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利用 CRISPR 干扰技术高效、快速地灭活核梭杆菌的基因
摘要 通过在具核梭杆菌中创建框内缺失突变来使基因失活非常耗时，并且大多数具核梭杆菌菌株在遗传上是难以处理的。为了解决这些问题，我们引入了一种基于核糖开关的可诱导 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 系统。该系统采用核酸酶失活的化脓性链球菌 Cas9 蛋白 (dCas9)，通过持续表达的单向导 RNA (sgRNA) 特异性地引导至目的基因。从机制上讲，这种 dCas9-sgRNA 复合物成为 RNA 聚合酶难以逾越的障碍，从而抑制了目标基因的转录。利用这个系统，我们首先研究了两个非必需基因 ftsX 和 radD，它们对于具核梭杆菌的胞质分裂和共聚集至关重要。添加诱导剂茶碱后，ftsX 抑制导致类似于染色体 ftsX 缺失的丝状细胞形成，而靶向 radD 则显著降低 RadD 蛋白水平，消除 RadD 介导的共聚集。随后将该系统扩展到探测必需基因 bamA 和 ftsZ，这两个基因对于外膜生物合成和细胞分裂至关重要。令人印象深刻的是，bamA 抑制破坏了膜完整性和细菌分离，阻碍了生长，而 ftsZ 靶向会在肉汤中产生细长的细胞，并且琼脂生长受到损害。对 F. nucleatum 临床菌株 CTI-2 和 Fusobacterium periodonticum 的进一步研究表明，靶向 tnaA 时吲哚合成减少。此外，沉默 F. periodonticum 中的 clpB 会降低 ClpB，从而增加热敏感性。总之，我们的 CRISPRi 系统简化了各种梭杆菌菌株的基因失活。
胸膜肌瘤由链球菌Intermedius和fusobacterium nucleatum引起：胸膜感染的独特实体
1挪威卑尔根Haukeland大学医院微生物学系； 2挪威卑尔根卑尔根大学临床科学系； 3挪威卑尔根Haukeland大学医院胸部医学系； 4挪威洛伦斯科格阿克胡斯大学医院肺部医学系； 5医学和实验室科学系，挪威奥斯陆奥斯陆大学临床医学研究院学院； 6挪威阿克什斯阿克胡斯大学医院的微生物和感染控制系； 7挪威Stavanger Stavanger大学医院肺部医学系； 8挪威Stavanger Stavanger大学医院微生物学系； 9挪威卑尔根Haraldsplass Deaconess医院医学系； 10挪威特隆德海姆医院圣奥拉夫医院胸科医学系； 11挪威特隆德海姆的Trondheim大学医院圣奥拉夫医院医学微生物学系； 12挪威Førde中央医院医学系； 13挪威FørdeFørde中央医院微生物学系； 14挪威卑尔根Haukeland University Hospital的颌面外科系；和15位卫生科学学院，挪威北极大学，挪威，挪威
通过对宿主来源的转移 RNA 片段进行化学修饰来靶向核梭杆菌
宿主粘膜屏障拥有一系列防御分子，以维持宿主-微生物体内平衡，例如抗菌肽和免疫球蛋白。除了这些已证实的防御分子外，我们最近还报道了人类口腔角质形成细胞与具核梭杆菌 (Fn) 之间的小 RNA (sRNA) 介导的相互作用，Fn 是一种口腔致病菌，在口腔外疾病中的影响越来越大。具体而言，在 Fn 感染后，口腔角质形成细胞会释放 Fn 靶向 tRNA 衍生的 sRNA (tsRNA)，这是一类具有基因调控功能的新兴非编码 sRNA。为了探索 tsRNA 的潜在抗菌活性，我们对 Fn 靶向 tsRNA 的核苷酸进行了化学修饰，并证明所得的 tsRNA 衍生物（称为 MOD-tsRNA）在纳摩尔浓度范围内无需任何运载工具即可对各种 Fn 型菌株和临床肿瘤分离株表现出生长抑制作用。相反，相同的 MOD-tsRNA 不会抑制其他代表性口腔细菌。进一步的机制研究揭示了 MOD-tsRNA 在抑制 Fn 中的核糖体靶向功能。总之，我们的工作提供了一种通过共同选择宿主衍生的细胞外 tsRNA 来靶向致病菌的工程方法。
分支可电离脂质可增强 mRNA 的稳定性、融合性和功能性传递
蛋白质替代疗法、基因组工程和基因重编程。[4,5] 值得注意的是，mRNA 疫苗已获批准用于应对 COVID-19 大流行，并且有助于显著降低由此产生的死亡率。[6,7] 尽管 mRNA 在进一步的药物应用方面具有巨大潜力，但由于其分子量大、多阴离子性质和固有的化学不稳定性，其细胞内递送仍然是一个挑战。脂质纳米颗粒 (LNP) 是可用于有效体内递送外源 mRNA 的最先进技术之一。它们通常由可电离脂质、胆固醇 (chol)、辅助脂质和聚乙二醇 (PEG) 脂质组成，它们负责抑制 mRNA 降解和穿过质膜进入细胞溶胶的运输。可电离脂质是大多数 LNP 的关键成分，因为它们可以通过静电相互作用封装 mRNA。在生理 pH 下，中性电荷可改善体内的药代动力学，而在酸性 pH 下，质子化脂质可促进与内体膜融合并将 mRNA 释放到细胞溶胶中。典型的可电离脂质的头部和尾部基团具有不同的作用。头部基团是带正电的部分，通常具有叔胺，叔胺有多种类型，例如烷基和环状胺。[8] 头部基团决定了 LNPs 的表观 pKa，从而调节其在体内的命运。相反，脂质尾部是疏水部分，负责颗粒的形成。不饱和尾部、[9] 可生物降解尾部、[10,11] 聚合物尾部、[12,13] 和支链尾部 [14,15]
核细菌核和口服微生物组的改变：从妊娠到SARS-COV-2感染
摘要。- 目的：人类与其自身的共生，共生和致病细菌的生态群落紧密地发展。在肠道微型群体之后，口腔的生物群是最大，最多样化的。它的重要性不仅反映在局部和全身性疾病中，而且在怀孕中也反映出它似乎会影响胎盘微生物组。材料和方法：这是对PubMed发表的有关梭杆菌核细菌及其对系统性和口腔健康的影响的文章的文献综述，Ad-Perse妊娠结局，口味感知及其对口腔鼻粘膜免疫的干扰。结果：在维持微生物的体内平衡的过程中，菌杆菌是口腔的机会性牙周病原体，在舌头生物膜的桥梁微生物中起着至关重要的作用，在维持味觉中的物种之间的平衡以及在Oral-Nasal-Nasal Mucsal mucsal mucsosal nununi-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nuni-nunimii既是舌头的微生物，又起着至关重要的作用。它也参与了风味感知及其在生命第一天儿童口腔微生物组中的检测，这可能是可能的生理作用。然而，营养不良可以通过局部和全身性结构确定其致病性，包括呼吸道感染的发病机理。结论：评估其可能与SARS-COV-2的可能相关性以及对口腔菌群的后果，既促进可能的广泛的预防措施，都有利于所有受试者，通过为患者而促进特定的患者，因此可以通过特定的患者来促进所有受试者，因此，特定于善于促进，因此，特定于善于良性，因此，超过了，但要促进善于良性，但要予以促进。口腔营养不良。