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双重缺失的疫苗病毒哥本哈根菌株针对恶性胸膜间皮瘤
恶性胸膜间皮瘤（MPM）是缺乏有效治疗的胸膜癌。使用溶瘤疫苗病毒（VV）的溶瘤免疫治疗可能代表一种治疗这种迹象的替代治疗方法。在这里，我们研究了VV百点激酶（TK） - 核糖核苷酸还原酶（RR） - /绿色荧光蛋白（GFP）的溶瘤活性。该病毒是哥本哈根菌株的VV，该VV由编码TK（J2R）和RR（I4L）的两个基因删除，并表达GFP。首先，我们在体外表明VV TK-RR-/GFP有效地感染并杀死了本研究中使用的22个人MPM细胞系。我们还表明，该病毒在所有八个测试的MPM细胞系中都复制，但是，从一个细胞系到另一个细胞系，在扩增水平上大约有10倍的差异。然后，我们研究了伴有腹膜腹膜人类MPM Tumors的非肥胖糖尿病（NOD）严重合并免疫（SCID）小鼠的VV TK-RR-/ GFP的治疗效率。与未经治疗的动物相比，VV TK-/GFP的一种腹膜内感染会导致肿瘤负担，显着增加小鼠的存活。因此，VV TK-RR-可能是MPM溶瘤免疫疗法的有前途的溶瘤病毒（OV）。
使用tsukuba系统矢量
使用遗传转化方法评估在果树种类中表达的基因的功能是一个漫长的过程，因为这些树木通常是对遗传转化的顽固性，并且在较长的幼年相中不能忍受果实。果实中的瞬时基因表达能够对与果实性状相关的基因进行功能分析，从而加速了果实生理的研究。在这里，通过使用最近开发的“ tsukuba系统”，我们成功地建立了收获的水果组织中有效的瞬态表达系统。“ tsukuba系统”利用了双子病毒复制系统和双终止仪的组合，从而确保了足够的转基因表达水平。我们使用蓝莓水果作为模型来表征该系统在果组织中瞬时表达的适用性。PTKB3- EGFP载体是通过浸润到几种蓝莓品种的水果组织中引入的。我们发现，果实灌注后4-6天，果实中的瞬时GFP荧光。农杆菌悬浮液很容易注入柔软的成熟果实，GFP强烈表达。然而，硬质果实无法通过农业悬浮液渗透，很少检测到GFP。然后，我们测试了开发系统对其他果树的适用性：六个家庭，17种和26种品种。GFP荧光。在蓝莓，鸟莓，甜樱桃，杏子和卫星普通话中，GFP高度表达并以很大一部分的肉体观察到。在Kiwifruit，Hardy Kiwifruits，柿子，桃子，苹果，欧洲梨和葡萄中，GFP荧光仅限于某些部分水果。最后，对蓝莓中的瞬态VCMYBA1过表达进行了测试，作为水果中基因功能分析的模型。瞬态VCMYBA1过表达诱导肉中的红色色素沉着，这表明VCMYBA1表达引起花青素的积累。这项研究为在水果中表达的基因的快速评估提供了技术基础，这对于长期幼年阶段的水果作物的基因功能评估研究非常有用。
SITESEEKER® 和 CRISPR：
(A) 使用 sgRNA 文库针对所有 UPS 和关键相互作用组基因进行 CRISPRko 筛选的示意图。与表达经过验证的 PROTEINi® 的细胞共表达，并收集低和高 GFP 群体以识别诱导 GFP 降解的功能依赖性。 (B) 对于我们的一种 GFP 降解诱导 PROTEINi®，CRISPR 筛选反卷积揭示了负责降解剂功能的单个关键 E3。 (C) 通过突变分析确定结构活性关系 (SAR)，以识别关键残基并建立结合模型。 (D) 这允许模拟 E3 连接酶结合并从肽 SAR 中从头识别经过计算机验证的 PROTEINi® 结合口袋，以启动我们的小分子开发流程。
使用 Cas12a 核酸酶的下一代 CRISPR 基因驱动系统
图 1. 基于 Cas12a 的基因驱动显示出受温度调节的超孟德尔遗传率。（a）CopyCat 基因驱动系统示意图。DsRed 标记的 Cas12a 是一种静态转基因，它通过等位基因转换提供复制 GFP 标记的 CopyCat 元素的核酸酶，而等位基因转换由周围的同源臂驱动。（b）表达 Cas12a 的雄性与携带黑檀木 CopyCat 构建体（e1 或 e4 基因驱动）的处女雌性杂交方案。收集的处女雌性（Cas12a-dsRed + 基因驱动-GFP）与黑檀木突变雄性杂交，通过筛选 F2 后代中的 GFP 标记来评估种系传递率。深灰色半箭头表示雄性 Y 染色体。F1 雌性中的绿色三角形表示潜在的基因驱动复制到野生型染色体上。 (c) 通过对 GFP 标记的乌木 CopyCat 构建体的 F2 后代进行表型评分，评估 F1 雌性生殖系中的基因驱动活性。遗传率测量值与平均遗传率 (%)（也以黑条表示）和进行的 F1 杂交次数 (n) 一起报告在图表顶部。
唯一物品识别 (IUID) 系统
IUID 注册表是 IUID 信息的中央存储库，并充当获取网关，用于识别：物品是什么、如何获取以及何时获取、物品的初始价值、当前保管以及标记方式。随着 IUID 的发展，注册表中捕获了更多物品信息，例如特殊工具或特殊测试设备、条件和生命周期事件。在版本 5.0 中，IUID 注册表创建了通过多种自动馈送和直接提交来记录非 UII GFP 的功能。在 5.1 中，IUID 注册表使网络用户能够查看和向非 UII GFP 添加条件代码。版本 5.8 允许用户将他们的 BRS 帐户绑定到他们的通用访问卡 (CAC) 以更轻松地登录，并为非 UII GFP 物品添加了各种更新功能。
唯一物品识别 (IUID) 系统
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唯一物品识别 (IUID) 系统
IUID 注册表是 IUID 信息的中央存储库，并充当获取网关，用于识别：物品是什么、如何获取以及何时获取、物品的初始价值、当前保管以及标记方式。随着 IUID 的发展，注册表中捕获了更多物品信息，例如特殊工具或特殊测试设备、条件和生命周期事件。在版本 5.0 中，IUID 注册表创建了通过多种自动馈送和直接提交来记录非 UII GFP 的功能。在 5.1 中，IUID 注册表使网络用户能够查看和向非 UII GFP 添加条件代码。版本 5.8 允许用户将他们的 BRS 帐户绑定到他们的通用访问卡 (CAC) 以更轻松地登录，并为非 UII GFP 物品添加了各种更新功能。
物品唯一标识 (IUID) 系统
IUID 注册表是 IUID 信息的中央存储库，并充当获取网关，用于识别：物品是什么、如何获取以及何时获取、物品的初始价值、当前保管以及标记方式。随着 IUID 的发展，注册表中捕获了更多物品信息，例如特殊工具或特殊测试设备、条件和生命周期事件。在版本 5.0 中，IUID 注册表创建了通过多个自动馈送和直接提交来记录非 UII GFP 的功能。在 5.1 中，IUID 注册表使 Web 用户能够查看和向非 UII GFP 添加条件代码。版本 5.8 允许用户将他们的 BRS 帐户绑定到他们的通用访问卡 (CAC) 以更轻松地登录，并为非 UII GFP 物品添加了各种更新功能。
唯一物品识别 (IUID) 系统
IUID 注册表是 IUID 信息的中央存储库，并充当获取网关，用于识别：物品是什么、如何获取以及何时获取、物品的初始价值、当前保管以及标记方式。随着 IUID 的发展，注册表中捕获了更多物品信息，例如特殊工具或特殊测试设备、条件和生命周期事件。在版本 5.0 中，IUID 注册表创建了通过多种自动馈送和直接提交来记录非 UII GFP 的功能。在 5.1 中，IUID 注册表使网络用户能够查看和向非 UII GFP 添加条件代码。版本 5.8 允许用户将他们的 BRS 帐户绑定到他们的通用访问卡 (CAC) 以更轻松地登录，并为非 UII GFP 物品添加了各种更新功能。
唯一物品识别 (IUID) 系统
IUID 注册表是 IUID 信息的中央存储库，并充当获取网关，用于识别：物品是什么、如何获取以及何时获取、物品的初始价值、当前保管以及标记方式。随着 IUID 的发展，注册表中捕获了更多物品信息，例如特殊工具或特殊测试设备、条件和生命周期事件。在版本 5.0 中，IUID 注册表创建了通过多种自动馈送和直接提交来记录非 UII GFP 的功能。在 5.1 中，IUID 注册表使网络用户能够查看和向非 UII GFP 添加条件代码。版本 5.8 允许用户将他们的 BRS 帐户绑定到他们的通用访问卡 (CAC) 以更轻松地登录，并为非 UII GFP 物品添加了各种更新功能。