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![b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据](/simg/a\a5e6054f458942da9d0fd315e2dff3ce571b5880.webp)
b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据
b'figure 1。类似药物样的小分子与MIR21结合。我们基于常见的2--（（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶-2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，并分析了它们与PRE-MIR-21结合使用通用NMR ASSAIN 1，2。在NM中部范围内，称为45（a）和52（b）的两种化合物具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出明显降低的亲和力（5-10倍差）（C）。1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的氘化TRI的缓冲液中的小分子，以及250 mm NACL，NACL，50 mm KCL，KCL和250 mm KCL和2 mmmmmmmmmgcl 2。随着增加量的小分子与RNA结合，1小时线宽增加，而NMR峰高相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低来计算结合小分子的分数。曲线饱和为1的值表示存在具有子-UM亲和力的主要单位位点；相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过将数据点拟合到结合等温线来计算近似结合常数。化合物52的数据拟合对应于近似K d = 200 nm，而化合物45和49（表1）均具有K d = 600 nm。
引文：Pietra D、Brisci A、Rumi E、Boggi S、Elena C、Pietrelli A、Bordoni R、Ferrari M、Passamonti F、De Bellis G、Cremonesi L 和 Cazzola M. Dee
对于 HRM 检测，采用补充表 S1 中报告的优化内含子引物。PCR 在 20 μ L 中进行，其中包含 100 ng DNA、0.5 单位 HotStart Taq 聚合酶以及 1x 缓冲液（Qiagen，德国希尔登）、1.5 mM MgCl 2、800 μ M dNTP、300 nM 每种引物和 1x EvaGreen（Idaho Technologies，犹他州盐湖城）作为插入染料。循环和 HRM 分析在 Rotor-Gene ™ 6000 实时分析仪上进行，采用以下热方案：95°C 持续 15 分钟（一个循环）；95°C 持续 30 秒，55°C 持续 30 秒，72°C 持续 30 秒（50 个循环）；72°C 持续 10 分钟（一个循环）；熔化温度从 85°C 升至 95°C，每秒上升 0.1°C。使用相关的 Rotor-Gene ™ 6000 系列软件 (v1.7.87) 分析数据。标准化条在前导范围的 88°C 和 88.5°C 之间，在尾随范围的 92.5°C 和 93°C 之间，置信阈值为 90%：如果 HRM 图超出了指定参考基因型的置信范围，则软件会将样本识别为变异。图 S1A 显示了健康受试者和 3 名 MPN 患者的 DNA 样本的 HRM 图谱，这些样本先前已通过微电子微芯片分析进行了基因分型（未显示数据）。患者 PV02_113 为 MPL (W515K) 纯合子（TGG>AAG 转换），其 HRM 曲线相对于野生型序列向左移向较低温度，这与纯合变体导致熔解温度 (Tm) 降低的预期一致。患者 PV04_494 为 MPL (W515A) 纯合子（TGG>GCG 转换）等位基因
cas12b（A.酸性）重组
描述：重组A.酸性AAPCAS12B（V型CRISPR相关蛋白CAS12B），无标签。AAPCAS12B属于V型CRISPR效应器CRISPR-CAS12B/C2C1，对于广泛的应用，高温。物种：酸性酸性酸性构建体：CAS12B（全长）（酸性）浓度：0.20 mg/ml表达系统：大肠杆菌纯度：80％格式：水缓冲液溶液。以：50 mm磷酸钠，pH 7.5、300 mm NaCl，1 mM DTT和10％甘油MW：128 kDa GenBank登录：WP_067623834稳定性：至少在-80°C时至少6个月。存储：-80°C使用的说明：在冰上解冻，并在使用前轻轻混合。不要涡旋。在打开前进行快速旋转。等分的小容量，然后闪烁冻结以进行长期存储。避免多个冻结/解冻周期。测定条件：使用基于CRISPR的荧光记者测定法测量了不同量的AAPCAS12B活性，以获得最佳结果。使用RNA引导的DNA与CAS12结合，将靶DNA切割和不加选择的单链DNA侧支裂解激活。荧光信号的发射是由于裂解后ssDNA记者的降解所致。Active Cas12 was thawed on ice while 1X Endonuclease Buffer containing 10 mM Tris- HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl 2 , and 0.1 mg/ml BSA, guide RNA (custom designed crRNA), ds DNA activator (complementary sequence to crRNA and a PAM sequence specific for Cas enzyme) and FQ-ssDNA substrate （用荧光团和淬火器标记）平衡为室温。然后将板密封并在37°C下孵育10-30分钟。使用1X内核酸酶缓冲液制备了活性CAS12（4倍最终浓度）指南RNA（4倍最终浓度）和含有DS DNA激活剂和SSDNA报告基因（2倍最终浓度）的激活器/报告剂混合物（2倍最终浓度）。10 µL的4倍活性CAS12和10 µL的4倍引导RNA在室温下在固体黑色96井板的一半面积中预孵育10分钟。预孵育后，将20 µL的2倍激活剂/报告基因混合物添加到板上，并将其放置在振动孵化器上1分钟。然后将板平衡至室温，去除板密封剂，并在毫用读取器上读取荧光。阴性对照是通过用相等量的测定缓冲液代替酶工作溶液来测量的。应用程序：
mytaqtm DNA聚合酶
重要的考虑因素和PCR优化，最佳条件将从反应到反应，并取决于所使用的模板/引物。5x mytaq反应缓冲液：5x MyTAQ反应缓冲液包括5mm DNTP，15mm MGCL 2，稳定器和增强剂。每个组件的浓度已得到广泛优化，从而减少了进一步优化的需求。其他PCR增强剂，例如HISPEC，Polymate或Betaine等。。引物：正向和反向引物通常以0.2-0.6M的最终浓度使用。我们建议使用0.4M作为最终浓度（即每50 le反应体积的每个引物的下午20点）。 过高的底漆浓度可以降低启动的特异性，从而导致非特异性产物。 设计底漆时，我们建议使用Primer-Design软件，例如Primer3（http://frodo.wi.mit.edu/primer3）或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度，或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。 引物应具有约60°C模板的熔化温度（TM）：反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。 对于低结构复杂性（例如质粒DNA）的模板，我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。 对于真核基因组DNA，我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA，这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。 避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板（例如）很重要 te buffer）由于EDTA螯合免费Mg 2+。每50 le反应体积的每个引物的下午20点）。过高的底漆浓度可以降低启动的特异性，从而导致非特异性产物。设计底漆时，我们建议使用Primer-Design软件，例如Primer3（http://frodo.wi.mit.edu/primer3）或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度，或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。引物应具有约60°C模板的熔化温度（TM）：反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。对于低结构复杂性（例如质粒DNA）的模板，我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。对于真核基因组DNA，我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA，这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板（例如te buffer）由于EDTA螯合免费Mg 2+。初始变性：对于非复合模板，例如质粒DNA或cDNA，建议在95°C下1分钟的初始变性步骤。对于更复杂的模板，例如真核基因组DNA，为了促进DNA的完全融化，需要更长的初始变性时间至3分钟。变性：我们的协议建议在95°C下进行15S循环变性步骤，这也适用于富含GC的模板，但是对于低GC含量（40-45％）模板，可以将变性时间降低到5s。退火温度和时间：最佳退火温度取决于底漆序列，通常比对下的TM低2-5°C。我们建议运行温度梯度以确定最佳退火温度，另外55°C可以用作起点。取决于反应，退火时间也可以减少到5s。
对主要编辑的特殊性的无偏见...
最近，由于它们在不同的领域中的应用，例如在催化剂，超级电容器，电容器，电池和其他储能系统中，因此高级材料引起了极大的兴趣[1-3]。21世纪的许多前进技术，例如电动汽车（和混合动力），便携式电子设备和可再生能源系统，推动了对高性能储能系统的需求[4]。对可加工，轻巧，灵活的储能材料的需求不断增长，这激发了学术界和行业的研究人员开发和制造新材料，这些材料可根据目标应用程序（包括环境应用程序）提供出色的特性[5，6]。基于高级材料在几种应用中的不同潜力的基础上，该特刊旨在介绍新的高级材料中最新的最新技术，以解决研究人员在此领域中针对许多应用程序的各种具有挑战性的问题，尤其是用于存储能源。在本期中，我们提出了12篇论文，其中包括一项出色的评论“可持续生物量活性碳作为电池和超级电容器的电极 - 一个迷你审查”和一篇沟通文章。在本期特刊中，我们介绍了最新的进步，这些进步涉及活跃研究人员在创新的高级材料和混合材料方面的新颖和最先进的主题，不仅涉及它们的合成，准备和表征，而且尤其是专注于具有出色表现的此类材料的应用。本期特刊已针对不同学科的读者。全面和基础研究已在本期特刊中发表，剑桥大学研究人员的第一个贡献为“碳基于黑色 - 盖烯的多模式 - 二苯基二甲基烯纳米复合材料的非等热结晶动力学”。在这项工作中，Ahmad等人。报告了基于结晶动力学的碳黑磷酸增强高密度聚乙烯（HDPE）复合材料的发现[7]。在这项工作中，使用非等温条件的纤维（碳黑 /石墨烯）从0.1到5 wt。％的不同比例制备了不同类型的复合材料。发现石墨烯含量以及冷却速率对结晶行为（PE-G纳米复合材料的非等温度）产生了很大的影响。发现，随着选定加固的冷却速率降低（例如，石墨烯含量），PE-G相对峰结晶温度得到了提高。以指定的冷却速率，发现随着石墨烯浓度的增强以及成核机制的转化，它会逐渐增加。从研究中得出结论，聚乙烯（PE）-G纳米复合材料的非等温结晶行为在很大程度上取决于石墨烯的含量和冷却速率。Cabello等人在他们的工作中探索了MGCL 2作为电解质的用法，以增加Li 4 Ti 5 O 12（LTO）电化学性能，作为下一代MG电池中新型阴极[8]。