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使用细胞FAD自动荧光作为无标记的细胞属性，用于产生嵌合抗原受体-T细胞
嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法已成为治疗血液恶性肿瘤的一种有吸引力的方法。但是，这种疗法的可访问性受到复杂制造工艺，有限的制造设施能力以及高技能劳动力的要求，以进行CAR-T细胞生产的手动步骤。为了最大程度地减少手动过程，CAR-T细胞制造场正在向封闭和自动化系统转移，包括分析工具，可提供对生产中细胞的间歇性监测的分析工具。因此，需要在封闭系统中密切监测CAR-T细胞的无标签技术。在这里，我们评估了配备了405nm紫罗兰色激光器的流式细胞仪的使用，用于研究T细胞中NADH和FAD自动荧光。我们的结果表明，NADH和FAD自动荧光的增加与T细胞激活标记，CD25的上调显着相关，并且在T细胞激活后的头三天，在消费培养基中的细胞外乳酸的增加。我们通过建立CAR-T细胞中FAD的平均荧光强度（MFI）的变化速率与使用G-Rex Biorx Biorextor的T细胞增殖速率之间的变化速率之间的关系来确定CAR-T细胞生产的终点的潜在用途。共同表明，自动荧光，尤其是FAD自动荧光，可以用作无标记的生物标志物（细胞属性），用于监测CAR-T细胞生产过程中T细胞激活和扩张。使用405nm可见光代替了遗传毒性紫外线波长来评估NADH和FAD自动荧光，为将自动荧光测量结果铺平了一种方式，以将自动荧光测量纳入封闭和自动化的系统中，以用于对CAR-T细胞制造的过程中的监测。
使用新型反义寡核苷酸 AZD8701 直接靶向 Treg 中的 FOXP3，以缓解癌症中的免疫抑制
摘要 背景 调节性 T 细胞 (Treg) 谱系由转录因子 FOXP3 定义，它控制免疫抑制基因表达谱。Treg 通常以高频率被招募到肿瘤微环境中，在那里它们可以抑制抗肿瘤免疫力。我们假设，通过系统递送的未配制的受限乙基修饰反义寡核苷酸对 FOXP3 进行药理学抑制可以调节 Treg 的活性并增强抗肿瘤免疫力，从而在癌症模型中并可能在人类中提供治疗益处。方法 我们已经确定了鼠 Foxp3 反义寡核苷酸 (ASO) 和临床候选人类 FOXP3 ASO AZD8701。在培养的 Treg 和小鼠同基因肿瘤模型中测试了 FOXP3 抑制剂对 Treg 功能和抗肿瘤免疫的药理学和生物学效应。实验由载体和非靶向对照 ASO 组以及使用多个独立的 FOXP3 ASO 进行控制。通过单因素或双向方差分析和多重比较来评估生物学效应的统计学意义。结果 AZD8701 在临床相关剂量下在人源化小鼠中表现出剂量依赖性地敲低原代 Treg 中的 FOXP3、降低抑制功能和有效下调靶标。替代鼠 FOXP3 ASO 可有效下调原代 Treg 中的 Foxp3 信使 RNA 和蛋白质水平，并在体外免疫抑制试验中降低 Treg 抑制功能。FOXP3 ASO 在体外和体内使 Treg 中的 FOXP3 水平降低 70% 以上，强烈调节 Treg 效应分子（例如 ICOS、CTLA-4、CD25 和 4-1BB），增强 CD8 + T 细胞活化并在同基因肿瘤模型中产生抗肿瘤活性。FOXP3 ASO 与免疫检查点阻断的结合进一步增强了抗肿瘤功效。结论 FOXP3 反义抑制剂提供了一种有前途的新型癌症免疫治疗方法。AZD8701 正在作为同类首创药物进行临床开发
引用Lugthart，G。（2018年3月27日）。造血干细胞移植后T和NK细胞免疫。取自https://hdl.handle.net/1
Love Al，Steen DM的Van，Van MM Loenen，Handway RS，Boer MD，Red Ro AH，Lugtart GJ，Van KC，Hiemstra PS，Hiemstra PS，犹太人I，Griffioen MD，Veelen PA，Veelen PA，Falkenburg JH，MH。PRAME特异性的Allo-HLA-Strict T细胞具有有效的反应性反应使用T-sell基因转移。Clin.Cancer Res。 2011; 17：5615-5625。 Lugthart G，Albon SJ，MG的奶酪，Meij P，湖泊AC，Amrolia PJ。 对称生成器 J.Mumunother。 2012; 35：42-5 Albon SJ，Mancao C，Gilmour K，Ship G，Rich I，Brewin J，Lugthart G，Wallace R，Amrolia PJ。 优化CD71 的方法 细胞疗法。 2013; 15：109-1 Rich I，Brewin J，Blugthart G，Albon SJ，Puls M，Amrolia PJ。 EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。 AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。Clin.Cancer Res。2011; 17：5615-5625。 Lugthart G，Albon SJ，MG的奶酪，Meij P，湖泊AC，Amrolia PJ。 对称生成器 J.Mumunother。 2012; 35：42-5 Albon SJ，Mancao C，Gilmour K，Ship G，Rich I，Brewin J，Lugthart G，Wallace R，Amrolia PJ。 优化CD71 的方法 细胞疗法。 2013; 15：109-1 Rich I，Brewin J，Blugthart G，Albon SJ，Puls M，Amrolia PJ。 EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。 AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。2011; 17：5615-5625。Lugthart G，Albon SJ，MG的奶酪，Meij P，湖泊AC，Amrolia PJ。对称生成器J.Mumunother。 2012; 35：42-5 Albon SJ，Mancao C，Gilmour K，Ship G，Rich I，Brewin J，Lugthart G，Wallace R，Amrolia PJ。 优化CD71 的方法 细胞疗法。 2013; 15：109-1 Rich I，Brewin J，Blugthart G，Albon SJ，Puls M，Amrolia PJ。 EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。 AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。J.Mumunother。2012; 35：42-5Albon SJ，Mancao C，Gilmour K，Ship G，Rich I，Brewin J，Lugthart G，Wallace R，Amrolia PJ。 优化CD71 的方法 细胞疗法。 2013; 15：109-1 Rich I，Brewin J，Blugthart G，Albon SJ，Puls M，Amrolia PJ。 EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。 AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。Albon SJ，Mancao C，Gilmour K，Ship G，Rich I，Brewin J，Lugthart G，Wallace R，Amrolia PJ。优化CD71细胞疗法。2013; 15：109-1Rich I，Brewin J，Blugthart G，Albon SJ，Puls M，Amrolia PJ。EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。 AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。EBV-规格的产生鼓膜对钙化抑制剂具有免疫适应性的抗性。AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3 lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。 他们将能够调和和调和长期股东： bio。 Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。 2015; 21：293-299。AM.J.Transplant 2013; 13：3244-3lugthart G，老热，MM的老家，CM，Holten MG，MH，Bredius RG，Van Tol MJ，Lankester AC。他们将能够调和和调和长期股东：bio。Lugthart G，Oomen MA，CM的Oomen，Ball LM，Brests D，WJ Cloud，Smiers FJ，FJ，Vermont CL，Bredius RG，Schilham MW，MW，Van To MJ，MJ，Lankester AC。2015; 21：293-299。2015; 21：293-299。Cidofovir对没有T细胞重构的干细胞移植受者中腺病毒血浆DNA水平的影响。biol.blood骨髓移植。Lugthart G，Van Ostaijen-Ten Dam MM，Van Tol MJ，Lankester AC，Schilham MW。CD56（DIM）CD16（ - ）NK细胞表型可以通过冷冻保存诱导。血液2015; 125：1842-1843。
头颈癌的免疫细胞地形
抽象背景人类和小鼠天然杀手（NK）细胞已显示出短期暴露于IL-12/15/18鸡尾酒或与某些肿瘤细胞系过夜的共培养后，会发展出记忆样功能。所产生的细胞保留了长达7天以及冷冻保存后的裂解能力，并且已证明记忆样的NK细胞（MLNK）可引起血液恶性肿瘤患者的完全缓解。尚未描述MLNK的单一表型，并且尚未完全表征由造成这些增强功能的短期细胞因子或肿瘤提示引起的生理变化。在这里，我们通过细胞因子和肿瘤启动产生了MLNK，以找到可以更好地定义NK细胞“记忆”的性质，并首次在体内定义了NK细胞“记忆”的性质。方法，我们从健康的供体中启动了具有细胞因子的健康供体（启动细胞因子诱导的记忆样（ICIML）-NK）和肿瘤启动（TPNK）的MLNK，并通过高维流式细胞仪，蛋白质量和代谢粒子分析进行了一夜。作为增强的细胞溶解功能的潜在机制，我们分析了MLNK与NK耐药肿瘤（Z-MOVI）结合的亲和力。我们从健康供体和癌症患者中产生了TPNK，以确定与单个肿瘤类型相互作用产生的MLNK是否可以增强裂解活性。最后，我们使用了复制 - 无能的肿瘤细胞系（Inkmune）来治疗髓样白血病患者，以增强体内NK细胞功能。结论NK细胞“记忆”是与对MHC介导的抑制的抗性相关的生理状态，结果来自健康供体的肿瘤引发的MLNK，癌症患者在体外对多个肿瘤细胞系的细胞毒性增加，类似于ICIML-NK细胞。多维细胞仪鉴定出具有记忆样特征的细胞子集的不同记忆样轮廓； CD57，CD69，CD25和ICAM1的上调。蛋白质组学分析鉴定出41种限于MLNK细胞的蛋白质，我们确定了候选分子的基础NK记忆，这可以解释MLNK如何克服抗性肿瘤的抑制作用。最后，在用Inkmune治疗的五名患有骨髓增生综合征或难治性急性髓样白血病患者中，三名对NK裂解功能和全身细胞因子的可测量增加了治疗。