抽象的正叶病毒是节肢动物传播的单链RNA病毒,导致人类轻度至严重疾病,每年影响数百万的人,目前没有抗病毒药。该病毒属包括诸如tick传播脑炎病毒(TBEV),西尼罗河病毒(WNV)和Zika病毒(ZIKV)等病毒。正常非洲病毒具有自己的病毒蛋白,但是与其他病毒一样,它们也招募并利用几种细胞蛋白来实现其生命周期。尽管已经确定或表征了其中一些宿主因素,但其中大多数仍然不知道。在本文中,我使用了不同的工具来识别和表征与正常非病毒感染有关的新型蛋白质。了解细胞蛋白在病毒生命周期中的功能对于理解病毒的疾病机制和开发针对这些病毒的抗病毒药物很重要。在第一部分中,我们实施了蛋白质组学噬菌体显示(PROP -PD),以识别病毒和细胞蛋白之间的短线性基序(Slim)相互作用,并且该方法鉴定出多腺苷酸 - 结合蛋白1(PABP1)是许多RNA病毒的促病毒因子。在本文的第二部分中,我们通过执行抗坏血酸酯过氧化物酶(APEX)2屏幕来鉴定在TBEV NS4B附近发现的蛋白质,从而鉴定了参与TBEV感染的蛋白质。使用这种方法,我们确定了包含3(ACBD3)的酰基-COA结合域。通过修改内质网(ER)和Golgi之间的贩运,在TBEV和Langat病毒(LGTV)感染中影响病毒复制和组装的TBEV NS4B紧邻近距离发现。在论文的第三部分中,我们探讨了核孔蛋白(NUPS)在正叶病毒感染中的作用。nups是核孔复合物的基础,它是负责RNA和蛋白质在细胞核和细胞质之间运输的复合物。通过实施各种不同的分子生物学技术,我们确定NUP153和NUP98在病毒生命周期中至关重要。我们观察到,在正叶病毒感染期间,NUP153和NUP98在核中上调并从核区域募集到结合病毒RNA(VRNA)的胞质区域。我们发现NUP153调节病毒翻译,而NUP98对于病毒复制很重要,显示了该蛋白质家族在正佛病毒感染中的重要性和不同功能。此外,在本论文中,我们还评估了肽的使用来阻止这些特定的病毒宿主蛋白相互作用作为潜在的抗病毒药。我们表明,针对PABP1和NUP98的肽靶向和结合对几个正叶韦病毒是抗病毒活性的。在一起,本文中提出的发现使人们对病毒生命周期所需的特定宿主因素有了更好的了解。这些知识可用于新抗病毒药的发展。
结直肠癌(CRC)是全球与癌症相关死亡的主要原因。irinotecan被广泛用作治疗CRC的化学治疗药物。然而,在CRC中获得对伊立替康的抗性的机制仍然尚无定论。在本研究中,我们建立了一种新型的伊立替康结肠细胞系,以研究伊立替康抵抗的潜在机制,尤其是ABC转运蛋白的过表达。通过将伊立替康暴露于人类S1结肠癌细胞中,建立了耐虹膜耐药的S1-IR20细胞系。MTT细胞毒性测定法,以确定S1-IR20细胞的耐药性。与S1细胞相比,耐药细胞对伊立替康的耐药性约为47倍,对ABCG2底物的抗性。通过蛋白质印迹分析,与亲本S1细胞相比,S1-IR20细胞在蛋白质表达水平上显示出ABCG2的显着增加,而ABCB1或ABCC1在蛋白质表达水平上没有显着增加。免疫荧光测定法表明,过表达的ABCG2转运蛋白位于S1-IR20细胞的细胞膜上,这表明ABCG2转运蛋白的活性EF漏函数。通过逆转研究进一步证实了这一发现,抑制ABCG2的EF频率功能能够完全消除对伊立替康的耐药性以及S1-IR20细胞中的其他ABCG2底物。总而言之,我们的工作建立了CRC中伊立替康抗药性的体外模型,并建议ABCG2过表达是对伊立替康的耐药性的潜在机制之一。这种新型的抗性细胞系可能使未来的研究能够在体外克服耐药性并改善体内CRC治疗。
纳米多孔材料的纹理特性(例如孔径和连通性)的详细分析对于确定这些特性与气体储存,分离和催化过程的性能相关性至关重要。开发具有均匀,量身定制的孔结构的纳米多孔材料的进步,包括引入分层孔系统,为这些应用提供了巨大的潜力。在这种情况下,在理解受限流体的吸附和相行为方面取得了重大进展,因此在物理吸附特征中取得了进步。这可以使用高级高分辨率实验协议以及基于统计力学的先进方法,例如基于密度功能理论和分子模拟的方法,实现可靠的孔径,体积和网络连接分析。如果存在宏观孔,则吸附和汞孔隙法的组合可能是有用的。因此,讨论了了解汞入侵/挤出机制的一些重要进展。此外,还引入了一些有希望的互补技术,以表征浸入液相的多孔材料。
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5.2.1。现场测量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。23 5.2.2.抽样程序。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。30 5.2.3。实验室测量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。33 5.2.4.仪器。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。37 5.3.结果中的错误和不确定性。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。.42 5.3.1.计数统计 ....................。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。...42 5.3.2.其他不确定性来源 .................。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。42
图 5. 三元复合物形成的亚细胞定位 (A) BRD4 (红色) 仅定位于细胞核,而大多数 HA-KLHL20 (绿色) 位于细胞质中。(左) BRD4 (红色) 和 HA- KLHL20 (绿色) 通道的合并图像。(右) 与 DAPI 染色的合并图像。(B) Strep-KLHL20 和 HA -KLHL20 (绿色) 显示出相似的定位模式。(C) BTR2004 不会改变 BRD4 (红色) 亚细胞定位。DAPI 核染色为蓝色。(D) BTR2004 不会改变 KLHL20 (绿色) 亚细胞定位。DAPI 核染色为蓝色。(E) 使用共聚焦显微镜成像通过邻近连接分析 (PLA) 揭示 BTR2004 介导的三元复合物形成。 (F) 定量 PLA 信号(使用 Imaris 程序)显示三元复合物主要在细胞核中形成。 (G) Exportin 1 抑制剂 KPT276 不能阻止 BRD2 降解,表明核形成的三元复合物被核蛋白酶体降解。
有效管理海草栖息地需要有关海草状况和分布的详细信息。本文介绍了一项更大规模研究的第一步,该研究旨在评估波多黎各卡哈德穆埃托斯岛自然保护区内海草分布的长期变化。使用 WorldView-2 (WV-2) 图像和现场数据集对保护区内的海草床进行了高空间分辨率表征。WV-2 得出的海底反射率和水深测量数据用于进行基于对象的图像分析 (OBIA)。此分析的波段选择基于现场光谱水衰减测量。通过监督分类和上下文编辑对 OBIA 的结果多边形进行分类。使用 164 个采样点对图像进行了校准和验证。与传统的精度评估工具一起,创建了可靠性图,以提供评估地图精度的另一个指标。总体准确率为 96.59%,总海草准确率为 100%。海草床主要位于岛屿的西部和北部,主要由 Thalassia testudinum 和 Syringodium filiforme 组合组成。结果表明,光照可用性不是研究区域海草定植的限制因素,强波浪能可能是调节海草分布的重要因素。这张海草栖息地地图改进了之前的测绘工作,是该保护区的第一张高空间分辨率地图。事实证明,所使用的数据和方法对于在高度复杂的底栖环境中绘制海草栖息地地图非常有效。