通过向细胞中添加RIPA裂解缓冲液(ServiceBio)提取总蛋白质。蛋白浓度,并调整蛋白质浓度,以使它们之间在不同组之间保持一致。使用SDS-PAGE分离蛋白质,并转移到PVDF膜(美国Billerica,美国)。 初级抗体TFRC(1:10000),ACSL4(1:10000),GPX4(1:5000),FTH1(1:2000)和GAPDH(1:500)在4°C下孵育12小时。 这些抗体是从英国剑桥市ABCAM获得的。 使用1×TBST从PVDF膜表面取出初级抗体后,将山羊抗兔二级抗体(1:10000,ServiceBio)在室温下孵育12小时。 通过化学发光检测蛋白表达,并处理灰度值,并使用图像J. 计算相对蛋白表达。蛋白质,并转移到PVDF膜(美国Billerica,美国)。初级抗体TFRC(1:10000),ACSL4(1:10000),GPX4(1:5000),FTH1(1:2000)和GAPDH(1:500)在4°C下孵育12小时。这些抗体是从英国剑桥市ABCAM获得的。使用1×TBST从PVDF膜表面取出初级抗体后,将山羊抗兔二级抗体(1:10000,ServiceBio)在室温下孵育12小时。蛋白表达,并处理灰度值,并使用图像J.