是研究数字,维度,内容和分泌细胞器的定位的最常用和通用的方法之一是共聚焦显微镜分析。然而,可以在细胞中引起的分泌细胞器的数量,大小和形状中存在相当大的异质性。因此,需要分析大量细胞器以进行有效量化。正确评估这些参数需要一种自动,无偏的方法来处理和定量分析显微镜数据。在这里,我们描述了由Cell -Profiler软件运行的两个管道,称为OrganleleProfiler和OrganeLlecontentProfiler。这些管道线用于内皮菌落形成细胞(ECFC)的共聚焦图像,其中包含独特的分泌细胞器,称为Weibel-Palade体(WPB),以及ECFC和ECFC和人类胚胎肾脏293T(HEK293T)细胞的早期内体。结果表明,管道可以量化细胞计数,大小,细胞器计数,细胞器的大小,形状,与细胞和细胞的关系,以及在内皮和HEK293T细胞中与这些物体的距离。此外,使用管道来测量高尔基体破裂后WPB大小的减小,并在ECFC中触发CAMP介导的信号通路后量化WPB的核周聚类。此外,管道能够量化位于细胞器或细胞质中的二级信号,例如小的WPB GTPase RAB27A。使用斐济检查了细胞剖面测量值的有效性。确定,这些管道为多个细胞和细胞器类型的特性提供了强大的,高处理的定量工具。这些管道是免费的,可以在不同的细胞类型或细胞器上易于使用,并且易于编辑。
fbs 、细胞培养基、缓冲液(Hyclone)■stem细胞介质(Hyclone)■抗冻液、胰蛋白酶,hyrtryp(Hyclone)■HPL(Aventacell)■内毒素业界最低的细胞培养耗材(TPP)■LUNA II II fx7(logos)single(logos)single bioreactor(Getige) (Biosigma)■培养基分析仪(Nova)■Blueswan(蓝光)+塑胶吸管(CAPP)
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炎性症是在感测各种外源和内源性刺激的情况下形成的多蛋白平台,并触发了IL-1β和IL-18的释放以及凋亡细胞死亡。Intivogen提供了一系列细胞系,可研究NLRP1,NLRP3,NLRC4或caspase-4炎症体。可以使用荧光或在培养上清液中使用IL-1β和IL-18报告基细胞在原位监测这些炎症体的激活(请参阅第8页)。
•钉子4 1 x 2板围绕电池底部的托盘。•中心2 2 x 4板横跨每个钢盒电池的顶部。•使用聚带,在拉伸包裹之前水平将电池在顶部,中和底部将其束缚在一起。•在2 x 4板上添加2个垂直带。
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镰状细胞疾病(SCD)是一种严重的常染色体遗传遗传遗传疾病的红细胞,其特征是由异常血红蛋白的聚合引起的红细胞变形,这会导致红细胞变形和触发下游病理学变化。这些包括异常流变学,血管封闭,缺血性组织损伤和与溶血相关的内皮功能障碍。这些急性和慢性生理障碍有助于发病,器官功能障碍和生存率降低。造血细胞移植(HCT)来自HLA匹配或无关的供体或单倍性相关的供体或遗传修饰的自体造血祖细胞,以治愈或长期的疾病表现良好的方式进行。在与HLA相关的相关供体HCT之后,已经观察到了极好的结果。大多数SCD患者没有可用的HLA兄弟姐妹供体。越来越多地可以选择从无关的HLA匹配或相关的单倍捐赠者中进行HCT。自体造血祖细胞移植的初步结果是通过添加非助理基因或通过基因组编辑来增加胎儿血红蛋白表达的基因修饰。这些方法正在早期临床试验中评估。在患有SCD的患者中进行HCT时,必须仔细考虑患者和供体的选择,调节和移植物,宿主疾病治疗方案,以及HCT期间和之后的HCT评估和管理。社会人口统计学因素也可能影响对HCT的认识和获取。此外,HCT存在着严重的决策,在改善疾病表现的可能性与HCT的早期或晚期并发症之间进行了复杂的权衡。HCT的SCD表现需要仔细的多学科协作以及医生和知情患者和看护人之间的共同决策。
致谢:我们感谢 Ciernia 实验室和 Pavlidis 实验室成员在整个项目过程中的实验室会议上提供的周到反馈和建议。我们还要感谢 Wai Hang (Tom) Cheng,他的帮助对于学习如何在 Axioscan 幻灯片扫描仪上成像以及开始进行小胶质细胞形态分析至关重要;Nicholas Michelson,他的帮助对于在 ImageJ 中排除 MicrogliaMorphology 各种特征的代码故障非常有帮助;以及 Dylan Terstege,他在发布之前慷慨地提供了用于 FASTMAP 与 Allen Brain Atlas 对齐的材料。我们还要感谢 Brian MacVicar 博士与我们分享他实验室的 Cx3cr1-GFP 小鼠,我们将其用于 2xLPS 体内实验。我们非常感谢不列颠哥伦比亚大学的神经影像和神经计算中心以及健康与疾病研究集群中的动态脑回路提供的计算资源。