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AAV8-hUGT1A1 与雷帕霉素联合治疗新生儿感染的疗效...
一项使用腺相关病毒血清型 8 (AAV8)-人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 1A1 (h UGT1A1) 治疗遗传性严重未结合高胆红素血症 (Crigler-Najjar 综合征) 的临床试验正在进行中，但临床前数据表明，由于在生长中的肝脏中肝细胞增殖时转基因表达丧失，该疗法在儿童中的长期疗效不佳。本研究旨在确定在相关动物模型中在什么年龄可以获得长期疗效，以及免疫调节是否允许使用相同的 AAV 载体进行重复治疗。新生、哺乳期和幼年 Ugt1a1 缺乏大鼠接受了临床相关剂量的 AAV8-h UGT1A1 ，并监测血清胆红素水平和血清中的抗 AAV8 中和抗体 (NAbs)。使用雷帕霉素方案研究了预防对载体的免疫反应的可能性，该方案从载体给药前 2 天开始，到给药后 21 天结束，每天进行腹膜内 (ip) 注射。在出生后第 1 天 (P1) 或 P14 接受治疗的大鼠中，12 周后校正 (部分) 消失，而在 P28 注射的大鼠中校正保持稳定。将初始载体给药与免疫抑制方案相结合可防止雌性大鼠诱导 NAbs，从而至少可以部分有效地进行再次给药。再次注射后无法防止 NAbs 的诱导，这表明该策略对于先前存在的抗 AAV NAbs 水平较低的患者无效。
电脉冲暴露减少了转导HEPG2细胞所需的AAV8剂量
我们证明，在存在增强的绿色荧光蛋白（EGFP）表达腺体相关病毒（AAV8）载体的情况下，将电场脉冲在体外施加到肝细胞，使给定的传输水平与HISPATOCYCYP相比，将腺相关的病毒量（AAV8）降低了50-折叠式的电气量不超过50-折叠量。 接触。我们在标准井板中的8个暴露条件下进行了48个实验观测。电脉冲暴露涉及具有375 V/ cm场强度的单个80-MS脉冲。我们的研究表明，电脉冲暴露会导致细胞中EGFP的表达增强，这表明转导效率提高。如果成功地转换为体内环境，在我们的研究中观察到的增强转导将是一种有希望的迹象，证明了AAV载体所需剂量的潜在减少。对电场脉冲对体外AAV转导的影响是重要的前一步。
正在进行的国际阶段I/II ...
mngie是一种罕见的遗传疾病，是由胸苷磷酸化酶（TYMP）基因1中的突变引起的。这会导致核苷的积累，线粒体损伤以及进行性胃肠道和神经功能障碍，导致40岁之前死亡。没有既定的治疗方法。肝移植恢复核苷水平，但与并发症有关。腺相关病毒（AAV）基因疗法在MNGIE动物模型中成功，并且可以提供有吸引力的治疗方法。尽管如此，它尚未在人类中进行测试。
AAV8 衍生的 CRISPR 对乙肝病毒的抑制... - NET
慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 感染的治愈性治疗仍是一个遥远的目标，HBV 复制过程中稳定的共价闭合环状 DNA (cccDNA) 的持续存在是目前批准用于治疗 HBV 的药物难以突破的关键障碍。由于基因组编辑的准确性、效率和成本效益，CRISPR/Cas 技术被广泛应用于基因治疗和抗病毒策略。虽然 CRISPR/Cas 可能清除 cccDNA，但确保其安全性是应用的必要条件。在我们的研究中，我们分析了几种启动子的肝脏特异性，并构建了 CRISPR/金黄色葡萄球菌 Cas9 (SaCas9) 系统结合肝嗜性 AAV8（其中 AAV 指腺相关病毒）的候选启动子来验证对抗 HBV 的功效。结果显示，将原始启动子替换为肝脏特异性启动子的重建 CRISPR/SaCas9 系统在体内和体外仍然可以抑制 HBV 复制。 3种功能性向导RNA（gRNA）T 2 、T 3 和T 6 针对不同HBV基因型的保守区域，在不同肝脏特异性启动子的作用下均表现出较好的抗HBV效果，且3种gRNA对A、B、C基因型HBV的复制均有不同程度的抑制作用。在EnhII-Pa1AT启动子和AAV8作用下，SaCas9在其他器官或组织中的表达较肝脏进一步降低。本研究结果有助于确保CRISPR/Cas9系统的作用局限于肝脏，从而降低因非特异性靶向其他器官而产生不良有害作用的可能性，为肝脏的临床应用提供参考。