鼠标抗GAPDH 37-0.2 µg/ml SC-32233鼠标抗Perk1/2 42/44 Y204 Y204 0.4 µg/ml SC-7383兔子抗PVEGFR2 152 Y1175 Y1175 Y1175 1.49 µg/ml AB-194806 rabbit andi-ps 60 Y41 Y419 0.538 y4419 Y4419 Y4419 Y419 AB-185617兔抗HO-1 32-1.0 µg/ml HC3001兔抗Pfak 119 Y397 Y397 1.0 µg/ml AB-81298
图 4. 进行实时 PCR 反应,检测室温下储存长达 32 个月的唾液 DNA 中的 GAPDH 基因。在不同时间点(1 周、1 个月、4 个月、20 个月、32 个月)分离 DNA 并将其用作反应中的模板,绘制每个时间点的平均 Ct 值。唾液 DNA 的质量在 32 个月内没有变化。
Target Gene Forward Reverse Bop1 GGTCTCGGAGGAAGAGCACC ACCGCCAAATAGTCCCCTCG Gapdh GGTCCTCAGTGTAGCCCAAG AATGTGTCCGTCGTGGATCT Gemin4 CCTCACAGGTCCACGAAGGG TGCCCACATCCATCACCAGA Its1 TCCATCTGTTCTCCTCTCTCT ATCGGTATTTCGGGTGTGAG Its2 CTGCCTCACCAGTCTTTCTC ACCTCGACCAGAGCAGAT Ecad ACACCGATGGTGAGGGTACACAGG ACACCGATGGTGAGGGTACACAGG Ncad AAAGAGCGCCAAGCCAAGCAGC TGCGGATCGGACTGGGTACTGTG Nop58 acagcagaagcatagcagca cgacagccaggggttcatgg npm1 gcgagagatctcctgcgcgaccat acttcggtgtgtggggagaagcc cascl tgctaaggcagttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttctagtagttagta AAGGAAATGCCCTGAAGCCG Rpl29 GCAGTGAGGGAAGCTTTTCCG CATGTCTGCACGGTAACCCG Rpl8 ACAGAGCTGTTCATCGCAGC ACGATCGTACCCTCAGGCAT Rps24 ACACAGTAACCATCCGGACCA TTTTGGCCAGCTTTTCCCGA Rps28 GATATCCAGAACCCCACCAGC AATGTCAAAGGCCCCGTTCG Rps9 GTCTCGGGCCTGAGTTCGTA CCTGCGCAGTAAAGTGTCGT S100a4 CCTGTCCTGCATTGCCATGAT CCCACTGGCAAACTACACCC Setd4 GGAACTGCGCGTCCTTGTG gtaacaaaaacgccctcgcgca蜗牛Actggtgagaagccattctcct ctggcactggtatctcttcaca utp6 agggcatttgggggggggggggggggggggggggggtgggggggggggggtgggtctgtctctctcagt vim
通过向细胞中添加RIPA裂解缓冲液(ServiceBio)提取总蛋白质。蛋白浓度,并调整蛋白质浓度,以使它们之间在不同组之间保持一致。使用SDS-PAGE分离蛋白质,并转移到PVDF膜(美国Billerica,美国)。 初级抗体TFRC(1:10000),ACSL4(1:10000),GPX4(1:5000),FTH1(1:2000)和GAPDH(1:500)在4°C下孵育12小时。 这些抗体是从英国剑桥市ABCAM获得的。 使用1×TBST从PVDF膜表面取出初级抗体后,将山羊抗兔二级抗体(1:10000,ServiceBio)在室温下孵育12小时。 通过化学发光检测蛋白表达,并处理灰度值,并使用图像J. 计算相对蛋白表达。蛋白质,并转移到PVDF膜(美国Billerica,美国)。初级抗体TFRC(1:10000),ACSL4(1:10000),GPX4(1:5000),FTH1(1:2000)和GAPDH(1:500)在4°C下孵育12小时。这些抗体是从英国剑桥市ABCAM获得的。使用1×TBST从PVDF膜表面取出初级抗体后,将山羊抗兔二级抗体(1:10000,ServiceBio)在室温下孵育12小时。蛋白表达,并处理灰度值,并使用图像J.
Duchenne肌肉营养不良(DMD)是一种X连锁疾病,是由DMD基因突变引起的,导致逐渐浪费肌肉和无力。目前无法治愈DMD。BL10-MDX小鼠是临床前DMD研究中最常用的模型,但与DMD患者相比,它表现出温和的疾病表型,从而限制了研究的可转换性。较新的D2-MDX小鼠在很小的时候就具有更严重的表型,并且可以更好地概括人类疾病。将这些小鼠模型与定量RT-PCR,稳定且可靠的参考基因进行比较是必不可少的。We aimed to evaluate the stability and reliability of a panel of nine candidate reference genes ( Actb, Ap3d1, Gapdh, Hmbs, Htatsf1, Pak1ip1, Rpl13a, Sdha and Zfp91 ) in the gastrocnemius, diaphragm and heart of mice from both strains and their corresponding wild types aged 4 to 52 weeks.使用Genorm,最佳门将,三角肌和Normfinder分析数据。我们发现HTATSF1,PAK1IP1和ZFP91是合适的参考基因,用于在营养不良和健康小鼠中基因表达的标准化,无论组织类型或年龄如何。在我们的手中,ACTB,GAPDH和RPL13A不适合作为参考基因,表现出组织,年龄或疾病特定的表达变化。这项研究强调了选择合适的参考基因的重要性,因为它们的稳定性在特定的实验设置之间可能有所不同。
摘要:在意大利首次报道了石榴的替代黑点(Punica Granatum)。在2023年春季,在一个异常雨期之后,在商业石榴上爆发了这种疾病。从叶子和水果的典型坏死斑中回收的总共30种随机选择的替代株。基于固体琼脂培养基(PDA和MEA)的菌落形态,分离株分为三种不同的形态(1、2和3)。前两种形态型仅包含来自水果的分离株,而形态型3仅包含来自叶片的分离株。对四个DNA区域的多基因系统发育分析,包括内部转录间隔物(ITS),翻译伸长因子1-α(EF-1α),3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(GAPDH)和SCAR SCRAIR MARKER(OPA10-2),隔离及其隔离量和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2和2 Arborescens。在未能的叶子和果实的致病性测试中,所有三种形态的分离株都在三种石榴品种的叶子上产生了症状,“ Acco”,“ Acco”,“奇妙”和“ ETNA”。“ Acco”叶子上的症状最严重。相反,“ Acco”的果实最容易受到影响。形态型2和3的分离株在“奇妙”和“ etna”的果实上没有致病性。这是意大利的替代黑点和与全球石榴的替代黑点相关的A. arborescens的第一份报告。
a,siRNA名称/方向序列atp6v1b1_#1 sense 5' - gacaacuucgccaucgucu-3'反义5'-agacgauggcgaaguugu -3'atp6v1b1_#2 ′ B, qPCR primers Gene/direction Sequence ATP6V1B1 Fw 5 ′ -CAGCAGGCTCAGACACTGG-3 ′ Rev 5 ′ -CCCAGGCCTGCTGTCTATCTC-3 ′ Cyclin D1 Fw 5 ′ -CCGTCCATGCGGAAGATC-3 ′ Rev 5 ′ -ATGGCCAGCGGGAAGAC-3 ′ p21 Fw 5 ′ -AGTCAGTTCCTTGTGGAGCC-3 ′ Rev 5 ′ -CATTAGCGCATCACAGTCGC-3 ′ GAPDH Fw 5 ′ -AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3 ′ Rev 5 ′ -AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3 ′ AccuTarget Negative Control siRNAs, catalogue no.SN-1013(Bioneer Corporation)。fw,前进; REV,反向; siRNA,小干扰RNA; ATP6V1B1,ATPase H+运输V1亚基B1。
图S10。 建立用于研究缺血性中风的永久性脑动脉闭塞(PMCAO)模型。 PMCAO手术程序。 CCA,ICA和ECA暴露了,将硅细丝插入CCA和ICA直到到达MCA(有关详细信息的材料和方法)。 用biorender.com创建的数字。 b TTC染色大脑的代表性照片。 白色区域代表PMCAO的梗塞区域。 PMCAO后1、3和6小时,缺血性大脑中SIRT1的mRNA表达水平。 数据表示为折叠变化,相对于假手术组在归一化为GAPDH之后。 误差条表示平均值±S.D. (n = 3)(每组n = 10只小鼠, * p <0.05,*** p <0.001对假手术)。 缩写:CCA,常见的颈动脉; ICA,颈内动脉; ECA,外部颈动脉; MCA,中大脑中动脉; TTC,2,3,5-三苯基四唑氯化物。图S10。建立用于研究缺血性中风的永久性脑动脉闭塞(PMCAO)模型。PMCAO手术程序。CCA,ICA和ECA暴露了,将硅细丝插入CCA和ICA直到到达MCA(有关详细信息的材料和方法)。用biorender.com创建的数字。b TTC染色大脑的代表性照片。白色区域代表PMCAO的梗塞区域。PMCAO后1、3和6小时,缺血性大脑中SIRT1的mRNA表达水平。数据表示为折叠变化,相对于假手术组在归一化为GAPDH之后。误差条表示平均值±S.D.(n = 3)(每组n = 10只小鼠, * p <0.05,*** p <0.001对假手术)。缩写:CCA,常见的颈动脉; ICA,颈内动脉; ECA,外部颈动脉; MCA,中大脑中动脉; TTC,2,3,5-三苯基四唑氯化物。
结果:对候选家政基因进行测序:β-肌动蛋白(肌动蛋白),伸长因子1α(EF1A),甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),Armadillo(ARM),Armadillo(ARM),核糖体蛋白L32(核心蛋白L32),核心蛋白质(Rpl32),固定脱水酶(RPLLAINS)和SDHA酶(SDHA)ix HASE; - 小茶(浴缸)。在Allata(CA)和成年雌性D. punctata的卵巢中分析了这八个基因的表达。Genorm,以及Normfinder都将SDHA,EF1A和ARM的特征是在Allata Corpera Allata中表达最稳定的。在卵巢中,基因级计算显示浴缸,EF1A和RPL32是最稳定的,而Normfinder识别为浴缸,EF1A和ARM是最好的。在卵巢中,最不稳定的基因是肌动蛋白,挑战了其在归一化中的有用性。作为原理证明,在第一个促性腺营养循环中监测了卵泡细胞蛋白3C和CYP15A1的表达。
fi g u r e 2 1,25(OH)2 D 3抑制成纤维细胞中衰老相关的介体和阻滞p38 MAPK。非元素和衰老成纤维细胞用10 nm 1,25(OH)2 d 3进行7天处理。(a)使用细胞仪珠阵列(n = 7)进行CCL2,IL-6和IL-8的定量。7天后计数非元素和衰老细胞的细胞数量,并根据其非年代对照组的细胞数成比例地调节衰老细胞上清液中的细胞数和浓度。(b)使用Western blot(c)(c)累积数据(n = 9)的Phosho-P38 MAPK(P-P38),总P38 MAPK和GAPDH的代表性印迹。数据表示为平均值±SEM,并使用单向方差分析和Dunn的多重比较测试进行比较。*p≤0.05; **p≤0.01; ***p≤0.001。