ABE 88. 农业与生物系统动力工程 3 ETHICS 1. 日常生活中的伦理与道德推理 3 GE. 选修课 3 ARTS 1. 艺术中的批判性视角 3 ENG 10. 科学论文写作 3 STS 1. 科学、技术与社会 3 *** 选修课 3 **** 专业课程 3 **** 专业课程 3 ABE 199. 本科生研讨会 1 ABE 200. 本科生论文 ABE 200. 本科生论文 /ABE 200b. /创新工程 /ABE 200b. /创新工程 /ABE 200c. /工程行业研究 3 /ABE 200c. /工程行业研究 3 21 19
治疗方法很好,但是治疗的输送方法在临床上并不可行。接受HSC治疗的受体小鼠必须接受致命剂量的γ辐射,以消除大量的骨髓(其中包含绝大多数造血干细胞,HSC),从而带来了重大的安全问题。可能更希望寻求方法,而无需破坏骨髓中HSC的原始菌落。一种方法是制定腺嘌呤碱基编辑器(ADE),并通过静脉内途径将其传递到骨髓中,以实现体内编辑。图1显示了有关治疗小鼠的一些统计数据,包括β球蛋白的百分比,细胞形态等。可以清楚地看出,经过治疗的小鼠的细胞已恢复正常的形态,证明了这种治疗的有效性。
4.5 将人工智能问答创作付诸实践…………………………………………………….24 4.6 操作方法……………………………………………………………………………………24 5 结果与分析 ............................................................................................................................. 26
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可,根据 提供(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者,此版本于 2020 年 5 月 21 日发布。;https://doi.org/10.1101/2020.05.20.103614 doi:bioRxiv 预印本
摘要背景:利用最近开发的 tRNA 腺苷脱氨酶 (TadA8e 和 TadA9) 改造的高活性腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 表现出强大的碱基编辑活性,但引发了人们对脱靶效应的担忧。结果:在本研究中,我们对 ABE8e 和 ABE9 诱导的水稻 DNA 和 RNA 突变进行了全面评估。对用四种 ABE(包括 SpCas9n-TadA8e、SpCas9n-TadA9、SpCas9n-NG-TadA8e 和 SpCas9n-NG-TadA9)转化的植物进行全基因组测序分析表明,含有 TadA9 的 ABE 导致更多数量的脱靶 A 到 G (A>G) 单核苷酸变体 (SNV),而含有 CRISPR/SpCas9n-NG 的 ABE 导致水稻基因组中脱靶 SNV 总数更高。对携带 ABE 的 T-DNA 的分析表明,在 T-DNA 整合到植物基因组之前和/或之后可以引入靶向突变,在 ABE 整合到基因组之后会形成更多的脱靶 A>G SNV。此外,我们在 ABE 表达高的植物中检测到脱靶 A>G RNA 突变,但在 ABE 表达低的植物中未检测到。脱靶 A>G RNA 突变倾向于聚集,而脱靶 A>G DNA 突变很少聚集。结论:我们的研究结果表明 Cas 蛋白、TadA 变体、ABE 的时间表达和 ABE 的表达水平对水稻中的 ABE 特异性有影响,这为了解 ABE 的特异性提供了见解,并提出了除改造 TadA 变体之外增加 ABE 特异性的其他方法。
核糖核蛋白 (RNP) 复合物介导的碱基编辑与质粒或病毒载体介导的基因编辑相比,由于其脱靶效应减少,预计会带来极大益处,尤其是在治疗应用中。然而,在细菌系统中生产产量充足、纯度高的重组胞嘧啶碱基编辑器 (CBE) 或腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 具有挑战性。在这里,我们从人类细胞表达系统中获得了高度纯化的 CBE/ABE 蛋白,并表明与质粒编码的 CBE/ABE 相比,CBE/ABE RNP 表现出不同的编辑模式(即多个碱基到单个碱基的转化率更低),这主要是因为 RNP 在细胞中的寿命有限。此外,我们发现与质粒编码的 ABE 相比,ABE RNP 在 DNA 和 RNA 中的脱靶效应都大大降低。我们最终将 NG PAM 靶向 ABE RNPs 应用于视网膜变性 12 (rd12) 模型小鼠的体内基因校正。
核糖核蛋白(RNP)复合物介导的碱基编辑预计将非常有益,因为与质粒或病毒载体介导的基因编辑相比,其具有脱靶效应,尤其是在治疗应用中。但是,在细菌系统中产生丰富的产量和高纯度的重组胞嘧啶基础编辑器(CBE)或腺嘌呤碱基编辑器(ABES)的生产具有挑战性。在这里,我们从人类细胞表达系统中获得了高度纯化的CBE/ABE蛋白,并且表明CBE/ABE RNP表现出不同的编辑模式(即,与质粒编码的CBE/ABE相比,CBE/ABE的转化率较小(即,多个碱基与单个碱基的转化率较小),主要是导致细胞中RNP的寿命有限的原因。此外,我们发现与质粒编码的ABE相比,ABE RNP的DNA和RNA的脱靶效应大大降低。我们最终将NG PAM – tarbetable -abe RNP应用于视网膜变性12(RD12)模型小鼠中的体内基因校正。
2022-23 年 ABE 高级教师研究员设计的项目是与安进生物技术体验 (ABE) 保持一致的课程和材料的汇编,旨在帮助学生进一步学习生物技术。这些项目是在为期 1 年的研究员计划期间在每位研究员感兴趣的领域创建的。每个项目都是独一无二的,可以根据您个人课堂的需求进行调整。提供目标和目标以及预期结果。项目可以与您当前的 ABE 课程结合使用,也可以作为扩展。作为研究员计划的条件,其他教师可以免费下载和使用这些课堂资源。ABE 项目办公室不会编辑或修改这些项目(内容、清晰度或语言),但确保在适当的情况下明确包含安全协议除外。我们感谢 ABE 高级教师研究员与 ABE 社区分享他们的工作。如果您对任何项目组件有疑问,请通过 ABEInfo@edc.org 与我们联系,我们将很乐意将您与作者联系起来并提供所需的任何帮助。