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重要的考虑因素和PCR优化，最佳条件将从反应到反应，并取决于所使用的模板/引物。5x mytaq反应缓冲液：5x MyTAQ反应缓冲液包括5mm DNTP，15mm MGCL 2，稳定器和增强剂。每个组件的浓度已得到广泛优化，从而减少了进一步优化的需求。其他PCR增强剂，例如HISPEC，Polymate或Betaine等。。引物：正向和反向引物通常以0.2-0.6M的最终浓度使用。我们建议使用0.4M作为最终浓度（即每50 le反应体积的每个引物的下午20点）。 过高的底漆浓度可以降低启动的特异性，从而导致非特异性产物。 设计底漆时，我们建议使用Primer-Design软件，例如Primer3（http://frodo.wi.mit.edu/primer3）或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度，或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。 引物应具有约60°C模板的熔化温度（TM）：反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。 对于低结构复杂性（例如质粒DNA）的模板，我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。 对于真核基因组DNA，我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA，这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。 避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板（例如）很重要 te buffer）由于EDTA螯合免费Mg 2+。每50 le反应体积的每个引物的下午20点）。过高的底漆浓度可以降低启动的特异性，从而导致非特异性产物。设计底漆时，我们建议使用Primer-Design软件，例如Primer3（http://frodo.wi.mit.edu/primer3）或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度，或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。引物应具有约60°C模板的熔化温度（TM）：反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。对于低结构复杂性（例如质粒DNA）的模板，我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。对于真核基因组DNA，我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA，这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板（例如te buffer）由于EDTA螯合免费Mg 2+。初始变性：对于非复合模板，例如质粒DNA或cDNA，建议在95°C下1分钟的初始变性步骤。对于更复杂的模板，例如真核基因组DNA，为了促进DNA的完全融化，需要更长的初始变性时间至3分钟。变性：我们的协议建议在95°C下进行15S循环变性步骤，这也适用于富含GC的模板，但是对于低GC含量（40-45％）模板，可以将变性时间降低到5s。退火温度和时间：最佳退火温度取决于底漆序列，通常比对下的TM低2-5°C。我们建议运行温度梯度以确定最佳退火温度，另外55°C可以用作起点。取决于反应，退火时间也可以减少到5s。
mytaqtm DNA聚合酶
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