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巨型噬菌体(例如铜绿假单胞菌)具有抗菌剂的潜力,也是揭示基本噬菌体生物学的模型。目前,由于蛋白质的“噬菌体核”结构,这两种追求都受到缺乏基因工程工具的限制,该结构可保护DNA靶向DNA靶向CRISPR-CAS工具。为了提供用于DNA巨型噬菌体的逆转苯二酚工具,我们将同源重组与靶向RNA的CRISPR-CAS13A酶相结合,并使用了抗Crispr基因(ACRVIA1)作为可选标记。我们表明,此过程可以插入外源基因,删除基因并为μkz基因组添加荧光标签。内源性GP93的荧光标记表明,它是用噬菌体DNA弹出的,而小管蛋白样蛋白phuz的缺失令人惊讶地对噬菌体爆发尺寸产生了适中的影响。还实现了抗DNA靶向CRISPR-CAS系统的另外两个噬菌体的编辑。靶向RNA CAS13A具有成为一种通用遗传编辑工具的巨大前景,可以实现对未知功能的噬菌体基因的系统研究。

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