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高粱高粱醇溶蛋白基因定点诱变的双元载体构建
高粱 (Sorghum bicolor (L.) Moench) 是世界主要的农业生产谷物作物之一，在干旱地区具有特殊重要性。然而，与其他谷物不同，高粱的营养价值较低，这是由于其种子储存蛋白 (kafirins) 对蛋白酶消化具有抗性等原因造成的。提高高粱营养价值的有效方法之一是获得部分或完全抑制 kafirins 合成或改变 kafirins 氨基酸组成的突变体。利用基因组编辑可以通过在 α- 和 γ-kafirin 基因的核苷酸序列中引入突变来解决此问题。在本研究中，选择了基因组靶基序 (23 bp 序列) 以将突变引入高粱的 α- 和 γ-KAFIRIN 基因。使用在线工具 CRISPROR 和 CHOPCHOP 进行 gRNA 的设计。为 α-KAFIRIN (k1C5) 和 γ-KAFIRIN (gKAF1) 基因选择了两个最合适的靶标。在 BsaI (Eco31I) 位点将相应序列插入通用载体 pSH121。通过 DNA 测序验证克隆过程。使用 SfiI 限制位点将所得构建体亚克隆到兼容的二元载体 B479p7oUZm-LH 中。通过使用 MluI 和 SfiI 切割位点的限制分析确认二元载体的正确组装。通过电穿孔将创建的四个载体 (1C - 4C) 转移到农杆菌菌株 AGL0 中。目前，该载体系列用于使用未成熟胚外植体对高粱进行稳定转化。
1 验证关键生物能源基因功能的途径...
事件摘要确定基因功能是主要生物能源作物高粱 (L.) Moench 的一个重要目标，特别是与其显著的非生物胁迫耐受性相关的基因。然而，对与这些性状相关的基因的详细分子理解有限。我们对高粱进行的深入转录组研究表明了这一点，研究表明其近 50% 的转录组尚未注释。在本报告中，我们描述了转化高粱所需的全套工具，以便验证和注释基因。我们首先努力修改一种转化方法，该方法使用形态发生基因 Baby Boom 和 Wuschel2（胚珠发育蛋白 2）来加快转化速度并扩大适宜的基因型。根据我们的经验，转化不含形态发生基因的 RTx430 需要约 18 到 21 周，而使用含有形态发生基因的方法生成 T 0 植物则需要约 10 到 12 周。利用形态发生基因还可以转化几种以前未转化或历史上难以转化的高粱基因型，即快速循环 SC187、保绿 BTx642、BTx623 和甜高粱 Ramada。为了通过工程验证候选基因，同时引入形态发生基因，开发了一种称为利他转化的共转化策略。为了完成对目标基因（八氢番茄红素去饱和酶）的编辑，我们创建了新的构建体，其中也包括形态发生基因。为了能够全面表征转化植物，我们采用了技术来确定高通量水平的拷贝数和事件的独立性。通过这些努力，我们创建了一条从农杆菌感染到高通量分子基因分型的完整途径，可用于确定基因功能并加快这种广泛种植的生物能源作物植物的基础遗传研究。
Catherine W. Muui标题/资格：医生（博士）部门
1。A. M. Kimani，S。A。Henga，W。Kimani和C. Muui（2023）d正硅酸对干旱胁迫耐受性对高粱形态和表型特征的影响（Sorghum Bicolor（Sorghum Bicolor（L.）M ceench）。东非农业和attry J Yernal 87（4），pg。 189-203 2。 Kathuli P.，Kinama J M.，Kitonyo O. M.，Nguluu S. N.，Muui C. W.，Muasya R M（2023）氮肥对在肯尼亚半岛虫地区种植的选定高粱基因型的水利用效率的影响。 东非科学，技术与创新杂志5（1）。 3。 Kallen Kaaria，Joseph Gweyi-onyango和Catherine Muui（2023）：硅修订 - 在水压力下对高粱生长，产量和营养吸收的影响，植物营养杂志，杂志https://www.tandfonline.com/eprint/jnfxgbjjxqqwu7z53fb3/full?target=10.1080/01904167.202 3.222222132 4。 Phoebe Mudaki，Lydia N. Wamalwa，Catherine W. Muui，Felister Nzuve，Reuben M. Muasya，Simon Nguluu和Wilson Kimani（2023）。 使用达尔塞克（Dartseq）衍生的单核苷酸多态性（SNP）标记物的高粱（高粱双色（L.）Moench）地的遗传多样性和种群结构。 分子进化杂志。 https://doi.org/10.1007/s00239-023-10108-1 5。 Tegei，E。M.，Githendu，M。和Muui，C。W.（2023）。 二甲酰胺蛋白掺入聚丙烯储物袋对肯尼亚Trans Nzoia县储存的玉米种子的发芽百分比的影响。 欧洲应用科学杂志，第11（2）卷。 690-697。 doi：10.14738/aivp.112.14268。 6。 http://doi.org/10.3329/bjar.v42i3.34505 7。东非农业和attry J Yernal 87（4），pg。189-203 2。Kathuli P.，Kinama J M.，Kitonyo O. M.，Nguluu S. N.，Muui C. W.，Muasya R M（2023）氮肥对在肯尼亚半岛虫地区种植的选定高粱基因型的水利用效率的影响。东非科学，技术与创新杂志5（1）。 3。 Kallen Kaaria，Joseph Gweyi-onyango和Catherine Muui（2023）：硅修订 - 在水压力下对高粱生长，产量和营养吸收的影响，植物营养杂志，杂志https://www.tandfonline.com/eprint/jnfxgbjjxqqwu7z53fb3/full?target=10.1080/01904167.202 3.222222132 4。 Phoebe Mudaki，Lydia N. Wamalwa，Catherine W. Muui，Felister Nzuve，Reuben M. Muasya，Simon Nguluu和Wilson Kimani（2023）。 使用达尔塞克（Dartseq）衍生的单核苷酸多态性（SNP）标记物的高粱（高粱双色（L.）Moench）地的遗传多样性和种群结构。 分子进化杂志。 https://doi.org/10.1007/s00239-023-10108-1 5。 Tegei，E。M.，Githendu，M。和Muui，C。W.（2023）。 二甲酰胺蛋白掺入聚丙烯储物袋对肯尼亚Trans Nzoia县储存的玉米种子的发芽百分比的影响。 欧洲应用科学杂志，第11（2）卷。 690-697。 doi：10.14738/aivp.112.14268。 6。 http://doi.org/10.3329/bjar.v42i3.34505 7。东非科学，技术与创新杂志5（1）。3。Kallen Kaaria，Joseph Gweyi-onyango和Catherine Muui（2023）：硅修订 - 在水压力下对高粱生长，产量和营养吸收的影响，植物营养杂志，杂志https://www.tandfonline.com/eprint/jnfxgbjjxqqwu7z53fb3/full?target=10.1080/01904167.202 3.222222132 4。Phoebe Mudaki，Lydia N. Wamalwa，Catherine W. Muui，Felister Nzuve，Reuben M. Muasya，Simon Nguluu和Wilson Kimani（2023）。使用达尔塞克（Dartseq）衍生的单核苷酸多态性（SNP）标记物的高粱（高粱双色（L.）Moench）地的遗传多样性和种群结构。分子进化杂志。https://doi.org/10.1007/s00239-023-10108-1 5。Tegei，E。M.，Githendu，M。和Muui，C。W.（2023）。 二甲酰胺蛋白掺入聚丙烯储物袋对肯尼亚Trans Nzoia县储存的玉米种子的发芽百分比的影响。 欧洲应用科学杂志，第11（2）卷。 690-697。 doi：10.14738/aivp.112.14268。 6。 http://doi.org/10.3329/bjar.v42i3.34505 7。Tegei，E。M.，Githendu，M。和Muui，C。W.（2023）。二甲酰胺蛋白掺入聚丙烯储物袋对肯尼亚Trans Nzoia县储存的玉米种子的发芽百分比的影响。欧洲应用科学杂志，第11（2）卷。690-697。doi：10.14738/aivp.112.14268。6。http://doi.org/10.3329/bjar.v42i3.34505 7。Kathuli P.，Kinama J. M.，Kitonyo O. M.，Nguluu S. N.，Muui C. W.和Muasya R. M. 2023.氮肥对肯尼亚半干旱地区选定的高粱基因型的氮的使用效率和产量的影响。东非科学，技术与创新，技术与创新杂志4（2）。 Catherine Muui，Reuben Muasya，Ann Kambura，Simon Nguluu（2023）。 肯尼亚东部和沿海地区的高粱农民中的高粱农民之间的高粱知识和信息系统。 经济学与可持续发展杂志，第14卷，第4期，2023年www.iiste.org 8。 ngugi，M.M.，Muui，C.，Gweyi-onyango，J.P.，Maitra，S。和Gitari，H.I。 （2022）。 硅对绿叶蔬菜中易位的易位，分隔和铅的影响。 国际农业，环境与生物技术杂志15（01）：33-50（ijaeb：2022）9。 Moses M. Ngugi，Harun I. Gitari，Catherine W. Muui和Joseph P. Gweyi-Yonyango，2022年。 通过在蔬菜中使用硅的硅化重金金属的增长耐受性，浓度和摄取，国际植物学杂志，doi：10.1080/15226514.2022.2045251 ull？target = 10.1080/15226514.2022.2045251 10。 Kallen G. Kaaria，Joseph P. Gweyi-onyango，Catherine W. Muui，2021年。 水制度对高粱的生长，产量和营养吸收的影响。 非洲园艺科学杂志，第1卷。 18号 2：1-20。 2021年6月https://journal.hakeny.net/index.php/ajhs/issue/view/19 11. Bioremediatian Journal。东非科学，技术与创新，技术与创新杂志4（2）。Catherine Muui，Reuben Muasya，Ann Kambura，Simon Nguluu（2023）。肯尼亚东部和沿海地区的高粱农民中的高粱农民之间的高粱知识和信息系统。经济学与可持续发展杂志，第14卷，第4期，2023年www.iiste.org 8。ngugi，M.M.，Muui，C.，Gweyi-onyango，J.P.，Maitra，S。和Gitari，H.I。（2022）。硅对绿叶蔬菜中易位的易位，分隔和铅的影响。国际农业，环境与生物技术杂志15（01）：33-50（ijaeb：2022）9。Moses M. Ngugi，Harun I. Gitari，Catherine W. Muui和Joseph P. Gweyi-Yonyango，2022年。通过在蔬菜中使用硅的硅化重金金属的增长耐受性，浓度和摄取，国际植物学杂志，doi：10.1080/15226514.2022.2045251 ull？target = 10.1080/15226514.2022.2045251 10。 Kallen G. Kaaria，Joseph P. Gweyi-onyango，Catherine W. Muui，2021年。 水制度对高粱的生长，产量和营养吸收的影响。 非洲园艺科学杂志，第1卷。 18号 2：1-20。 2021年6月https://journal.hakeny.net/index.php/ajhs/issue/view/19 11. Bioremediatian Journal。通过在蔬菜中使用硅的硅化重金金属的增长耐受性，浓度和摄取，国际植物学杂志，doi：10.1080/15226514.2022.2045251 ull？target = 10.1080/15226514.2022.2045251 10。Kallen G. Kaaria，Joseph P. Gweyi-onyango，Catherine W. Muui，2021年。 水制度对高粱的生长，产量和营养吸收的影响。 非洲园艺科学杂志，第1卷。 18号 2：1-20。 2021年6月https://journal.hakeny.net/index.php/ajhs/issue/view/19 11. Bioremediatian Journal。Kallen G. Kaaria，Joseph P. Gweyi-onyango，Catherine W. Muui，2021年。水制度对高粱的生长，产量和营养吸收的影响。非洲园艺科学杂志，第1卷。18号2：1-20。 2021年6月https://journal.hakeny.net/index.php/ajhs/issue/view/19 11. Bioremediatian Journal。2：1-20。2021年6月https://journal.hakeny.net/index.php/ajhs/issue/view/19 11.Bioremediatian Journal。Moses Ngugi，Harun Groomri，Catherine Mui和Joseph Onyango Gweyi，2021年。受硅肥料影响的菠菜，羽衣甘蓝和果酱蔬菜的镉迁移，摄取和效果。doi：10.1080/10889868.2021.1924111 https://www.researchgate.net/publication/351108116 12。2。2。2。2。2。Catherine Mui，Reuben Muasya，Simon Nguluu，Anne Kambara和Kallen Gacheri，2020年。看到了与来自东部，海岸和Nyanza的农民储存的高粱相关的细菌病原体
_____________________________________________________________________________________________________ *Corresponding author: E-mail: navyashreeshakti
通过CTAB方法提取，这是一种获得高质量DNA的公认方案。量化DNA样品，以确保通过25 SSR引物扩增的一致模板浓度。PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，以分离和可视化SSR带模式，然后根据频带的存在或不存在二进制矩阵格式记录。在所使用的SSR引物中，有9个是多态性的，产生了13个可记分标记，突出了基因型之间的遗传变异性。跨SSR基因座的多态性信息含量（PIC）值，XTXP145基因座的最高PIC值为0.998，表明其在基因型之间区分的高歧视能力和信息性。遗传相似性指数，并通过使用算术平均值（UPGMA）方法对数据进行群集分析。所产生的树状图将基因型分为七个主要簇，以50％的相似性阈值分组，强调了所研究的高粱基因型中存在的遗传多样性。群集I包含单个基因型SVD-1272R，而群集II包括七个具有亚集群形成的基因型。群集III包括一个未分组的基因型SPV-486。群集IV包括八种基因型，而簇V，VI和VII均包含一个单一的未分组基因型。该树状图说明了高粱基因型之间的遗传多样性和关系，基于相似性指数。1。这项研究的结果证实了SSR标记在评估遗传多样性方面的功效，并强调了它们在旨在提高干旱耐受性的繁殖计划中的潜在效用。关键字：高粱； SSR;图片底漆；相似性指数。简介高粱[高粱双色（L.）Moench]，被称为“小米之王”，其谷物尺寸较大，是Kharif（Rainy）和Rabi（Postrainy）季节种植的一种关键谷物作物。在印度，马哈拉施特拉邦，卡纳塔克邦和安得拉邦是产生高粱的主要国家，占国家产出的80％，占全球生产的约16％。尽管只有5％的高粱区域被灌溉，但毛毛高粱对于印度半岛的雨林地区至关重要。干旱应力对高粱的生理和生化过程产生负面影响，需要改善干旱耐受性特征，例如根生长，叶片发育和用水效率[2]。然而，由于谷物填充和圆锥花槽大小的应力程度相互作用，这些特征的表型选择是复杂的[3]。要应对这些挑战，评估高粱基因型的遗传多样性[4]和干旱耐受性至关重要[5]。栽培物种中的遗传多样性是提高作物生产率和质量以及发展耐药性品种的宝贵资源。分子标记物，尤其是简单的序列重复（SSR），为评估遗传变异和鉴定耐旱基因型提供了强大的方法[6]。SSR标记，由于其高可重现性和多重变化，对于基因组映射和标记 -
亚马逊生物群中的高粱青贮饲料的营养价值和发酵性
Abbot，E。B. （2020）。 他们与巴西的翅膀相关。 ，99，105106。 （2013）。 巴西气候分类。 Zeitschrift，22（6），711 - 728。 （2022）。 方法9 - 雏菊II孵化器中的酸性确定。 技术。 ADF方法，9，3。 AOAC。 （1990）。 化学化学办公室。 合作。 法律。 化学。 Argenta，F。M.，Brondani，I。L.，Filho，D。C. A.，Restore，J.，Segabinazzi，L.，Cattelam，J。，来自Paula，P.C。教学，O。 （2014）。 新手骨骼带有Silgem Silagmous Silhagine（高粱双色[L.] Mount）B。Semin：Systems Agrarias，35（2），951 - 962。 Behling，A.，Reiz，R。H. P. D.，L。D. S.，监狱。 不同用途的sor silge的营养价值。 环境和农业，41（3），288 - 299。 伯纳德（T. F.），丹尼尔（Daniel） （2018）。Abbot，E。B.（2020）。他们与巴西的翅膀相关。，99，105106。 （2013）。 巴西气候分类。 Zeitschrift，22（6），711 - 728。 （2022）。 方法9 - 雏菊II孵化器中的酸性确定。 技术。 ADF方法，9，3。 AOAC。 （1990）。 化学化学办公室。 合作。 法律。 化学。 Argenta，F。M.，Brondani，I。L.，Filho，D。C. A.，Restore，J.，Segabinazzi，L.，Cattelam，J。，来自Paula，P.C。教学，O。 （2014）。 新手骨骼带有Silgem Silagmous Silhagine（高粱双色[L.] Mount）B。Semin：Systems Agrarias，35（2），951 - 962。 Behling，A.，Reiz，R。H. P. D.，L。D. S.，监狱。 不同用途的sor silge的营养价值。 环境和农业，41（3），288 - 299。 伯纳德（T. F.），丹尼尔（Daniel） （2018）。，99，105106。 （2013）。巴西气候分类。Zeitschrift，22（6），711 - 728。（2022）。方法9 - 雏菊II孵化器中的酸性确定。技术。ADF方法，9，3。AOAC。 （1990）。 化学化学办公室。 合作。 法律。 化学。 Argenta，F。M.，Brondani，I。L.，Filho，D。C. A.，Restore，J.，Segabinazzi，L.，Cattelam，J。，来自Paula，P.C。教学，O。 （2014）。 新手骨骼带有Silgem Silagmous Silhagine（高粱双色[L.] Mount）B。Semin：Systems Agrarias，35（2），951 - 962。 Behling，A.，Reiz，R。H. P. D.，L。D. S.，监狱。 不同用途的sor silge的营养价值。 环境和农业，41（3），288 - 299。 伯纳德（T. F.），丹尼尔（Daniel） （2018）。AOAC。（1990）。化学化学办公室。合作。法律。化学。Argenta，F。M.，Brondani，I。L.，Filho，D。C. A.，Restore，J.，Segabinazzi，L.，Cattelam，J。，来自Paula，P.C。教学，O。（2014）。新手骨骼带有Silgem Silagmous Silhagine（高粱双色[L.] Mount）B。Semin：Systems Agrarias，35（2），951 - 962。 Behling，A.，Reiz，R。H. P. D.，L。D. S.，监狱。不同用途的sor silge的营养价值。环境和农业，41（3），288 - 299。伯纳德（T. F.），丹尼尔（Daniel）（2018）。青贮饲料评论：在寒冷地区制造的青贮饲料的独特挑战。乳业科学杂志，101，4001 - 4019。https：//doi.org/10.3168/jds.2017-13703 Borreani，G.，Tabacco，E.青贮饲料评论：影响干物质和青贮饲料质量损失的因素。乳业科学杂志，101，3952 - 3979。https：// doi.org/10.3168/jds.2017-13837 Braga，A。，＆Laurini，M。（2024）。巴西生物群落气候变化影响的空间异质性。科学报告，14（1），16414。https：//doi.org/10.1038/S41598-024-024-67244-X Chaney，A.L。，＆Marbach，E。P.（1962）。修饰试剂，用于确定尿素和氨的确定试剂。临床化学，8，130 - 132。https：// doi.org/10.1093/clinchem/8.2.130 Costa，R。F.，Pires，Pires，D。A. D. A.A. S.和Rigueira，J。P. S.（2016）。 高粱基因型的农艺特征和青贮饲料的营养价值。 Acta Scientiarum。 动物科学，38，127 - 133。https：//doi.org/10.4025/ actascianimsci.v38i2.29567A. S.和Rigueira，J。P. S.（2016）。高粱基因型的农艺特征和青贮饲料的营养价值。Acta Scientiarum。动物科学，38，127 - 133。https：//doi.org/10.4025/ actascianimsci.v38i2.29567
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为什么加拿大制造的Laribee吉他好？ Laribee吉他于1968年在加拿大多伦多开始制造，并于1977年搬到加拿大环太平洋沿岸的不列颠哥伦比亚省维多利亚，创造了我们独特的吉他。声音使用来自高森林的优质云杉和雪松。 当它于 20 世纪 70 年代末传入日本时，其高品质令人惊叹，并获得了想要像 Martin 和 Gibson 那样细腻声音的用户的支持。精美的镶嵌作品是Larrivee吉他的特色之一，是由Gene Larrivee的妻子Wendy创作的。今天十年级的情况仍然如此。 20 世纪 70 年代末，包括他的妻子 Wendy 在内的 8 名工匠每月生产约 30 瓶葡萄酒。 这一时期的吉他据说是Laribee的黄金时代，抵达日本的少数10级吉他售价超过了Martin的D-45。我想可以说，这为Somogi这样的手工吉他今天被日本乐迷所接受奠定了基础。 除了产品的质量和声音的质量之外，还应该考虑民族主义的方面。虽然他们的销量不如Martin和Gibson，但他们很早就在努力表达自己的加拿大特色，并且一直讲究在加拿大生产产品。他们融入了当时不符合美国时尚的东西，例如“木质装订”、“制作精美的玫瑰花饰”、“透明护板”和“具有欧洲文艺复兴风格的镶嵌设计”。这种叛逆精神吸引了那些厌倦了美国文化消极方面（例如越南战争和全球化）的人们。有一个轶事，在吉他发展的早期，一位美国自由主义音乐家在听到有关Laribee吉他的谣言后，在多伦多的街道上徘徊，寻找一把Laribee吉他。 2001 年 9 月，Larrivee 搬迁至加利福尼亚州的一家新工厂，以进一步扩张。由于美国市场是他们最大的客户，该公司自然希望降低出口成本。然而，这让粉丝们非常失望，他们认为这是一把值得骄傲的加拿大吉他，而不是前面提到的美国吉他，这一事实是有意义的。日本粉丝也是如此。如果您想要一把来自美国西海岸的吉他，泰勒吉他就足够了。未能立即提高加州工厂的质量也增加了现有粉丝的失望。 目前，创始人吉恩·拉里维（Gene Larrivee）、他的妻子温迪（Wendy）、次子马修（Matthew）和女儿克里斯汀（Christine）在加利福尼亚州的一家工厂工作。长子吉恩·拉里维 (Gene Larrivee Jr.) 负责加拿大温哥华的工厂。独自留在加拿大的他对于在工厂度过的时光有何感想？ 我无从了解他个人的挣扎，但他回应了我的评论“加拿大制造的10级吉他很好”，并为《LAST GUITAR》的开场制作了一把吉他，我不禁认为有。这不仅仅是简单地接受请求。熟练的工匠在一条单独的生产线上工作。 是的，我想他想证明这一点。自豪地在加拿大制造。第一批已经到了。使用温迪的镶嵌物，图案为留在加拿大的阿拉丁和神灯精灵，以及 AAA 级核心。
阿贾耶·德乌干 Ka Gana 平台
使用上述协议。瑞典印度尼西亚村庄的肖像小企业和企业家，也称为晶体管 mos。随着用户输入的字符逐个字符地出现在所有用户屏幕上，brown 和 woolley 消息发布了基于网络的 talkomatic 版本，通过超链接和 URL 链接。最后，他们确定的所有标准成为了新协议开发的先驱，该协议现在被称为 tcpip 传输控制协议互联网协议，通过超链接和 url 连接。Knnen sich auch die gebhren ndern，dass 文章 vor ort abgeholt werden knnen。