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利用 CRISPR-Cas13a 进行噬菌体基因组工程
巨型噬菌体（例如铜绿假单胞菌 Ф KZ）具有作为抗菌剂和揭示基本噬菌体生物学模型的潜力。由于蛋白质“噬菌体核”结构可防止 DNA 靶向 CRISPR-Cas 工具的攻击，目前这两种研究都因缺乏基因工程工具而受到限制。为了为 DNA 巨型噬菌体提供反向遗传学工具，我们将同源重组与 RNA 靶向 CRISPR-Cas13a 酶相结合，并使用抗 CRISPR 基因 (acrVIA1) 作为可选择标记。我们表明，该过程可以插入外来基因、删除基因并向 Ф KZ 基因组添加荧光标签。内源性 gp93 的荧光标记显示它会随噬菌体 DNA 一起排出，而微管蛋白样蛋白 PhuZ 的缺失令人惊讶地对噬菌体爆发大小的影响很小。还成功编辑了另外两种能够抵抗 DNA 靶向 CRISPR-Cas 系统的噬菌体。RNA 靶向 Cas13a 有望成为难治性噬菌体的通用基因编辑工具，从而能够系统地研究功能未知的噬菌体基因。
spycas9的核仁定位会影响其稳定性，并干扰哺乳动物细胞中宿主蛋白的翻译
巨型噬菌体（例如铜绿假单胞菌）具有抗菌剂的潜力，也是揭示基本噬菌体生物学的模型。目前，由于蛋白质的“噬菌体核”结构，这两种追求都受到缺乏基因工程工具的限制，该结构可保护DNA靶向DNA靶向CRISPR-CAS工具。为了提供用于DNA巨型噬菌体的逆转苯二酚工具，我们将同源重组与靶向RNA的CRISPR-CAS13A酶相结合，并使用了抗Crispr基因（ACRVIA1）作为可选标记。我们表明，此过程可以插入外源基因，删除基因并为μkz基因组添加荧光标签。内源性GP93的荧光标记表明，它是用噬菌体DNA弹出的，而小管蛋白样蛋白phuz的缺失令人惊讶地对噬菌体爆发尺寸产生了适中的影响。还实现了抗DNA靶向CRISPR-CAS系统的另外两个噬菌体的编辑。靶向RNA CAS13A具有成为一种通用遗传编辑工具的巨大前景，可以实现对未知功能的噬菌体基因的系统研究。
广谱 CRISPR-Cas13a 可实现高效的噬菌体基因组编辑
CRISPR-Cas13 蛋白是 RNA 引导的 RNA 核酸酶，通过与互补的靶噬菌体转录本结合，然后进行一般的非特异性 RNA 降解，来防御入侵的 RNA 和 DNA 噬菌体。在这里，我们分析了 Leptotrichia buccalis 的 LbuCas13a 的防御能力，发现它具有强大的抗病毒活性，不受靶噬菌体基因的必要性、基因表达时间或靶序列位置的影响。此外，我们发现 LbuCas13a 的抗病毒活性对各种噬菌体具有广泛效果，方法是将 LbuCas13a 与来自不同系统发育群的九种大肠杆菌噬菌体进行对抗。利用 LbuCas13a 靶向的多功能性和效力，我们将 LbuCas13a 应用于广谱噬菌体编辑。使用两步噬菌体编辑和富集方法，我们在三种不同的噬菌体中实现了七次无标记基因组编辑，效率高达 100%，包括多基因删除和替换单个密码子等编辑。Cas13a 可用作编辑地球上最丰富、最多样化的生物实体的通用工具。
西雅图 SDCI 提示 #103a - 场地规划指南
绘制平面图。获得所有信息后，绘制平面图应该相对容易。首先要做的是确定所需纸张的大小和图纸的比例。“比例”一词在建筑和工程行业中用于表示各种事物。在我们的例子中，“图纸比例”或“图纸比例”表示平面图上的英寸数等于实际房产上的给定长度。因此，如果图纸的比例为 1/8" = 1'-0"，平面图上的一英寸等于房产上的 8 英尺。如果比例为 1/8" = 1'-0"，则 50' x 100' 的地块将在场地平面图中显示为 6-1/4" x 12-1/2" 的矩形。
2022 年 2 月 11 日 设计：max17523a_evkit_a 变体：dnp ...
物品编号 参考编号 DNI/DNP 数量 制造商 零件编号 制造商值 1 C1、C2 - 2 TMK107B710MURATA;TA 1UF 2 C3 - 1 C1608X5R1H TDK 0.47UF 3 C4 - 1 C1206C105K5KEMET;MUR 1UF 4 C7 - 1 EEU-EB1H33 PANASONIC 330UF 5 D1 - 1 SM6T36CA ST MICROELE36V 6 D2 - 1 STPS1L60A ST MICROELESTPS1L60A 7 D3 - 1 B160-13-F DIODES INCOB160-13-F 8 J1 - 1 61729-0010BFCI CONNECT61729-0010B 9 J2，J3 - 2 1729018 菲尼克斯公司 1729018 10 JU1 - 1 PBC04DAAN SULLINS ELECPBC04DAAN 11 JU3-JU5，JU8- 6 22-28-4023 MOLEX 22-28-4023 12 JU6，JU12，JU- 4 22-28-4033 MOLEX 22-28-4033 13 LED1 - 1 APT3216SGCKINGBRIGHT APT3216SGC 14 R1 - 1 CRCW08051KVISHAY DALE1K 15 R2 - 1 CRCW080510VISHAY；ROH 10K 16 R6 - 1 CRCW080540VISHAY DALE40.2K 17 R7 - 1 CRCW080512VISHAY DALE12.1K 18 R8 - 1 CRCW08056KVISHAY DALE6.2K 19 R9，R11 - 2 CRCW08052MVISHAY DALE2.2M 20 R13，R14，R1 - 3 CRCW080510VISHAY DALE100K 21 R15 - 1 CR0805-10WVENKEL LTD. 4.7K 22 R16 - 1 3296W-1-503BOURNS 50K 23 SU1、SU3-SU- 11 S1100-B；SX1 KYCON；KYCO SX1100-B 24 TP1 - 1 5002 梯形校正 不适用 25 TP2、TP4、TP5- 4 5001 梯形校正 不适用 26 TP3、TP6、TP8- 3 5000 梯形校正 不适用 27 TP9 - 1 5119 梯形校正 不适用 28 TP10 - 1 5116 梯形校正 不适用 29 TP11 - 1 5118 梯形校正 不适用 30 U1 - 1 MAX17523AAANALOG DEVMAX17523AA 31 PCB - 1 MAX17523A MAXIM PCB 32 C8 DNP 0 EEU-EB1H33 PANASONIC 330UF 33 R10，R12 DNP 0 CRCW08051KVISHAY DALE1.47K 总计 59
利用 CRISPR-Cas13a 进行 RNA 靶向促进噬菌体基因组工程
（未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2022 年 2 月 15 日发布。；https://doi.org/10.1101/2022.02.14.480438 doi：bioRxiv preprint
在乳腺癌细胞中雌激素受体靶向疗法中miR-33a表达的体外研究 供应链协作对... 的调节作用 长大后应该是什么？ Lewis Mattin博士讲师... jsdewes-基于自然通风的夏季峰值条件下预测热舒适度的计算方法 印度尼西亚的能源转变：依赖性，补贴和可再生能源
摘要：（1）背景：脂肪酸合成的增加导致乳腺癌的侵略性表型和使治疗剂的效率。在脂质生物合成途径上作为miR-33a的调节microRNA（miRNA）具有阐明确切机制的潜力。（2）方法：我们确定了MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞暴露于雌激素受体（ER）激活剂（Estradiol-17β，E2）或抗雌激素（ICI 182,780，在非cy毒性浓度下）的miR-33a表达水平。我们通过免疫印迹将细胞中的miR-33a表达水平与与细胞脂质生物合成相关的途径相关。（3）结果：miR-33a模拟治疗导致MCF-7细胞中脂肪酸合酶（FASN）的显着下调，而在MDA-MB-231细胞中则没有在雌激素-17β（E2）或Fulvesterant（Fulvertant（Ful）的情况下）。与miR-33a抑制剂效应相反，miR-33a与E2或FUL的MIMIC共转染导致MCF-7细胞中AMP激活的蛋白激酶α（AMPKα）活性减少。E2不管miR-33a细胞水平如何，MDA-MB-231细胞中的FASN水平都会增加。 miR-33a抑制剂共处理抑制了MDA-MB-231细胞中E2介导的AMPKα活性。 （4）结论：miR-33a的细胞表达水平对于理解包括细胞能量传感器（例如AMPKα激活状态）的差异反应至关重要。E2不管miR-33a细胞水平如何，MDA-MB-231细胞中的FASN水平都会增加。miR-33a抑制剂共处理抑制了MDA-MB-231细胞中E2介导的AMPKα活性。（4）结论：miR-33a的细胞表达水平对于理解包括细胞能量传感器（例如AMPKα激活状态）的差异反应至关重要。
通过靶向药物再利用鉴定出 SARS-CoV-2 3a 通道阻断剂
摘要：COVID-19 大流行的病原体是 SARS-CoV-2。作为冠状病毒科的一员，这种包膜病原体有几种膜蛋白，其中两种，E 和 3a，被认为具有离子通道功能。为了增加我们的治疗选择，同时提供新的研究工具，我们试图通过靶向药物再利用来抑制 3a 通道。为此，我们使用三种基于细菌的检测方法，筛选了 2839 种获准供人类使用的药物库，并确定了以下潜在的通道阻滞剂：卷曲霉素、喷他脒、壮观霉素、春雷霉素、普乐沙福、氟马替尼、利特罗尼布、达拉帕地、氟尿苷和氟达拉滨。现在，我们已准备好在详细的电生理研究中检查这些化合物的活性及其在采取适当生物安全措施的情况下对整个病毒的影响。