 是最近报道的一种基因组编辑工具，它使用与逆转录酶融合的切口酶 cas9，直接在目标位点合成所需的编辑。在这里，我们探索了 prime editing 在人类类器官中的应用。常见的 TP53 突变可以在人类成体干细胞衍生的结肠类器官中正确建模，效率高达 25%，在肝细胞类器官中高达 97%。接下来，我们功能性地修复了囊性纤维化 CFTR-F508del 突变，并将 prime editing 与 CRISPR/Cas9 介导的同源定向修复和腺嘌呤碱基编辑在 CFTR-R785* 突变上进行了比较。对 prime editing 修复的类器官进行全基因组测序未发现可检测到的脱靶效应。尽管在目标位点遇到不同的编辑效率和不良突变，这些结果强调了主要编辑在建模致癌突变方面的广泛适用性，并展示了该技术的潜在临床应用，有待进一步优化。
Bi-PE：双向引发改善 CRISPR/Cas9 ...
由Cas9切口酶和逆转录酶组成的Prime Editor能够对小片段DNA进行精准的靶向编辑，包括所有12种碱基替换、插入和删除，而不需要双链断裂或供体模板。目前优化的Prime Editor策略（PE3）使用两条引导RNA来引导Prime Editor的性能。一条同时携带间隔区和模板序列的引导RNA（pegRNA）引导Prime Editor产生ssDNA断裂和随后的延伸，另一条引导RNA在互补链上产生切口。在这里，我们证明将切口sgRNA定位在pegRNA的模板序列附近可以促进靶向的大片段删除，并且将两条引导RNA改造成pegR-NA以实现双向Prime Editor（Bi-PE）进一步将效率提高了16倍，编辑产物的准确性提高了60倍。此外，我们还发现 Bi-PE 策略提高了多碱基同时转换的效率，但单碱基转换的效率不如 PE3。总之，Bi-PE 策略扩大了 Prime 编辑系统的编辑范围，提高了编辑效率和准确性，具有广泛的潜在应用价值。
人类免疫缺陷病毒1 ...
用高度活跃的抗逆转录病毒疗法（HAART）治疗可以通过破坏人类免疫缺陷病毒1（HIV-1）的复制周期中的关键步骤来延长患者的寿命。然而，由于HIV-1患者经过了长时间的治疗，耐药性正在成为全球一个主要问题。自1987年Zidovudine批准以来，根据其生物学功能和抗性谱，已将30多种抗逆转录病毒药物分为以下六个不同的类别：（1）核苷类模拟反向转移酶抑制剂； （2）非核苷逆转录酶抑制剂； （3）整合酶链转移酶抑制剂； （4）蛋白酶抑制剂； （5）融合抑制剂； （6）共受体拮抗剂。此外，最近已经开发了几种抗逆转录病毒药物，例如长期活性药物，人源化抗体并亲毒物代谢为患者体内的活性形式。尽管大量的抗逆转录病毒药物用于治疗HIV-1患者，但开发抗逆转录病毒药物的持续努力已经克服了药物抗药性，不良反应和以前药物在某种程度上观察到的药物的依从性有限。此外，应加强针对潜在HIV-1储藏药的药物的研究，因为这可能导致消除HIV-1。
CRISPR/Cas9 介导的癌细胞 TERT 破坏
摘要：哺乳动物端粒长度主要受端粒酶调控，端粒酶是一种由逆转录酶（TERT）和RNA亚基（TERC）组成的核糖核蛋白。TERC在所有细胞中均有组成性表达，而TERT表达则在时间和空间上受到调控，因此在大多数成年体细胞中，TERT处于失活状态，端粒酶活性无法检测到。大多数肿瘤细胞激活TERT作为阻止进行性端粒磨损的机制，以实现增殖永生。因此，失活TERT被认为是一种有前途的癌症治疗方法。在这里，我们应用CRISPR / Cas9基因编辑系统靶向癌细胞中的TERT基因。我们报告称，TERT的破坏严重损害了癌细胞在体外和体内的存活率。 TERT 在肿瘤细胞中的单倍体不足足以导致体外端粒磨损和生长迟缓。在体内，TERT 单倍体不足的肿瘤细胞在移植到裸鼠后未能形成异种移植物。我们的工作表明，基因编辑介导的 TERT 敲除是治疗癌症的潜在治疗选择。
神经肿瘤学
ATRX-在基因表达调节BRAF V600E中起关键作用 - 在高级神经胶质瘤中很少发现。在小儿种群TERT - 端粒酶逆转录酶中常见；突变时，允许无限的增殖激活；预后/存活率不佳所指出的EGFR - 表皮生长因子受体；在许多癌症中发现与预后不良有关的高EGFR表达 - 一种细胞中的蛋白质，当细胞准备分裂时会增加，而当过表达1p / 19q时，可能会预测预后不良 - 在寡头胶状胶质瘤中可见骨骼。与对化学疗法的更好反应和改善的生存IDH - 异位酸盐脱氢酶 - 阳性与低级肿瘤一致； Associated with a more favorable prognosis TP53 - plays a role in apoptosis and suppresses the cell cycle Involved in triggering the development and spread of glioblastoma MGMT - O6-methylguanine methyltransferase - involved in repairing DNA damage in cancer cells Tumor Mutational Burden TMB – refers to the total amount of cancer tissue in the body found in <3% of glioblastoma patients Microsatellite Instability – MSI-由MMR系统中的缺陷引起的，负责校正DNA复制过程中发生的不匹配。
通过恢复 GFP 活性来优化水稻、花生、鹰嘴豆和豇豆原生质体中的 Prime Editing
摘要：植物基因组的精确编辑一直是功能基因组研究和作物育种的迫切需要。Prime 编辑是一种新开发的基于 CRISPR-Cas9 的精确编辑技术，它使用工程逆转录酶 (RT)、催化受损的 Cas9 内切酶 (nCas9) 和 Prime 编辑向导 RNA (pegRNA)。此外，Prime 编辑比碱基编辑具有更广泛的编辑类型，可以产生几乎所有类型的编辑。虽然 Prime 编辑最早是在人类细胞中建立的，但它最近才被应用于植物。作为一种相对较新的技术，需要进行优化以提高不同作物的编辑效率。在本研究中，我们成功地编辑了水稻、花生、鹰嘴豆和豇豆原生质体中的突变体 GFP。在水稻中，双 pegRNA 的编辑效率比单 pegRNA 载体高出 16 倍。用双 pegRNA 载体转化花生、鹰嘴豆和豇豆后，也获得了编辑突变的 GFP 原生质体，尽管编辑效率比水稻低得多，范围从 0.2% 到 0.5%。这些初步结果有望加快在豆科植物育种计划中应用主要编辑，以加速作物改良。
基因组DNA和cDNA库
基因组库：基因组库也称为克隆银行或基因库。它是来自单个生物体的DNA的集合，尽管不一定一定包含其整个基因组DNA序列。来自感兴趣的源生物的DNA分为多个片段，并包装在克隆载体中，使每个片段都带有一部分。由于以下原因，可以将矢量DNA插入由λ噬菌体载体而不是质粒矢量制成的宿主生物。整个人类基因组的长度约为3 x 109 bp，而质粒或λ噬菌体载体可能带有多达20 kb的碎片。这将需要1.5 x 105重组质粒或λ噬菌体。将大肠杆菌菌落镀在3英寸的培养皿上时，允许单个菌落隔离的最大数量约为每盘菌落。因此，构建人类基因组文库需要至少700种培养皿。相比之下，可以在典型的培养皿上筛选多达5 x104λ噬菌体鼠疫。这仅需要30培养皿来构建人类基因组文库。λ噬菌体载体的另一个优点是其转化效率比质粒载体高约1000倍。互补DNA（cDNA）：cDNA是mRNA的逆转录酶产物，代表mRNA分离时所有转录基因的编码序列
DNA-DNA滑动摩擦和非平衡动力学在病毒基因组喷射和包装中的作用使用RNA
β-Mercaptoethanol PanReac-AppliChem A4338,0100 Sodium chloride (NaCl) PanReac-AppliChem 131659.1211 Tryptone Condalab 1612 Yeast Extract Condalab 1702 Bacteriological Agar Condalab 1800 Agarose D1 Medium EEO Condalab 8019 Liquid nitrogen n/a n/a Critical commercial assays NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix New England Biolabs E2621S Phusion TM High-fidelity DNA polymerase Thermo Fisher Scientific F530S MluI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0561 BsaIHF®v2 (20 U/µL) New England Biolabs R3733S DNA Clean & Concentrator TM -5 Zymo研究D4004Nucleospin®质粒DNA纯化机构 - 纳格尔740588.250 Ribolock RNase抑制剂（40 u/μl）Thermo Fisher Scientific EO0381恢复TM逆转录（TM）逆转录酶Thero Fisher Fisher Fisher Scientific EP0441 Therus prolainsir prolapers themophirs dna Polymsisriast dna Polymsiss dna Prolymasse：003 3.003.003 3.003 3.003 3.003 3.003 3.003 3.003; 003 3.003 3.003 Nicotiana Benthamiana cas9（Bernabé-ortts等，2019）N/A寡核苷酸D2409 atttatattattAttCataCaatCaaAcc
超越艾滋病毒/艾滋病：人类逆转录病毒学研究的新方向
人类逆转录病毒学是病毒学的一个分支，主要研究感染人类的逆转录病毒，其中最突出的代表是艾滋病毒/艾滋病大流行。自 20 世纪 80 年代发现人类免疫缺陷病毒 (HIV) 以来，人们一直致力于广泛研究，以了解 HIV、其感染机制以及治疗和预防策略。多年来，抗逆转录病毒疗法的发展已将 HIV 从死刑转变为可控制的慢性病。然而，随着科学界在抗击 HIV 方面取得进展，逆转录病毒学研究已扩展到研究其他人类逆转录病毒、发现新的治疗方法，并探索有关逆转录病毒生物学及其在人类疾病中的作用的更广泛问题。本文探讨了人类逆转录病毒学研究的新方向，重点关注新出现的逆转录病毒感染、前沿科学进展以及逆转录病毒相关疾病和治疗的潜在未来前景。逆转录病毒是一种 RNA 病毒家族，它们使用逆转录酶通过 DNA 中间体进行复制。尽管 HIV 因其对公共卫生的重大影响而长期主导着逆转录病毒研究，但其他人类逆转录病毒正成为科学界越来越感兴趣的领域 [1-3]。