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gmp 制造的 cas9 核酸酶细胞治疗 - ...
图 2. CTS Cas9 的 TCR 敲除效率高于供应商 A Cas9。将每个 Cas9 (7.5 pmol) 和靶向 alpha 和 beta T 细胞受体基因 (TRAC 和 TRBC) 区域的 Invitrogen ™ TrueGuide ™ 合成 sgRNA (7.5 pmol) 混合以创建 Cas9-RNP 复合物。每个 Cas9-RNP 复合物用于使用 Neon 转染系统 (货号 MPK5000) 转染 500,000 个 T 细胞。 72 小时后收获细胞，用 Invitrogen ™ eBioscience ™ 可固定活力染料 (FVD) 紫罗兰 (货号 65-0863-14) 和 eBioscience ™ 抗 TCR a/b 抗体 (货号 12- 9986-42) 染色，然后在 Invitrogen ™ Attune ™ NxT 流式细胞仪上进行分析，并使用基于 NGS 的 TAV 进行基因分型。 (A) TCR KO 效率的流式细胞术数据示例。与供应商 A Cas9 相比，CTS Cas9 的 KO 效率超过 88.7%，而供应商 A Cas9 的 KO 效率为 61.7%。 (B) 基于 NGS 的 TAV 的平均 KO 效率。与供应商 A Cas9 相比，CTS Cas9 在各种目标上实现了更高的平均 KO 效率。所有反应均重复进行三次 (** P < 0.01)。
IOV-COM-202
实验设计•使用黑色素瘤和肺，乳房，宫颈和卵巢癌的组织样品用于本研究。•在用于制造Iovance的TIL（Gen 2）的TIL快速扩张过程中，测试了使用PD-1TALEN®MRNA的TIL电穿孔的几种条件，以优化KO效率。•分别通过NGS和流式细胞仪在基因组和蛋白质水平上评估KO效率。•PD-1 KO对TIL计数/活性，表型和效应子功能的影响通过流式细胞仪和基于细胞的测定法进行了评估，包括混合淋巴细胞反应（MLR），重定向的杀伤测定法和单细胞多路复用细胞因子分析。•通过流式细胞术T细胞受体（TCR）-V（β）曲目分析通过荧光激活的细胞分类（FACS）分离细胞后，通过流式细胞术T细胞受体（TCR）-V（β）曲目分析来监测KO的分布。
精神分裂症相关基因AS3MT的功能表征鉴定出在神经元发育中的作用。
图4在分化的AS3MT敲除和野生型细胞系之间未观察到形态差异：使用10μM视黄酸的细胞系在7天内使用10μM视黄酸和1％FBS在酸蚀刻，层粘连蛋白和多赖氨酸和多赖氨酸覆盖的覆盖物上覆盖，以获取MAP2，以获取MAP2，以获取cytoskeposkemeleckkeletalsmembeletalmarkeral。（a）敲除（KO）或野生型（wt）AS3MT线之间的MAP2 +单元总数没有差异（t检验，T [0.875] = 1.19，p = 0.523）b）kO和WT AS3MT线之间的细胞面积没有差异（T AS3MT test test，t test，T [1.98] [1.98] = 1.198]，P。c）KO和WT AS3MT线之间的最长神经突长度没有差异（t检验，t [1.99] = 1.10，p = 0.386）。d）KO和WT AS3MT线之间的总神经突长度没有差异（t检验，t [1.11] = 0.937，p = 0.508）。在两个独立的KO/WT细胞系上进行了三个技术重复，进行了每个实验。条代表每个基因型的两个细胞系的平均值。错误是平均值±SEM
研究文章 抗氧化的人类载脂蛋白 AI 与未修饰的人类载脂蛋白 AI 的功能类似，可以延缓高脂血症小鼠的动脉粥样硬化进展并促进动脉粥样硬化消退
将人类 apoA1 和 MPO 氧化剂抗性的 4WF 异构体转基因小鼠与 LDL 受体缺陷 (LDLr KO) 小鼠交配，并喂食西方饮食。在 LDLr KO 背景下，这些人类 apoA1 异构体的高水平表达不会导致 HDL 胆固醇水平升高。在雄性和雌性小鼠中，研究了病变随时间推移的进展情况，与 LDLr KO 小鼠相比，apoA1 和 4WF 转基因小鼠的病变进展明显延迟，非 HDL 胆固醇降低。使用病变面积相等的时间点，通过给小鼠喂食含有微粒体甘油三酯转移蛋白抑制剂的低脂控制饮食 7 周来启动病变消退。与 LDLr KO 相比，雄性 apoA1 和 4WF 转基因小鼠的病变消退得更厉害，但 4WF 亚型在促进病变消退方面并不优于未修饰亚型。
会议计划 - ICCE 2024-马尼拉大学Ateneo de Manila University
Kenneth King L. Ko，Jed Laszlo O. Jocson和Gerick JeremiahNiñoN。Go W09-017S：探索元认知意识对大学的影响Kenneth King L. Ko，Jed Laszlo O. Jocson和Gerick JeremiahNiñoN。Go W09-017S：探索元认知意识对大学的影响
对老旧房屋中安装特殊太阳能吸收器的冰蓄冷 (PCM) 供暖系统进行分析
1 矿业、生态、过程技术和地质技术学院、地源研究所、科希策技术大学、Letn á 9, 042 00 科希策，斯洛伐克；peter.taus@tuke.sk（PT）；radim.rybar@tuke.sk（RR）；martin.beer@tuke.sk（MB）；zuzana.simkova@tuke.sk（Z.Š.）；jana.citbajova@tuke.sk（J. ˇ C.）2 电气工程和机电一体化系、电气工程和信息学学院、科希策技术大学、Letn á 9, 042 00 科希策，斯洛伐克；frantisek@banik.sk 3 西伯利亚联邦大学贸易与经济研究所，79 Svobodny av.，660041 克拉斯诺亚尔斯克，俄罗斯； zhironkinsa@kuzstu.ru 4 戈尔巴乔夫库兹巴斯国立技术大学矿业学院，28 Vesennya 街，650000 克麦罗沃，俄罗斯 5 国家研究托木斯克理工大学核心工程教育学院，30 Lenina 街，634050 托木斯克，俄罗斯 * 通讯地址：peter.sivak.2@tuke.sk
NR4A3 基因编辑和 c-Jun 过表达协同作用，限制 ROR1 CAR-T 细胞衰竭并增强其体内外功能活性
(A) 在 5 位独立供体中，与对照未编辑 ROR1 CAR T 细胞和模拟未转导 T 细胞相比，在生产第 7 天，NR4A1 KO、NR4A2 KO 和 NR4A3 KO CD3+ ROR1 CAR T 细胞中的 NR4A 蛋白表达明显降低。星号表示 KO 和未编辑对照之间存在显着差异。 (B) 用表达 ROR1 的 H1975-NucLightRed (NLR) 靶细胞进行顺序刺激。通过测量总 NLR 强度来量化 H1975-NLR 靶细胞的裂解。在每轮刺激后重新接种后，NLR 强度相对于起始强度进行标准化。对来自 5 位独立供体的 CAR T 细胞取平均值。星号表示与 NR4A3 KO 相比，第五次刺激的最后一个时间点存在显着差异。 (C) 在 H1975 顺序刺激试验期间，刺激 1 和刺激 4 时干扰素 γ、白细胞介素 2 和肿瘤坏死因子 α (IFN-γ、IL-2 和 TNF-α) 的分泌。空心形状表示对 5 个独立供体进行测试的每个供体的三重孔的平均值。 (D) H1975 异种移植肿瘤模型示意图。来自 2 个测试供体中的 1 个代表性供体的 CAR T 细胞的抗肿瘤功效和存活率（n=5 只小鼠/组）。在去除每组 >20% 的小鼠后，肿瘤体积曲线被截断。星号表示与 NR4A3 KO 相比有显着差异。误差线表示平均值±平均值的标准误差 (SEM)。** P <0.005；*** P <0.001； **** 非配对 t 检验 (A、B、C)、Tukey 单向方差分析 (D，左) 或对数秩 Manel-Cox 检验 (D，右) 的 P < 0.0001。
标题：MZB1在黑色素瘤中的潜在致癌作用和免疫调节机制
虽然免疫检查点阻滞（ICB）疗法已大大改善了黑色素瘤的治疗方法，但大多数患者无法实现持久的反应。因此，迫切需要提高我们对黑色素瘤免疫逃避机制的理解，并确定能够增强ICB反应的新目标。MZB1（边缘区B和B1细胞特异性蛋白）在转移性黑色素瘤中差异表达。在有限数量的癌症中，MZB1已被证明充当癌基因或肿瘤抑制剂。然而，其在黑色素瘤中的作用和意义尚不清楚。在这项研究中，我们使用MZB1过表达（OE）（在SK-MEL-2和SK-MEL-2和SK-MEL-28）和CRISPR敲除（KO）（KO）（在A375和HS294T）线上确定了MZB1在人黑色素瘤细胞系中MZB1的功能显着性和免疫调节机制。MZB1 OE显着增加了黑色素瘤细胞的增殖和增殖标记物KI67和PCNA的表达，而MZB1 KO产生了相反的作用。为了鉴定与MZB1相关的免疫调节机制，我们使用纳米串NCounter技术对770个免疫相关基因进行了差异基因表达分析。nsolver分析确定了153个差异表达的基因（DEG）是HS294T细胞中MZB1敲除的结果（调整后的P <0.05，1.5倍变化截止）。MZB1 KO强烈降低了HLA II类家族基因的表达，并改变了各种细胞因子的表达，表明MZB1的免疫调节作用。此外，MZB1 KO显着下调了与癌症进展和转移促进有关的基因。此外，MZB1 KO降低了常见的“癌细胞”基因的表达，例如RXRG，ALDH1A1，AQP1，NFATC2，LPAR1，表明黑色素瘤中MZB1表达可能会促进推断分化的或神经裂纹的状态。此外，对DEG的Ingenuity途径分析（IPA）显示，MZB1 KO时发生了许多与癌症相关的功能（P调节<0.05），并显示出癌症促进途径在内的肿瘤生长，转移，转移和增殖的负富集。IPA调节分析预测MZB1 KO会减少包括PI3K，MEK和ERK1/2在内的致癌信号传导组件的激活。此外，IPA预测，MZB1抑制作用可以通过激活与T细胞增殖和激活，白细胞迁移和巨噬细胞激活相关的机制来积极地对更高的免疫反应敏感。总体而言，我们的研究表明，MZB1促进黑色素瘤中的致癌信号传导，以驱动增殖和去分化，并调节可能导致黑色素瘤细胞免疫逃避的广泛免疫基因。因此，MZB1值得进一步研究，以确定靶向MZB1产生的免疫后果是否可以补充黑色素瘤治疗中的ICB方法。
采用渐进方法提高安全性以降低风险...
Patrik Šváb* 科希策技术大学航空学院 Rampová 7, 041 21, Košice, 斯洛伐克 patrik.svab@tuke.sk Marek Pilát 科希策技术大学航空学院 Rampová 7, 041 21, Košice, 斯洛伐克 marek.pilat @tuke.sk Michaela Kešeľová 技术大学科希策航空学院 Rampová 7, 041 21, Košice, 斯洛伐克 michaela.keselova@tuke.sk Kateřina Tomanová VSB - 俄斯特拉发技术大学，安全工程学院，俄斯特拉发，捷克共和国 katerin.tomanova@vsb.cz Barbora Machalová VSB -俄斯特拉发技术大学安全工程学院，捷克共和国俄斯特拉发barbora.machalova@vsb.cz * 通讯作者 摘要：本文从安全的角度讨论了飞机的技术处理，以及使用渐进方法简化流程的可能性。在文章的开头，作者定义了技术处理及其流程以及机场对技术处理的看法。本文将讨论航空公司对技术处理和确保飞机安全处理的看法。第三章将讨论使用渐进方法简化流程的可能性。结论，作者指出了未来研究中需要解决的领域。关键词：安全、地面处理、航空信息：该项目由捷克、匈牙利、波兰和斯洛伐克政府通过维谢格拉德拨款共同资助< /div>
CRISPR-Cas9 靶向 eIF4E1 基因可扩大 Solanum tuberosum L. cv. Desirée 的马铃薯 Y 病毒抗性谱
翻译起始因子，特别是 eIF4E 家族，是许多植物物种对马铃薯 Y 病毒组隐性抗性的主要来源。然而，在马铃薯 (Solanum tuberosum L.) 种质中尚未鉴定出 eIF4E 介导的对该病毒属的抗性。与番茄一样，马铃薯 eIF4E 基因家族由 eIF4E1、其旁系同源物 eIF4E2、eIF(iso)4E 和 nCBP 组成。在番茄中，eIF4E1 敲除 (KO) 可对一组马铃薯 Y 病毒组产生抗性，而 eIF4E1/2 双 KO 虽然可产生更广泛的抗性，但会导致植物发育缺陷。这里，四倍体马铃薯 cv。 Desirée 拥有显性 Ny 基因，该基因可抗马铃薯 Y 病毒 (PVY) 菌株 O 但不抗 NTN，用于评估通过 CRISPR-Cas9 介导的 eIF4E1 易感基因 KO 来扩大其 PVY 抗性谱的可能性。经过植物原生质体转染再生的双重过程，获得了 eIF4E1 KO 马铃薯。敲除是针对 eIF4E1 的，在其 eIF4E2 旁系同源物中未发现突变。eIF4E 家族的表达分析表明，eIF4E1 的破坏不会改变其他家族成员的 RNA 稳态水平。用 PVY NTN 分离物攻击的 eIF4E1 KO 系显示病毒积累减少和病毒诱导症状改善，表明 eIF4E1 基因是其增殖所必需的但不是必需的。我们的数据表明，可以通过增强 eIF4E 介导的隐性抗性，有效利用 eIF4E1 编辑来拓宽优良马铃薯品种（如 Desirée）的 PVY 抗性谱。